인간의 건강과 병리학 적 뇌 조건을 연구에 절단 대칭 Bihemispheric 사후 뇌

요약

조직 뇌 절단 절차는 최종 신경 병리학 진단과 특정 신경 정신 현상의 상관 관계를하는 것이 필요하다. 뇌 잘라 다양한 임상 및 학술 우발 상황에 따라 다르게 수행됩니다. 이 프로토콜은 인간의 뇌의 병리에 반구의 차이를 조사하고 현재와 미래의 생체 분자 / 뇌 영상 기술을 극대화하기 위해 대칭 bihemispheric 뇌 절단 절차를 설명합니다.

초록

Neuropathologists는 때때로 뇌 부검 요청 된 누구 환자에 기재된 복합 신경 현상에 대한 확실한 진단을 생성하는 데 필요한 지식의 양에 의해 위협을 느낀다. 생물 의학 과학 및 신경 영상의 발전은 신경 정신 분야에 혁명을했지만, 그들은 또한 뇌 부검 만 확증 값을 가지고 있다는 잘못된 생각을 생성했다. 이것은 잘못된 생각 때문에, 감소 된 가능성은 인간 두뇌 아직 알려지지 않은 많은 정상 및 병리학 적 특징을 이해하는데 필요한 상세 광범위한 신경 병리학 조사를 수행하기 위해, 부검 비율의 급격한 감소를 만들어. 관찰 된 신경 정신 현상과 가능한 neurohistological 상관 관계의 대응 현지화 / 특성 사이의 상관 관계의 전통적인 추론 방법은 부정 할 수없는 값이 계속됩니다. neuropsychi의 맥락에서그것은 뇌 조직의 직접적인 물리적 평가에 특히 의존하기 때문에 atric 질환, 기존의 임상 병리학 적 방법은 여전히 ​​해당 신경 병리학 기판에 독특한 신경 기능을 연결하는 최상의 방법 (종종에서만 사용 가능)입니다. 사후 뇌의 평가는 뇌가 다른 신경 병리학 센터마다 다를 절차를 절단을 기반으로합니다. 뇌 잘라 각 기관에 존재하는 다양한 임상 및 학술 사태에 따라 비교적 광범위하고 체계적으로 수행된다. 보다 해부학 포함 대칭 이중 반구 뇌의 절단 방법은, 적어도 깊이 특정 대한 인간의 뇌 (예를 들어, 반구 특성화 및 재화의 특수성과 정상 및 병리학 적 상태에서, 코 히어 런트 조사 인간 병리학 연구 목적을 위해 사용되어야 기능). 보다 포괄적 이거를 제공 할 것 이러한 방법현재와 ​​미래의 바이오 및 뇌 영상 기술을 사용할 수 neuropathologically 잘 특성화 뇌의 ction. 우리는 인간의 뇌의 병리에 반구 차이의 조사 및 전류에 사용뿐만 아니라 미래의 생체 분자 / 뇌 영상 기술에 대한 대칭 이중 반구 뇌 절단 절차를 설명합니다.

서론

Neuropathologists는 인간의 두뇌를 평가하는 과학적인 권한, 지적 명예 및 진단 의무가 있습니다. 수십 년 동안, 뇌 질환 및 주요 노력의 상세한 임상 설명은 인간의 사후 뇌에서의 가능한 neurohistological 상관 관계가 수행 된 개별화합니다. 역사적으로, 이러한 노력은 특히 의료 과학, 신경이, 현대 시대에 진출하는 가장 생산적인 양상을 나타낸다. 이전 저명한 neuropathologists과 헌신, 결정, 장학금, 그리고 놀라운 능력 덕분에 (종종 매우 루디 멘털 도구를 사용하여) 정상 및 비정상 뇌 조직을 구별하기 위해, 우리는 지금 조사 할 수 및 알츠하이머-Perusini 병으로 대상 질환 (부당에만 호출 알츠하이머 병; APD / AD) ^(1), 파킨슨 병 ^(PD)이, 크로이츠 펠트 - 야콥병 (CJD) ^3, - 루 게릭 병 / 루게릭 Sclerosi의 (ALS) ^4, 괌 질환 ^(5)는, 몇 가지를 언급합니다.

, 기능 및 형태 학적 자기 공명 영상 (즉, 자기 공명, 확산 MRI, tractography-MRI 등), 양전자 방출 단층 촬영, 이러한 고해상도 컴퓨터 단층 촬영 (CT 혈관 조영술 즉, 멀티 섹션 나선형 CT 스캔) 등의 신경 영상의 고급 기술, (PET), 초음파 기반 이미징, 그리고 다른 사람은 확실하게 진단하고 신경 및 정신과 환자를 치료하는 방법에 대한 일반적인 접근 방식을 수정했습니다. 그럼에도 불구하고, 신경 영상 기법 살아 그들이 직접적 뉴런 세포의 고도로 복잡한 세포 및 세포 내 구조물을 분석하기 위해 상기 발생 순간에 기회를 제공하지 않을 때 사람의 뇌를 가시화 할 수 있지만; 또는, 마크 시각화 및 세포 내 병변의 특정 유형을 정량화하는 단계; 또는 정확하게 circuital 및 서브에서 자신의 신경 해부학 적 또는 소 지역 현지화를 나타냅니다circuital 해부학 수준. 예를 들어, 뇌 영상 기법의 entorhinal 피질에서 AD의 고전적인 기능을 Substantia 그라 (SN), PD와 관련된 공통의 병리학 적 특징, 또는 신경 섬유 엉킴 (NFT)의 착색 된 신경 세포에서 루이 기관 (LB)를 식별하거나 지역화 할 수 없으며, 다른 뇌 병변. 첨단 디지털 현미경과 함께 신경 병리학 적 조사는 최종 진단을 위해, 따라서 아직 자세한 임상 병리학 적 상관 관계에 대한 unreplaceable하고.

인해 인간의 뇌 특이 anatomo 관능 특성, 특히 해부학 현지화 (즉, 두개골, 그 양은 직접 검사를 허용하지 않는 자연 보호 시스템 내부), 생체 내에서 신경 영상 기술의 도입 이 복잡한 조직의 신비의 일부 초기 답을 찾을 수있는 매우 도움이 임상의와 연구자가 있습니다. 그러나, 임상 또는 neuroimagi가 없습니다직접 부검 뇌 조직을 분석 할 수있는 독특한 기회를 대체 할 수 NG 방법. 만 조직 수집, 보존, 인간 두뇌의 분류 신경 세포와 비 신경 세포들은 세포 내 성분, 세포 내 및 세포 병리학 적 병변의 직접적이고 체계적인 조사를 허용 할 수 있으며, 뇌 내부의 이상을 모든 종류의는, 확인, 수정 또는합니다 임상 진단을 재정의하고 새로운 임상 병리학 적 상관 관계를 발견 할 수 있습니다. 부검 뇌에서의 평가에 관한 분명한 제한 중 하나는이 절차 단면 방법론 사실이었다. 항상 지속적인 신경 병리학 적 과정 (임상 발현 여부) 및 neurohistological 수준을 정의 할 수있는 기회 (있는 경우) 사이에 지연이있을 것입니다. 이 자체를 다시 생성 할 인간 두뇌의 무능력에 주로 기인한다. 이 PE를 생성하지 않고, 생체 내에서 뇌 조직을 얻는 것이 현재 불가능rmanent 손상. 결과적으로, 세로 방향과 같은 뇌 neuropathologically / 사람을 평가하는 것은 불가능하다. 그러나 표준화 된 뇌 은행 절차 및 일반 대중 사이에 뇌의 기부에 대한 증가에 대한 인식이 크게 지속적으로 수집하고 분석 할 수있는 경우의 수를 증가시켜 뇌 부검 타이밍 문제의 해결에 기여할 수있다. 이와 같이, 사후 뇌의 더 충분한 숫자는 각각 인간의 뇌 질환과 관련된 뇌 병변의 각각의 특정 유형에 대한 병리학 적 기원과 진행 일정한 패턴을 정의하기 위해 얻어 질 수있다. 이 모든 연령대에 걸쳐 기부하고 가능한 한 많은 두뇌를 수집하는 신경 정신 장애에 의해 영향을받는 환자뿐만 아니라에서 건강한 대조군을 필요로한다. 한 가지 가능한 방법은 표준 루틴으로 일반 및 전문 의료 센터에서 가능한 한 많은 사후 뇌를 수집 할 수있다. 뇌 기부의 필요성은 최근에 표현 된치매 정상적인 노화 ^(6)을 연구하는 사람들에 의해. 동일한 필요성은 전체 신경 필드에 의해 표현 될 것이다.

다른 이유 전술과에 대한 지속적인 뇌 절단 절차의 업데이트가 필요합니다. 또한, 절차를 절단 뇌는 세계적으로도 더 나은 결정적 원인과 뇌 질환의 메커니즘, 이해, 희망, 조사하고 현재와 미래의 생명 공학 기술을 적용 할 수있는 가능성 계정에 복용, 세계의 다른 신경 병리학 연구 센터를 통해 표준화되어야한다 인간.

여기서, 주로 연구 목적을 위해, 우리는 사후 뇌 인간 절단 대칭 방법론을 설명한다. 이 절차는 일반적으로 수행보다 두 대뇌와 소뇌 반구에서 더 많은 뇌 영역을 수집 제안한다. 대칭 이중 반구 뇌 절단 과정은 인간의 현재의 지식을 매우 잘 맞는 것입니다신경 해부학, 신경 화학 및 신경 생리학. 이 방법은 또한 가능성이 neuropathologically 같은 높은인지 비인지 기능 일반적으로 또는 독점적으로 본 우리의 종과 관련된 반구 전문화 및 재화 등의 인간의 뇌의 고유 기능을 분석 할 수 있습니다. 반구 전문 / 재화 및 뇌 병변 특정 유형의 사이에 특정 병 인적 관계가 있는지, 또는 특이한 신경 정신 병리학 이벤트가 있는지 여부를 초기에 prevalently, 또는 독점적으로 특정 반구와 연관 기능은 현재 알려져 있지 않다. 이 대칭 뇌 절단 절차를 설명함으로써, 우리는 더 나은 고도로 전문화 된 조직에서 정상 및 병적 상태, 뇌를 이해하는 데 도움이 될 인간의 뇌 해부의 업데이트 방법을 제안하는 것을 목표로하고 있습니다. 이 방법은 고려 만 인간에 존재하는 모토-기능 반구 측면을합니다.

프로토콜

사후 인체 조직을 포함하는 절차는 기관 검토위원회의 검토 및 45 CFR (연방 규정 코드)에서 면제되었다.

참고 :이 프로토콜은 인간의 신경 병리학 적 연구에 대한 최종 사후 뇌 평가를위한 대칭 bihemispheric 뇌 절단 절차를 설명합니다. 인간의 뇌 절단을 수행하는 데 필요한 장치, 장비, 재료 및 소모품의 상세한 설명은 제외됩니다. 뇌 해부 용 재료 및 소모품은 단일 연구자의 재량에 따라 선택되고 허용 또는 각 연구 기관에서 승인 부검 도구를 기반으로합니다. 이 절차에 필요한 도구와 재료의 최소한의 세트는 소재 / 장비의 표에 설명되어 있습니다. 특정 절단 절차와 인간 CJD로 의심되는 전염성 뇌 질환에 대한주의 사항이 원고의 목적 밖에 다른 소스 ^7에서 사용할 수 있습니다.

1. 대칭 양성반구 뇌 절단

참고 : 2 ~ 3 주 동안의 periagonal, 신진 대사에 따라 (즉, 산도) 및 조직 보존 ((중립 버퍼 10 % 포르말린 예를 들어, 사용) 뇌가 필요한 조직 고정을받은 있는지 확인 즉, 온도) 조건. 그러나, 결상 병리학과 상관 관계 연구 고정의 장기간 (> 5.4 주) ^(8)이 제안되었다.

1. 연구자에 대하여 반대 방향으로 향하는 정면 극으로 연구자 대향 평평한 뇌 놓는다.
2. 모든 피질 뇌회 (gyri) 전체 뇌 (도 1a)의 sulci 완전하고 명확한 시각화를 허용하는 방식으로 뇌에 놓는다.
3. 수막 이상에 대한 첫 번째 모습, 거시적 반구 비대칭 (초점, 엽성, 또는 위축의 일반화 된 반구 현상 가능한 지표), 거시적 tissutal 병변 (즉, tumoRS 또는 탈출증), 선천성 기형, 혈관 이상, 그리고 다른 가능한 이상 또는 대뇌 표면의 특별한 프리젠 테이션.
   참고 : 인간의 두뇌를 평가하는 방법에 대한 자세한 설명은 시판 신경 병리학 교과서 및 부검 매뉴얼 ^9,10 참조하십시오.

2. 프로토콜 시퀀스

1. 연구자가 직면하고있는 반구 (telencephalon)의 피상적 인 측면, 멀리 조사에서 정면 기둥에 직면하고 있습니다. 가능한 매크로 이상을 기록하고 수의 임상 신경 해부학 및 사후 절단 고려 사항을 고려하여 각각의 특정 경우에 필요한만큼의 디지털 사진을 촬영합니다. 연구 조교 전체 대뇌 피질의 표면을 캡처하는 뇌에 수직으로 디지털 사진을 한 (그림 1a를 - 다).
2. 마크 프리 뇌를 절단하기 전에 잉크 또는 컬러 바늘을 사용하여 postcentral 대뇌 피질의 뇌회 (gyri) (그림 1b ).
   주 :이 절차는 모터 및 절단 후의 주 체성 감각 피질보다 즉시 인식을 용이하게한다.
3. 이 같은 방향으로 향하게 유지하면서 180도 두뇌 회전 (즉, 조사에서 멀리 직면하고있는 정면 기둥). 조심스럽게 뇌의 기반을 검사합니다. 뇌 혈관 시스템의 상태 (즉, 기저 및 척추 동맥과 윌리스의 원) 자신의 뇌간 출구 / 입구 수준 및 뇌 신경에 특별한주의를 기울이십시오. 그들의 극단적 인 나약함에, tissutal 열상을 방지하기 위해 특별한주의와 함께 후각 전구 및 소책자를 관리합니다.
   1. 가능한 매크로 이상을 기록하고 수의 임상 신경 해부학 및 사후 절단 고려 사항을 고려하여 각각의 특정 경우에 필요한만큼의 디지털 사진을 촬영합니다. 연구 조교는 대뇌 피질과 뇌간 표면의 전체를 캡처 수직으로 뇌에 디지털 사진을 찍을 수 있습니다.
4. 뇌의베이스를 마주 메스를 사용하여, (뇌의베이스에 가능한 한 가깝게) 뇌교의 상부의 레벨에 뇌간 횡 절단. 조심스럽게 ¹¹ (창백위한 즉,)에 SN을 검사하고 다른 이웃 구조 ^12. 아마도 정상적인 뇌 ^(13)에 비해 뇌의 특이한 외관, 오디오 레코더 장치를 이용하여, 양지.
5. 다시 내측 종 방향 균열을 통해 중앙에서 뇌량을 절단하고 전두 - 후두 방향에 따라 두 개의 반구를 분리, 날카로운 칼을 사용하여, 180도 뇌를 회전합니다. 가능 (예를 들어, 심실 확대 한, 기형, 조직의 연화, 종양 등)의 이상 ^(13)에 대한 각 반구의 각 측면을 검사합니다. 도 2a를 참조하십시오.
   1. 가능한 매크로 이상을 문서화하는 각각의 특정 경우에 필요한만큼의 디지털 사진을 촬영하고수의 임상 신경 해부학 및 사후 절단 고려 사항을 설명합니다. 연구 조교 전체 대뇌 피질의 표면을 캡처하는 수직 뇌에 디지털 사진을 찍을 수 있습니다. 정상적인 뇌에 비해 뇌의 비정상적인 기능을 기록해 둡니다.
6. 도 2b에 도시 된 바와 같이, 전두엽이 떨어져 조사원으로부터 향하게 그 내측 측면에 누워 두 반구 평 놓는다. 그들의 센터 (표시 반구 비대칭의 경우에도) 터치 방식으로 배치합니다.
7. 날카로운 칼을 사용하여 수동으로 정면 기둥에서 시작하여 반구의 전체 길이를 통해 후두 극으로 이동, 두 대뇌 반구를 잘라. (각 반구 18 석판 정도) 뇌 조직의 1cm 두께의 블록이 시리즈를 가져옵니다.
8. 별도의 평평한 표면에 해부학 적 조직 (전두 - 후두 방향) 순서로 뇌 슬라브를 놓습니다. 흰색 표면 처를 사용촬영할 때 더 나은 대비를 위해 인쇄 통치자와 CE. 자신의 관상면 직접 눈 검사 및 디지털 사진 (그림 3a) 볼 수 있는지 확인하고, 해부학 대칭 방법 (전두 - 후두 방향)으로 뇌 석판의 두 시리즈를 표시합니다. 보다 정확한 방법으로 뇌의 구조, 크기 및 수 이상을 국산화 양면에 인쇄 millimetric 그리드와 절단 표면을 사용합니다.
   1. 가능한 매크로 이상을 기록하고 수의 임상 신경 해부학 및 사후 절단 고려 사항을 고려하여 각각의 특정 경우에 필요한만큼의 디지털 사진을 촬영합니다. 연구 조교 전체 대뇌 피질의 표면을 캡처하는 수직 뇌에 디지털 사진을 찍을 수 있습니다. 정상적인 뇌에 비해 뇌의 비정상적인 측면의, (아마도 오디오 레코더 장치를 사용) 참고하십시오.
9. 날카로운 메스를 사용하여 수동으로 작은 사각형 블록을 해부각 설립 대뇌 지역의 뇌 조직. 표 1에 기술 된 제안 된 뇌 영역 수집 방식을 따릅니다.
   1. 별도로 표시 histocassettes의 각 조직 블록을 넣습니다.
      주 : 뇌 조직의 각 블록은 최대한 맞게 절단해야 표준 histocassette 최대 볼륨 (30 X 20 X 4mm ^3).
   2. 각각의 경우의 역 식별 코드를 이용하여 특정 신경 해부학 식별자를 사용 histocassettes 라벨 (다른 뇌 랜덤 문자 또는 숫자를 사용하지 않는, 표 1에 나타낸 바와 같이 오히려 항상 해부학 이름 또는 해당 번호와 동일한 지역 사용). 생성 드 식별 코드, 예를 들면, 즉 BRC 130 B는 뇌 유지 여기서, R은 리소스에 대한 유지, C는 센터에 대해 유지 (130)가 프로그레시브의 가입 또는 AD160001이다 (각각의 경우에 대해 랜덤 또는 세미 - 난수를 발생시킴으로써, AD가 약자 여기서 "알츠하이머 질환 연구,"16 인올해 부검가 프로그레시브 가입 표본 번호 (2016)를 수행하고, 0001 때).
      참고 :이 단계는 미래 연구에 매우 도움이된다; 전설을 유지하고 반구 (L = 왼쪽 반구, R = 오른쪽 반구)를 지정합니다. 각 반구에 대한 특정 색상을 설정, histocassettes의 두 개의 서로 다른 색상을 사용합니다.
   3. 가능한 macroanomalies을 기록하고 수의 임상 신경 해부학 및 사후 절단 고려 사항을 고려하여 각각의 특정 경우에 필요한만큼의 디지털 사진을 촬영합니다. 연구 조교 전체 대뇌 피질의 표면을 캡처하는 수직 뇌에 디지털 사진을 찍을 수 있습니다. 정상적인 뇌에 비해 뇌의 비정상적인 기능을 기록해 둡니다.
10. 디지털 사진을 촬영 전체 컷 뇌와 관련된 histocassettes의 (필요하거나 원하는 많은 등).
11. (아큐 펀치에 의해 예) 펀치 DNA 추출 및 유전자 분석을위한 조직의 작은 조각. 용도직경 5mm - 2의 펀치.
    참고 : 게놈 소재의 높은 내용의 소뇌가 바람직한 선택이 될 것입니다; 그러나, 다른 지역은 괜찮습니다.
12. 이전 조직 처리의 다음 단계까지 사용 된 고정 제 용액 (예, 10 % 중성 완충 포르말린)와 동일한 유형의 뇌 조직 블록을 포함하는 모든 histocassettes 다시 담가.
13. 인간의 포르말린 고정 조직 처리 ^(14)에 대한 표준 절차를 따르십시오.

3. 특별 접근 방식 : 교류 냉동과 고정 대칭 Bihemispheric 절단

주 : (2)에서 설명한 대칭 bihemispheric 뇌 절단 프로토콜은 동일한 체계적이고 대칭 방식으로 미 정착 신선한 뇌 조직에서 석판 절단 가능성 (이용 가능) 제공한다.

1. A의 10 분 -80 C의 냉동고 ° 뇌 조직을 강화하는 withou - 거꾸로 (바람직하게는 반구형 그릇 모양의 플라스틱 표면에) 8 전체 신선한 뇌를 배치t는 생화학 적 손상을 유발하고 수동 절단을 용이하게 할 수 있습니다.
2. 날카로운 칼을 사용하여, 제 2 항에 기술 된 뇌 절단 프로토콜에 따라 다른 연속적인 방식으로 두 반구를 잘라하지만, 동결의 (a 전두 - 후두 해부학 적 방향 양쪽 반구에서와 함께) 다른 모든 슬래브를 수정합니다.
   1. 이 때, 표 1에 기재된 바와 같이, 각 뇌 영역을 절단하지 않는다. 즉시 RNA 또는 단백질 추출 (즉, 유전체 또는 단백체 연구를위한) ¹⁵ 필요한 경우에만 특정 신선한 뇌 영역을 잘라.
3. 절단 후, 즉시 각 신선한 조직을, 라벨을 동결하고, 수. 전체 슬래브 시리즈의 디지털 사진을 촬영; 하나의 비닐 봉투의 각 슬래브 팩; 별도의 한 뇌 전용 용기에 슬래브를 수집; 및 전용 -80 ° C 냉장고에 컨테이너를 저장합니다.
   주 : 냉동 인간 뇌 조직에만 전념해야한다. 만 나중에 노래한다각 특정 실험에 필요한 르 냉동 뇌 영역이 절단 될 수있다.
4. 충분한 정착의 볼륨 (정착액 / 조직 블록 비율의 3/1 볼륨)을 포함하는 별도의 가방에 고정 (10 % 중성 완충 포르말린 또는 다른 정착액)에 대해 선택한 다른 모든 조직 슬래브를 담가. 연속적 전두 - 후두 시퀀스 다음을 번호에 의해 각각의 가방을 레이블. 각각의 가방을 봉인 디지털 사진을 촬영하고, 플라스틱 용기에 보관.
5. 조직 고정 2 주 후 정착 함유 가방을 열고 표 1에 설명 된대로 각 뇌 영역을 잘라.

4. Histostain 및 면역 조직 화학

참고 : 뇌 영역의 세트가 제안한 방식에 따라 잘라 (표 1) AD ¹⁶ 대부분, 모든 경우, 현재 설정된 합의 기반 병리학 적 기준을 만족시키기에 충분, PD ^(17), 루이체 ^(18)와 치매, 측두엽 치매 (FTD / MND) ^{(19), 프로그레시브 Suprabulbar 마비 (PSP) (20), 다중 시스템 위축 (MSA) (21) 등 만성 외상성 뇌증 (CTE) 22.}

1. 각 뇌 영역과 두 반구를 들어, histostains 다음과 같은 최소한의를 수행 헤 마톡 실린 및 에오신 (H & E), 크레 실 바이올렛 (CV, 정량적 형태 계측 학적 연구, 예를 들어 계획하는 경우),은 염색 (있는 경우 "탐색"분석은 필요).
2. 각 뇌 영역과 두 반구에 대한 면역 조직 화학 프로토콜의 다음과 같은 최소 세트를 수행합니다 (β A), 인산화 된 타우 (pTau), 인산화 α-synuclein의 (pα-가 SYN) 아밀로이드 β, 및 인산화-TDP43 (pTDP43) 로 ^{14을 설명했다.}
   주 : (두 반구의 모든 뇌 영역을 사용할 수있는 경우)이 프로토콜은 다음 각 뇌를 평가하기 위해 조직 섹션의 총 수는 46입니다.

결과

프로토콜 길이

하나의 대칭 bihemispheric 고정 뇌 절단 절차 소요 시간은 1 시간으로 추정된다 (, 라벨, 표면을 절개 테이블, 도구를 설정하고, 절단 소요되는 시간은 제외. 등). 냉동 절차 절단 뇌에 고정되는 단일 대칭 이중 반구 교번하는 데 필요한 시간은 2 시간이 걸릴 것으로 추정된다. 하나의 인간의 두뇌 / 주제에 대해 명확한 조직 학적 진단을 얻기 위해 육주 - 적어도 4 사이에 걸릴 수 있습니다. 발생해야 - (적어도 삼주 2) 두개골, 조직 고정 적절한 기간의 사후 뇌를 제거한 후. 그 후, 대칭 bihemispheric 뇌 절단, 조직 처리, 조직 매립 블록 절편 및 면역 조직 화학 염색을 포함한 일련의 프로토콜이 수행되어야한다. CO의 마지막 반구 당 각 영역의 현미경 평가 사용병리 기준 및 분류, 임상 기록의 검토를 n...

토론

이것은 뇌 절단 방법이 여전히 주요 기능 중 하나로서 bihemispheric 대칭 절삭 과정을 유지하면서 (예를 들어, 각 반구 평가 뇌 영역의 개수를 감소시킴으로써) 각 병리학 실험실의 특정 요구 사항에 적합 할 수있다. 이 제안 된 프로토콜은 일상적인 절차 (연구 중심 신경 병리학 센터) 또는 필요한 경우에만 (특정 임상 중심의 연구)에 사용될 수 있습니다. 이것은만을 선택적으로 조사 특정 유형 (즉, 면역 조직 화학) 또는 분자 분석 (예, 게놈 또는 프로테옴 분석)에 사용될 수있다. 기술적 인 관점에서, (특히 면역 조직 화학에) 몇 가지 병리학 적 차이는 면역 조직 염색 강도에서 가능한 인공적인 변화에 기인 할 수 있음을 언급하는 데 유용합니다. 이 대폭 인공적 염색 효과 (A)의 가능성을 감소하는 자동 염색 시스템을 이용하여 최소화 될 수있다차의 변화. 기술적으로 신뢰성 로봇 염색 기계를 사용하여 기술적 아티팩트 교란 요인의 대부분을 최소화하기 위하여는, 실제로, 현재 가능하다. 따...

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
연구 사용을 위한 부검 및 뇌 기증을 허용하는 서명된 정보에 입각한 동의서 사본.
피험자의 자세한 임상 병력에는 신경학적 및 정신과적 증상 및 징후에 대한 자세한 설명이 포함되어야 합니다.
사용 가능한 경우 의료 또는 비의료 비디오 녹화(특히 운동 장애 분야에서 유용함). 친척 소개 s 동의가 필요합니다.
신경 영상, 신경 생리학, 신경 정신과 및 평가 또는 임상 척도.
유전 및 가족력 데이터. 신경 유전 질환이 진단된 경우 유전자 보고서 검토.
조직학 용기	ELECTRON MICROSCOPY SCIENCES	64233-24
조직학 카세트	VWR	18000-142 (주황색)
조직학 카세트	VWR	18000-132 (네이비)
나이프 핸들 및 일회용 블레이드	ELECTRON MICROSCOPY SCIENCES	62560-04
긴 블레이드	전자 현미경 SCIENCES	62561-20
일회용 칼날 나이프 핸들	ELECTRON MICROSCOPY SCIENCES	72040-08
메스 칼날	ELECTRON MICROSCOPY SCIENCES	72049-22
Accu-Punch 2 mm	ELECTRON MICROSCOPY SCIENCES	69038-02
폴리스티렌 용기 – 멸균	전자 현미경 과학	64240-12
해부 보드	전자 현미경 과학	63307-30
포르말린 용액, 중성 완충, 10%	Sigma-Aldrich	HT501128 SIGMA
Hematoxylin 용액, Gill No. 2	Sigma-Aldrich	GHS280  SIGMA
Eosin Y 용액, 수성	Sigma-Aldrich	HT1102128  SIGMA
안티 베타 - 아밀로이드	Covance, Princeton, NJ	SIG-39220	1:500
안티 타우	Thermo Fisher Scientific	MN1020	1:500
안티 알파 - 시누클레인	Abcam	ab27766	1:500
안티 포스포 -TDP43	Cosmo Bio Co.	TIP-PTD-P02	1:2000
디지털 카메라	모든
헤드 임펄스 씰링 기계	그레인저	5ZZ35