방법 논문

마우스 중국 - 심방 노드의 고해상도 광학 매핑

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DOI:

10.3791/54773

⸱

2016년 12월 2일

 , 
1Department of Medicine, University of Wisconsin-Madison School of Medicine and Public Health

이 논문에서

요약

여기에, 우리는 높은 공간 및 시간 해상도, 마우스 우심방 특히 중국 - 심방 노드에서 전기 활동의 광학 매핑을위한 프로토콜을 제시한다.

초록

중심방결절(SAN) 기능 장애 및 관련 합병증은 심장 질환 환자의 이환율의 중요한 원인입니다. 이러한 환자를 치료하기 위한 새로운 약리학적 치료법의 개발은 SAN의 정상 생리학과 병태 생리학에 대한 철저한 이해에 달려 있습니다. 심장 박동 측정에 대한 연구 중, 마우스 SAN은 SAN 이온 채널 또는 칼슘 처리 단백질을 암호화하는 다른 유전자의 발현에 대한 변형에 대한 가능성으로 인해 널리 사용됩니다. 전기생리학 및 조직학 연구에서 나온 새로운 증거는 SAN에서 아트리움까지 특수 전도 경로의 존재와 SAN 내의 복잡한 심박 조율기의 계층 구조를 포함하여 마우스 SAN 구조 및 기능의 대표성과 유사성을 더 큰 포유류와 입증했습니다. 최근에는 광학 매핑 기술이 마우스 SAN 내부 및 마우스 SAN에서 발생하는 여기 및 전도의 기원에 대한 탐색 및 조사를 크게 촉진했으며, 이를 통해 SAN에 대한 이해를 확장하고 SAN 기능 장애 관련 질병의 임상 치료에 도움이 되었습니다. 이 원고에서는 온전한 Langendorff 관류 심장과 분리된 심방 제제에서 마우스 SAN의 광학 매핑을 수행하는 방법을 자세히 설명했습니다. 이 프로토콜은 마우스 SAN 생리학 및 병태생리학에 대한 이해를 향상시키는 데 유용한 도구입니다.

서론

인간 생리학에 대한 이해의 도약으로 이끄는 새로운 과학적 돌파구는 종종 기술 발전에 선행됩니다. 예를 들어, 형광 광학 매핑을 통해 세포와 조직 모두에서 여러 생리학적 매개변수를 조사할 수 있습니다. 1,2 해부학적 구조가 전기생리학적 기능 및 기능 장애와 어떻게 연관되어 있는지에 대한 이해를 크게 향상시켰습니다. 심장에서 자연 심박 조율기와 동방 결절(SAN) 및 방실 접합부와 같은 전도 시스템은 주변 심방 근세포에 의해 절연된 결절 근세포로 구성됩니다. 3-5 이러한 조직은 특수한 전기적 특성을 가진 복잡한 3차원 구조를 만듭니다. 이러한 심박 조율기 구조의 구조적 및 기능적 리모델링은 모두 상당한 전기생리학적 이질성을 형성하는 것으로 인식되었습니다. 6,7 이러한 이질성이 SAN 기능 장애와 심방 부정맥을 초래하는 기전을 이해하는 것은 이러한 질병의 임상 치료에 큰 도움이 될 것입니다. 이를 위해서는 광학 매핑과 같은 조직 수준에서 전기 신호의 전파를 시각화하는 기술이 필요합니다.

최근에는 축적된 증거가 심방 전기 생리학 및 병리학 연구에서 광학 매핑의 발전을 입증했습니다. 2 그러나 새롭고 엄격한 연구는 실험 데이터의 정확한 해석에 의존하며, 그 타당성과 안정성은 신중한 실험 프로토콜에 의존합니다. 유전자 변형 마우스는 아픈 동 증후군, 심박 조율기 이상 및 심방 부정맥을 포함한 인간 질병의 동물 모델로 연구에 광범위하게 사용됩니다. 6,8-11 따라서, 형광 광학 매핑과 형질전환 마우스 모델의 조합은 다양한 병리학과 관련된 심장 전기적 이상을 연구할 수 있는 강력한 도구를 제공합니다. 이 백서에서는 마우스 SAN과 아트리움의 고해상도 광학 매핑을 위한 프로토콜을 제시합니다. 구체적으로, 실험 중에 다양한 염료 로딩 접근 방식, 염료 표백에 대한 시간 효과 및 심박수 안정성에 대해 논의하고 비교합니다.

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프로토콜

모든 실험은 실험 동물의 관리 및 사용을위한 건강 가이드의 국립 연구소 (NIH 출판. 번호 80-23)에 따라 실시 하였다. 이 연구에 사용 된 모든 방법과 프로토콜 NIH에 의해 출판 실험실 동물의 관리 및 사용에 대한 지침은 다음 위스콘신 동물 관리 및 사용 프로토콜위원회의 대학에 의해 승인 된 (발행 번호 85-23를, 1996 년 개정). 본 연구에 사용 된 모든 동물 실험 동물의 관리 및 사용에 대한 가이드를 준수 인도적인 치료를 받았다.

1. 심장 제거 및 랑겐 돌프 관류

  1. 심장 차단, 수조와 물 재킷을 사용하여 37 ° C 따뜻한 타이로드 용액에 앞서.
  2. 5 % 이소 플루 란 / 95 % O 2 마우스를 마취.
  3. 고통 반사의 손실을 확인하여 마취의 적절한 수준을 확인합니다.
  4. 개흉술을 수행합니다. 곡선 5.5 "메이요 가위 5.5"켈리 지혈 용을 사용하여 가슴을 열고CEPS는 흉부의 전면에 잘라 1cm를 확인합니다.
    1. 신속하게 (30 초 이내) 가슴에서 심장의 압축을 풉니 다. "폐 조직을 잡아 4.3 사용하여 심낭과 함께 폐, 흉선, 심장을 잘라 곡선 아이리스 집게 '아이리스 가위 (4)를 사용합니다. 직접 마음을 잡아하지 마십시오.
    2. 산소 (95 % O 2 / 5 % CO 2)에 씻어, 일정한 온도 (36.8 ± 0.4 ° C)의 타이로드의 솔루션을 수정했습니다. (MM)에서 다음과 용액 조성물을 사용하여 128.2 염화나트륨 4.7의 KCl을 1.19의 NaH 2 PO 4, 1.05의 MgCl 2 1.3 CaCl2를 20.0의 NaHCO3 및 글루코오스 11.1 (pH를 7.35 ± 0.05).
  5. 동일한 솔루션에 목욕하는 동안, 폐, 흉선, 지방 조직을 식별합니다. 조심스럽게 마음을 해부하다. 3 "Vannas - 튀빙겐 가위 4.3"# 5 집게 곡선 사용합니다.
  6. 그런 다음 대동맥을 확인하고 주문 제작 21 G 정맥에 그것을 cannulate. 이 곡선 4.3 "#의 5B의 힘을 사용하여추신.
  7. 삽관 한 후 동시에 관류 (~ 50 ml / 분의 유속으로 목욕) (~ 5 ㎖ / 분의 유량에서의 캐뉼라를 통해가 대동맥 압력에 기초하여 조정되어야하며, 아래 참조) superfuse 전체 실험을 통해 예열 여과 타이로드 용액으로 마음입니다. 관상 동맥의 폐색을 방지하기 위해 인 - 라인 11 ㎛의 나일론 필터를 통해 관류 액이 통과한다.
  8. 관류 라인에 3 방향 스톱 콕 루어 잠금 장치를 통해 연결된 압력 변환기 (또는 압력 게이지)를 사용하여 동맥압을 모니터 (60) 및 80 mmHg의 사이에 유지한다. 이 범위 내에서 대동맥 압력을 유지하기 위해 필요한 경우 관류 속도를 조정합니다.

랑겐 돌프 - 관류 항목의 심장에서 SAN 2. 광학 매핑

  1. 수단
    1. 수평으로 중심을두고 P 0.1 mm 직경의 핀을 이용하여 상기 챔버의 실리콘 코팅 아래쪽 심실 에이펙스 핀하지 못하 스트림에 의한 실험 기간 동안 운동을. (12)
    2. 폐정맥을 통해 좌심실 (LV)에 작은 (0.012 "(내경) x 0.005") 실리콘 튜브를 삽입, 왼쪽 심방 (LA)과 승모판 막 (MV). 사운 딩 결합 조직에 실크 봉합사 (4-0)에 의해 튜브를 고정합니다.
    3. 그 후방 측 (그림 1A, 왼쪽 패널)를 향하도록 마음을 놓습니다.
    4. 0.1 mm 직경 minutien 핀을 이용하여 상기 챔버의 실리콘 바닥까지 RA 부속기 (RAA)의 가장자리에 핀. 적경 평면의 후방 표면을하고 카메라의 초점면에 위치 할 수 있도록하기 위해 자사의 레벨을 조정합니다. 이는 심방의 최대 표면적 광학 측정을 가능하게 할 것이다.
    5. 실크 봉합사 (4-0)에 의해 올가미 우수 (SVC) 및 하부 (IVC) 대정맥, 스트레칭과 실리콘 코팅 챔버 (그림 3A 참조)의 바닥에 봉합사의 다른 쪽 끝을 고정. 봉합사는 차단하지 않습니다 확인보기의 광학 분야.
    6. RAA의 가장자리에 맞춤 페이싱 전극을 배치합니다. 전극하려면 사용 실리콘 0.5 mm 전극 간 거리, 0.25 mm 직경은 와이어를 코팅하고 조율 끝에 1mm의 길이에 대한 실리콘의 결여. 그런 다음 두 개의 ECG 12mm 바늘 (29 게이지) 좌우 심실의 기지 근처 모노 폴라 전극을 배치합니다. 심실의 정점 근처의 땅 ECG 전극을 배치합니다.
  2. 더럽히는 것
    1. 형광 염료 및 전기 기계 uncoupler의 blebbistatin 모두 빛에 민감한 때문에, 어두운 방에서 아래에 설명 된 모든 절차를 수행합니다. 먼저 디메틸 설폭 시드 (2.5 mM)을 분액으로의 스톡 용액, 1.25 ㎎ / ㎖로 (30 μL를 각각) 전압 감응 염료 RH-237 또는 디 -4- ANNEPS을 준비하고 -20 ℃에서 분취 량을 저장한다.
    2. 가온 (37 ° C) 타이로드 용액 1 ml의 염료 원액 5-10 μL 희석하고 관상 동맥 관류 라인에 주입인라인 루어 주입 포트를 사용하여 5-7 분에 걸쳐.
    3. 사전에 원액 (디메틸 설폭 사이드 2 ㎎ / ㎖, 6.8 밀리미터)로 blebbistatin 준비하고 4 ℃에서 보관합니다.
    4. 안정화의 20 분 후, 관류 액의 가온 0.5 ㎖ (37 ° C)를 추가하고 blebbistatin 가온 (37 ° C) 타이로드 용액 1 ㎖에 blebbistatin 0.1 mL로 희석. 이어서 인라인 루어 주입 포트를 사용하여 5-7 분에 걸쳐 관상 동맥 관류 라인에 주입.

격리 된 심방 준비에서 SAN 3. 광학 매핑

  1. 수단
    1. 격리 된 심방 준비, 분리 및 전체 심장 준비 단계 1.1-1.5에서 상술 한 바와 같이 마음을 cannulate.
    2. 멀리 전방 측면에서 심실을 해부하다. 그림 1A, 오른쪽 패널을 참조, 자세한 내용은 # 1를 잘라.
    3. 삼첨판 버지니아 통해 절단하여 RA를 엽니 다TV를-SVC 축을 따라 LVE (TV). 그림 1A, 오른쪽 패널을 참조, 자세한 내용은 # 2를 잘라.
    4. RAA를 엽니 다 crista의 terminalis의 중간 다리를 잘라. 그림 1A, 오른쪽 패널을 참조하십시오, # 3를 잘라.
    5. 상기 RAA의 오른쪽 하단의 가장자리 위 컷 # 3의 중간 선에서 절단을 수행하여 전방 심방 자유 벽을 열고 평평 실리콘 피복 실의 바닥 심방 자유 벽에 핀. # 4 잘라도 1a에 중공의 화살표 방향 참조. 심방의 손상을 방지하기 위해 제조 피닝 심실 조직의 림 보존.
    6. 마찬가지로, LA의 부속물 (LAA)의 MV-상단 모서리를 따라 MV 통해 절단에 의해 열린 LA.
    7. LAA의 중간 림 근처까지 전방 심방 자유 벽을 통해 열린 LAA의 중간에서 잘라 LAA를, 엽니 다.
    8. 전방 심방 자유 벽 ALO를 엽니 다동일한 방향 겨 후 평탄화 및 실 가드 코팅 챔버의 바닥에 고정.
    9. 부분적으로 심방 중격 조직을 제거합니다. 이 초점에없는 조직에서 광 신호의 산란을 줄일 수 있습니다. 따라서, LA 및 RA뿐만 아니라 SAN 및 아트 리오 - 심실 접합 (AVJ)는 모두이 준비 (그림 1B)에 액세스 할 수 있습니다.
    10. 외막과 내막 양면에서 superfusion을 허용하기 위해, 실리콘 코팅 챔버의 바닥으로부터 약 0.5 mm로 최종 제제 올려.
    11. SVC를 근처에 집중 유량 12 ㎖ / 분 ~ 일정한 속도로 가온 함께 제제 (37 ° C) 타이로드 용액 및 Superfuse ~ 목욕 superfusion 30 ㎖ / 분.
    12. 해부 RAA의 가장자리에 맞춤 간격의 Ag / AgCl을 2 전극 (0.25 mm 직경)을 놓습니다. 그런 다음 각각 두 개의 ECG 12mm 바늘 (29G)를 RAA 및 LAA 근처 전극 (극성)을 배치합니다. 지상 ECG 차기를 배치AVJ 근처에 탔다.
  2. 더럽히는 것
    1. 전압에 민감한 염료 (RH-237 또는 디 - 4 ANNEPS)의 직접적인 응용 프로그램을 수행합니다. 이를 위해, 가온 (37 ° C) 타이로드 용액 1mm에서 염료 원액 1-2 μL 희석 천천히 1mm 피펫을 사용하여 제제의 표면에 희석 된 염료를 방출.
    2. 또는, 전체 심장 준비 (단계 2.2.1-2.2.2)에 대한 전술 한 것과 유사한 랑겐 돌프 - 관류 심장의 관상 동맥 재관류를 통해 전압에 민감한 염료와 심방 염색을 수행합니다.
      1. 한 바와 같이 관상 동맥 관류 염색 후에 심방 준비 격리. 양호한 형광 레벨에 도달하는 데 필요한 경우 추가적인면 염색을 수행한다. 빠른 심방 분리 염료 표백하지 않고 염색 품질에 영향을 미치지 않는다.
    3. 전기 기계 uncoupler, blebbistatin으로 제조 고정시킨다. 상상력 3-5 μl를 희석가온 (37 ° C) 타이로드 용액 원액 bbistatin 천천히하면 준비의 표면 및 주변 솔루션을 희석 blebbistatin를 놓습니다. blebbistatin는 준비와 염색 동안 빛에 빛에 민감, 13, 14 피할 긴 노출로 표시되어 있기 때문에.
    4. 수축을 억제하는 데 필요한만큼 추가 blebbistatin 응용 프로그램을 수행합니다. 일반적으로 3 추가 애플리케이션 (각 어플리케이션마다 3-5 μL)까지 정확하게 SAN 심방 활성화를 재구성하기 위해 충분히 동 잡음을 억제 할 수있다.
    5. 관류에 따뜻하게 blebbistatin의 추가 0.5 ML을 추가합니다. 이 절차를 수행하는 동안, 염료 / blebbistatin는 심방 조직을 염색 할 수 있도록 30 초 동안 superfusion을 일시 중지합니다.

4. 광학 매핑 설정

주 :. 광학적 맵핑 시스템의 상세한 설명은 다른 곳에서 제공된다 (12)

  1. 투과 전자 현미경과 카메라를 사용하여2000 프레임 / 초 이상, 집광 렌즈의 시리즈의 poral 해상도는 100 μm의 / 화소 이상의 공간 해상도를 달성한다. 이는 SAN 활성화 및 intranodal 전파를 재구성 할 필요가있다.
  2. 진동 용액으로부터 동 잡음을 감소시키기 위해, 심장 / 절연 심방 제조 위에 상기 용액의 표면에있는 작은 커버 글라스를 고정한다.
  3. 정전류, 저잡음 할로겐 램프에 의해 제공되는 여기 광 (520 ± 45 nm 파장)를 사용합니다. 가요 갈래 광 가이드를 사용하여 제조 상 여과 광속을 지시.
  4. 긴 패스 필터 (> 715 ㎚)에 의해 방출 된 형광 필터. 수집, 디지털화 및 카메라 제조업체에서 제공하는 컴퓨터 사용하여 소프트웨어를 획득 한 형광 신호를 저장합니다.

5. 데이터 처리

주 : 광 맵핑 데이터 수집 및 상이한 시점에서의 형광 강도의 행렬로 저장됩니다. 화소 represe특정 시점에서, 티슈 제조의 특정 위치에서 수집 된 형광 강도의 측정치를 NTS. 배경 형광이 자동으로 막 전압 변화에 의해 생성 및 미세 전극 시스템에 의해 측정 된 활동 전위 (APS)에 해당하는 반전 형광 변화를보다 효율적으로 시각화 할 수 있도록 픽셀 당을 제거한다. 영상 분할, 공간 필터링, 시간적 필터링하고, 기준 편차 제거를 포함한 광학 영상 데이터를 처리에서 여러 단계의 상세 포커스 리뷰가 제공된다. (15)

  1. 수동 또는 조직의 경계를 결정하기 위해 특정 알고리즘 (예를 들어, 임계 또는 에지 검출) (15)를 이용하여 1 (포함 화소) 0 (제외 픽셀)의 바이너리 마스크를 생성하고 시퀀스의 각 프레임에 마스크를 적용한다. 이 과정은 추가 처리를 위해 관심 영역을 강조 바이너리 이미지를 만듭니다.
  2. 선택 해제의 신호 대 잡음비를 향상시키기iCal의 데이터는, 상기 선택된 관심 영역 내에서 신호를 필터링. 이를 위해, 예를 들어, 버터 워스, 체비 셰프 유형 및 / 또는 시간 필터링 ((잡음 데이터, × 5 5 예 3 × 3, 원하는 회선 빈 또는 커널에 의해 정의 된 이웃 형광 픽셀, 즉 평균 이상) 공간을 사용 1, 체비 세프 2 형, 타원 등) (그림 2). 데이터를 해석 할 때 염두에 여과에 의한 유물의 가능성을 유지합니다. 자세한 내용은 리뷰를 참조하십시오. (15)
  3. 필요한 경우 (원래의 신호에 하이 패스 필터링 또는 다항식 피팅을 사용하여) 광 기록에서 기준선의 드리프트를 제거하고 0 (최소 형광) (1) (형광 극대)로부터 화소 신호를 정규화.
  4. 단일 AP의 전파에 대한 모든 픽셀의 활성화 시간을 포함 시간 윈도우를 선택한다. F는 fluorescen입니다 최대 상향 행정 유도체의 시간 (DF / DT 최대, 각 픽셀에게 그것의 활성화 시간을 할당가전 ​​강도). 모든 화소의 활성화 시간을 사용하여, 활성화 등시 맵을 재구성. 각 아이소 크론 따라서 동시에 활성화 픽셀을 표시합니다.
  5. 각 픽셀 (재분극, APD (80)의 80 %, 예를 들면) 재분극 특정 레벨에서 동작 시간과 시간 사이의 기간을 계산 들면 AP 기간 (APD) 분산 맵을 재구성한다. 모든 화소 APD 값을 사용하여, APD 분포 등시 맵을 재구성. 각 아이소 크론 따라서 같은 APD와 픽셀을 표시합니다.
  6. AP의 전파에 대한 전도 속도를 계산하는 5.4에서 계산 된 활성화 시간 데이터에 제제의 표면에 장착한다. 이를 위해, 다항식 피팅 표면 또는 로컬 커널 표면 평활화를 사용하고 장착 표면의 기울기로부터 로컬 전도 속도 벡터를 구한다.
  7. 재분극 맵을 만들려면 각 픽셀에게 그것의 재분극 시간을 할당, 최대 초 미분으로 정의 (D 2 F / DT2) OAP 또는 90 % 재분극시의 끝에서 광 신호.

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결과

랑겐 돌프 - 관류 심장에서 그대로 SAN의 광학 매핑
자연 동 율동에 대한 재구성 RA 활성화 등고선의 전형적인 예는 랑겐 돌프 - 관류 마우스 심장 그림 3에 표시됩니다. 초기 활성 점은 SAN 해부학 정의 SVC 근처 intercaval 영역 내에 위치한다. 1.0 및 0.5 msec의 샘플링 레이트에서 취득 3,16 개의 RA 활성화 등고선지도는도 3b에 도시된다.

SAN의 기능을 평가하기 위해, 우리는 10 ~ 12 Hz에서 적어도 1 분 동안 RAA 페이싱 후 SAN 회복 시간 (SANRT). (9) 측정, 전기 자극을 중단하고 SANRT이 이전 촬영 AP와 사이의 시간 간격으로서 계산 하였다 먼저 자연 AP...

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토론

랑겐 돌프 - 관류 온 마음 1) 그대로 SAN, 2) SAN은 고립에, 심방 준비를 개설 : 여기, 우리는 마우스 SAN 준비의 두 가지 유형을 제시했다. 준비의이 두 종류의 서로 다른 실험 목적을 제공합니다. 랑겐 돌프 - 관류 온 마음 준비에서 그대로 심방 구조는 가능한 재진입 빈맥 성 부정맥 동안 SAN과 심방 사이의 복잡한 심방의 이러한 심방 세동과 같은 부정맥뿐만 아니라 상호 작용을 연구 할 수있는 보존됩니다. 6 대조적으로, 고립 된 심방 준비 아트리움은 세 가지 차원 해부학 번들을 방해하는 의사 두 차원 구조로 열어 평평하게됩니다. 이 심방 arrhythmogenesis 공부에 적합하지 격리 된 심방 준비를하게 재진입 경로의 해부학에 영향을 미칠 수 있습니다. 그러나,이 제제의 종류, 선도적 인 페이스 메이커 (들) 사이트, intranodal 전도의 위치 및 AP 전파 페이지를 사용하여attern 정확하게 시각 상세하게 조사 될 수있다. 분리 된 제제에서, 전체 심방 표면 광 맵핑 할 수있을...

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공개 사항

이해 상충은 선언되지 않습니다.

감사의 글

우리는 위스콘신-매디슨 의과대학 스타트업(AVG)의 지원을 받고 있습니다.

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재료

이 논문에 사용된 재료 목록
이름회사카탈로그 번호댓글
물 재킷Radnoti1660 시리즈 조직 목욕 대형 장기 또는 단일 세포 격리 절차
물 목욕 / 순환기Fisher Scientific1016S
압력 증폭기AD 기기MLT0670
EMD Millipore 나일론 그물 필터Fisher ScientificNY1102500
압력 변환기AD 스테인레스
- 0.1 mm 지름Fine Science Tools26002-10 
관류 펌프World Precision InstrumentsPERIPRO-4LS
Superfusion 펌프World Precision InstrumentsPERIPRO-4HS
Vannas Tubingen 가위 World Precision Instruments503379
Dumont 집게World Precision Instruments501201, 500085
Mayo 가위World Precision Instruments501750
켈리 지혈 겸자World Precision Instruments501241
아이리스 집게World Precision Instruments15917
Iris 가위World Precision Instruments501263
ECG 12mm 바늘(29게이지) 전극(단극) AD InstrumentsMLA1203
인라인 루어 주입 포트Ibidi10820
Ultima-L CMOS 카메라 사이미디어MiCAM-05 
할로겐 램프Moritex USA IncMHAB-150W
NaClFisher ScientificS271-1
CaCl2 (2H2O)Fisher ScientificC79-500
KClFisher ScientificS217-500
MgCl2 (6H2O)Fisher ScientificM33-500
NaH2PO4 (H2O)Fisher ScientificS369-500
NaHCO3Fisher ScientificS233-3
D-포도Fisher ScientificD16-1
BlebbistatinTocris Bioscience1760
RH237ThermoFisher ScientificS1109
디메틸설폭사이드(DMSO)시그마-알드리치D2650
스틸 Minutien 핀MLT0670 악기의 당

참고문헌

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  3. Fedorov, V. V., Glukhov, A. V., Chang, R. Conduction barriers and pathways of the sino-atrial pacemaker complex: their role in normal rhythm and atrial arrhythmias. Am J Physiol Heart Circ Physiol. , (2012).
  4. Boyett, M. R., Honjo, H., Kodama, I. The sinoatrial node, a heterogeneous pacemaker structure. Cardiovasc Res. 47 (4), 658-687 (2000).
  5. Glukhov, A. V., et al. Sinoatrial Node Reentry in a Canine Chronic Left Ventricular Infarct Model: The Role of Intranodal Fibrosis and Heterogeneity of Refractoriness. Circ Arrhythm Electrophysiol. , (2013).
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  12. Lang, D., Sulkin, M., Lou, Q., Efimov, I. R. Optical mapping of action potentials and calcium transients in the mouse heart. J Vis Exp. (55), e3275(2011).
  13. Fedorov, V. V., et al. Application of blebbistatin as an excitation-contraction uncoupler for electrophysiologic study of rat and rabbit hearts. Heart Rhythm. 4 (5), 619-626 (2007).
  14. Swift, L. M., et al. Properties of blebbistatin for cardiac optical mapping and other imaging applications. Pflugers Arch. 464 (5), 503-512 (2012).
  15. Laughner, J. I., Ng, F. S., Sulkin, M. S., Arthur, R. M., Efimov, I. R. Processing and analysis of cardiac optical mapping data obtained with potentiometric dyes. Am J Physiol Heart Circ Physiol. 303 (7), H753-H765 (2012).
  16. Liu, J., Dobrzynski, H., Yanni, J., Boyett, M. R., Lei, M. Organisation of the mouse sinoatrial node: structure and expression of HCN channels. Cardiovasc Res. 73 (4), 729-738 (2007).
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