여기에서는 4 가지 단계 (담금질, 달인, 여과 및 농축)의 erxian decoction (EXD) 준비 과정을 제시하고 준비된 EXD 함유 혈청을 쥐에게 투여하는 방법을 보여줍니다. 이 방법은 생약과 생체 외 연구에 적용 할 수 있습니다.
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이 논문에서
요약
초록
임상 약제로 사용되는 대체 의학 인 한약은 최근 몇 년 동안 주목을 받아 왔습니다. 인체에 전달하기 전에 원료 약초에서 활성 성분을 방출하기 위해 일반적으로 추가 추출 절차가 필요합니다. 수분 섭취는 여전히 임상 환경에서 광범위하게 사용되는 고전적인 추출 과정입니다. 여기에서는 실험적 연구에 약초 즙을 적용하기 위해 erxian decoction (EXD)에 대한 상세한 프로토콜을 제안합니다. EXD의 4 가지 주요 단계 (수적, 수분 섭취, 여과 및 농축)뿐만 아니라 동물에 적합한 용량의 계산이 기술되어있다. 또한, 혈청 함유 EXD는 생체 외 검증을위한 수단으로 쥐에게 도입됩니다. 여기에 쥐에게 EXD를 3 일간 경구 투여 하였다. 혈액 샘플을 채취하고, 불 활성화시키고, 원심 분리하고, 여과시켰다. 배양 배지로 희석 된 혈청은 세포 또는 조직 을 vitro. 예를 들어, EXD는 in vivo 및 in vitro 연구에 모두 적용되었으며 EXD가 골 형성을 향상시키는 것으로 나타났습니다. 이 프로토콜은 약초의 제조 및 응용에 대한 참고 자료로 사용할 수 있습니다.
서론
전통적인 약초의 연구와 응용에 대한 관심이 현재 커지고 있습니다. 화학 성분이 확실한 현대 의약품과는 달리, 허브 성분에는 미지 성분이 포함되어 있으며 활성 성분을 전달할 수 있도록 추출 과정이 필요합니다. 많은 연구가 잘 알려진 구조를 가진 하나의 작은 화합물을 전체 약초 또는 허브 공식의 대표자로 선택하려고 시도하지만 약리학 적 효능이나 메커니즘은 동등한 것으로 간주 될 수 없다. 핑거 프린팅 (fingerprinting)은 복잡한 허브 수식의 구성 성분을 분석 할 수 있지만, 일부 성분은 아직 명확하게 분석되지 않아 연구 3에서 모든 추출물을 결합 할 때 어려움을 겪습니다. 수많은 성분 / 추출물의 상호 작용은 약초의 치료 효과를 중재합니다. 이러한 장점을 유지하기 위해 전통적인 추출물 형태이온은 여전히 클리닉에서 널리 사용됩니다. 추출 과정은 치료 효능에 큰 영향을 미치기 때문에, 특히 생체 내 연구 4,5 에서 전통적 물 추출법의 표준 프로토콜이 필요합니다.
반면에, 약리학 적 기작을 탐색 할 때, 생체 외 또는 생체 외 연구 중에 약초를 처치하는 것은 도전 과제입니다. 약물 함....
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프로토콜
이 프로토콜은 상하이 한의대의 동물 관리 지침을 따르며 동물 실험 상하이 동물 윤리위원회의 승인을 받았습니다.
1. 프로토콜 I : EXD 준비
- 계산
- EXD를 6 주령의 ICR (female Imprinting Control Region) 마우스 (0.02 kg / mouse) 10 마리의 치료 그룹에 12 주 동안 주 5 회 투여하십시오.
참고 : 총 1.702 EXD가 필요합니다. EXD는 개별 증분으로 측정되기 때문에 실제로는 2 개의 EXD를 관리해야합니다. - 마우스 당 EXD 부피를 계산하십시오 ( 예 : V = (0.1418 EXD / kg • 일) * (0.02 kg / 마우스) * 50 mL / EXD = 0.14 mL / 마우스 • 일).
- EXD를 6 주령의 ICR (female Imprinting Control Region) 마우스 (0.02 kg / mouse) 10 마리의 치료 그룹에 12 주 동안 주 5 회 투여하십시오.
- 몸을 담그다
- 두 가지 EXD ( 즉, Curculigo orchioides Gaertn (18g), Herba Epimedii (18g), Radix Morindae Officinalis (18g), RAdix Angelicae Sin....
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결과
EXX가 OVX 마우스의 골밀도에 미치는 영향
요추 척수 절편의 Hematoxylin과 eosin (H & E) 염색은 OVX 군 ( 그림 1A , 왼쪽 패널)과 비교하여 생체 내 EXD 치료 후 증가 된 골소주 ( 그림 1A , 오른쪽 패널)를 보여줍니다. 그림 1B 는 OVX 마우스 ( 그림 1B , 왼쪽 패널)와 EXX 치료 12 주 ( 그림 1B , 오른쪽 패널) OVX 마우스의 4 번째 요추의 대표적인 μCT 이미지를 보여줍니다. EXD 처리 된 마우스의 요추 내에서보다 많은 골질 뼈가 대조 OVX 마우스의 것보다 많이 보인다. μCT 영상에서 얻은 데이터는 제 4.......
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토론
최근 몇 년 동안 동부 지역의 임상 환경에서 수천 년 동안 적용 되어온 대체 의학의 한 유형 인 한약에 많은 관심이 쏟아졌습니다. 전통적인 약초 의학은 현대 의학의 "벤치에서 침대로"패턴과는 달리 처음에는 "bed to bench"패턴을 통해 자신의 메커니즘을 설명해야합니다. 이것은 벤치 단계에서 수행 된 검증과 새로 최적화 된 약물의 개발을위한 처리에 이어 수행 될 수 있습니다. 지금까지 전체 수식이나 허브에서 활성 성분을 방출하는 것으로보고 된 몇 가지 추출 방법이 있습니다. 그 중에서도 물 추출이 가장 널리 사용됩니다.
한약의 물 추출에는 4 가지 기본 단계가 있습니다. 첫 번째 단계는 몸을 담글 수 있습니다. 복잡한 한약은 물에서 일정 시간 (일반적으로 0.5 ~ 1 시간) 침수됩니다. 담그는 시간은 원료 약초의 양과 특성에 달려 있습니다. 에생 약초가 완전히 적셔 졌는지 확인하십시오. 모든 조각이나 블록의 중앙 부분을 가려야합니다........
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공개 사항
저자는 경쟁적인 금전적 이해 관계가 없다고 선언합니다.
감사의 글
이 작품은 중국 국립 자연 과학 재단 (81573992)의 지원을 받았다. 그들의 언어 편집 지원에 대해 Emily K. Lo와 Kathleen DiNapoli에게 감사드립니다.
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재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| Curculigo orchioides Gaertn (9 g), Herbaa Epimedii (9 g), 기수 Morindae Officinalis (9 g), Radix Angelicae Sinensis (9 g), Cortex Phellodendri (6 g), Rhizoma Anemarrhenae (6 g) | Kang-qiao Chinese Medicine Yinpian Co., Ltd (Shanghai, CN) | 160922 | EXD 구성 요소 |
| 여과지 | GElifesciences | 99-103-952 | 필터 EXD 달인 농도 |
| 각인 제어 영역 (ICR) 마우스 | 상하이 실험실 동물 센터 | SCXK 2007-0005 | 생체 내 연구 |
| Sprague Dawley 쥐 | 상하이 실험실 동물 센터 | SCXK 2007-0005 | EXD 함유 혈청 제제 |
| 주사기 필터 | Millipore | SLGP033RB | 0.22 µ m |
| gavage 바늘 (10 ml) | 상하이 BO Ge 무역 영업 부서 | 59104274 | EXD |
| 케타민 (80 mg / kg) 관리 | Fujian Gutian Pharma Co. Ltd | H35020148 | 마취 |
| 자일라진(10mg/kg) | Sunway Pharma Co. Ltd | CB07591 | Anesthesia |
| Dulbecco' Eagle'의 변형 s 배지 Dulbecco (DMEM) 배양 배지 | Gibco | 12800-116 | DMEM, 2mM L-글루타민 및 리보뉴클레오티드 미함유 |
| 스트렙토마이신 | Sigma | 1277 | 100 µ g / ml |
| 페니실린 | 시그마 | 4687 | 100 &마이크로; G / ml |
참고문헌
- Zhang, L. G., Ouyang, X. W., Wu, T. T., Ni, L. J., Shi, W. Z. Quantitative evaluation of in vitro effects and interactions of active fractions in a Chinese medicinal formula (Yaotongning Capsule) on rat chondrocytes. J Ethnopharmacol. 155 (3), 1424-1432 (2014).
- Ogawa, Y., Fujii, Y., Sugiyama, R., Konishi, T.
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재인쇄 및 허가
