제시 프로토콜 인플루엔자 백신 받는 사람 혈 청 샘플에서 인플루엔자-특정 항 체 titers 척도를 hemagglutination 억제 시험을 수행 하는 방법을 설명 합니다. 첫 번째 분석 결과 hemagglutination에 의해 최적의 바이러스 성 항 원 농도를 결정합니다. 두 번째 분석 결과 hemagglutination 저해 하 여 인플루엔자-특정 항 체 titers 단정.
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방법 논문
인플루엔자-특정 항 체 Titers 계량에 최적화 된 Hemagglutination 억제 (HI) 분석 결과
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이 논문에서
요약
초록
항 체 titers 인플루엔자와 다른 병원 체에 대 한 혈 청 학적인 보호에 대 한 대리 표식으로 일반적으로 사용 됩니다. 사전 및 사후 예방 접종 항 체 생산의 상세한 지식은 백신 유도 면역을 이해 해야 합니다. 이 문서에서는 인플루엔자-특정 항 체 titers를 확인 하는 신뢰할 수 있는 포인트 프로토콜을 설명 합니다. 첫 번째 프로토콜 hemagglutination, 두 번째 프로토콜 (hemagglutination 분석 결과, 분석 결과 HA)에 후속 사용 농도 표준화에 필요한 항 원 금액을 지정 하는 방법을 설명 합니다. 두 번째 프로토콜 인간의 혈 청 또는 셀 문화 supernatants (hemagglutination 저해 분석 결과,이 분석 결과)의 직렬 희석을 사용 하 여 다른 바이러스 성 긴장에 대 한 인플루엔자-특정 항 체 titers의 정량화를 설명 합니다.
적용 예를 들어, 우리는 trivalent inactivated 인플루엔자 백신을 접종 하는 건강 한 코 호트의 항 체 응답을 보여줍니다. 또한, 다른 인플루엔자 바이러스 사이의 분 표시 되 고 동물 적혈구 (Rbc)의 다른 종류를 사용 하 여 분을 최소화 하는 방법을 설명 했다. 토론 하이라이트 장점과 제시 분석의 단점 및 어떻게 인플루엔자-특정 항 체 titers 결정 백신 관련 면역의 이해를 향상 시킬 수 있습니다.
서론
인플루엔자 바이러스 감염 상당한 질병 률, 사망률, 및 높은 의료 비용1,2,,34와 연결 됩니다. 특히, 신생아, 임산부, 노인과 만성 질병을 가진 환자는 더 심한 임상 결과 대 한 위험이 있습니다. 따라서, 순환 하는 인플루엔자 바이러스 변종에 대 한 예방 접종이 고 위험도 인구에 있는 질병의 부담을 줄이기 위하여 기본 척도 이다. 예방 접종, 예를 들면, 보호 임계값 이상 인플루엔자-특정 항 체 후 개별 면역 반응의 증가 감염의 개별 위험과 일반 인구 내에서 바이러스 성 전송의 가능성을 감소 5. 백신 유도 체액 면역 반응의 다른 인구에 다양 한 연령층에 걸쳐 자세한 이해는 중요 한 임상 질문6,,78 대답 하는 핵심 요소 , 9와 같은: 왜 일부 노인 환자 이전 예방 접종에....
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프로토콜
연구 프로토콜 로컬 윤리 검토 위원회 (www.EKNZ.ch)를 통해 승인 하 고 모든 참가자 로부터 서 면된 동의 얻어.
1. 혈 청 컬렉션
- 인간 관심의 시간 시점에서 혈 청 샘플을 수집 합니다. 이 연구를 위해 우리는 예방 접종 후 0 (독감 예방 접종의 시간), + 7, + 30, 60, 및 180 일에서 세라를 수집.
- 혈 청을 얻기 위해 상 온 (20-25 ° C)에서 10 분 동안 1200 x g에서 샘플 튜브 원심.
참고: 4 ° C, 그리고 24 시간 보다는 더 이상 비 centrifuged 혈액 샘플 저장 되어야 한다. - 약 수 다른 튜브 (cryo-튜브) 및 사용까지-80 ℃에서 동결으로 혈 청.
- 수행 후속 분석 실험 batch-wise, 모든 시간-포인트 환자 내에서 다양성을 줄이기 위해 한 사람의 포함 하 여.
2입니다. 항 원 준비
주의: 5 가지 항 사용 됩니다 ( 재료의 표참조). Biosafety 수준 2 (BSL-2) 실험실에서 항 원 준비.
- 제조업체의 지침에 따라 1.0 mL 증류수....
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결과
인플루엔자 A H3N2에 대 한 사전 및 사후 예방 접종 유도 항 체 응답
백신 유발 항 체 응답 26 건강 한 자원 봉사자는 사 3가 소 단위 독감 백신을 접종, 포함 된 인플루엔자 A/H1N1/캘리포니아/2009 A/H3N2/텍사스/2012, B/매사 추세 츠/02/2012는 2014 이전에 평가 되었다 / 2015 독감 시즌입니다. 그림 6 2 백신 수령인의 대표적인 예를 보여 줍니다. 흥미롭게도, 그 특정 독감 시즌 동안 A/H3N2/텍사스/2012는 순환 하지, 그리고 시즌 다소 다른 바이러스 성 긴장을 포함 하는 대신: A/H3N2/스위스/2013. A/H3N2/텍사스/2012 A/H3N2/스위스/2013의 바이러스 성 조류 97% 순서 신원 표시 하 고 단지 11 아미노산 ( 표 4참조), 그 위치는 그.......
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토론
사전 및 사후 예방 접종 독감 바이러스 titers 특정 항 체의 정량화 백신 연구에 필요한 중요 한 도구입니다. Seroprotection 같은 바이러스 감염에 대 한 보호의 대리 측정에 따라 (> 1시 40분) 또는 혈 (4-fold titer 증가), 예방 접종 전략 수9에 최적화 된. 제공 된 프로토콜을 사용 하 여 확인할 수 있습니다: (i) 특정 바이러스, 및 (ii) 항 체 titers 관심의 바이러스에 대 한 hemagglutination 잠재력.
수정 및 문제 해결:
이 프로토콜은 WHO 표준12를 기반으로 합니다. 우리는 혈 청 준비 (단계 5 참조)에 대 한 PCR 튜브 스트립을 사용 하 여 프로토콜을 수정. 이 수정 도움을 크게 줄이고 작업 분석 결과의 처리량을 증가. 또한, 우리 비용 효과적인.......
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공개 사항
A.E.에 의해 지원 되었다 연구 보조금 (PZ00P3_154709), "SNSF Ambizione 점수" 프로그램에서 "Forschungsfond, Förderung strategischer Projekte" 바젤의 대학, Stiftungsinfektionskrankheiten 바젤, 및 Bangeter Rhyner 재단. L.K. 기술 대학의 그라츠, 오스트리아의 교부 금에 의해 지원 되었다. : J.L. 시스템 생물학 프로그램 (9번째 전화)에서 SystemsX.ch 이니셔티브의 iPhD 친교에 의해 지원을 인정합니다.
재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| 25ml 일회용 멀티채널 피펫 저장소 | Integra | 4312 | |
| 8웰 PCR 튜브 | 브랜드 GMBH | 781332 | 혈청 분취액 |
| 96웰 마이크로타이터 플레이트, U자형 | TPP | 92097 | 포유류 적혈구 사용 시 HI 분석용 |
| 96웰 마이크로타이터 플레이트, V자형 | Corning Costar | 3897 | 조류 적혈 |
| 구 사용 시 HI 분석용아쿠아 광고 iniect. Steril | Bichsel AG | 1000004 | 인플루엔자 항원 및 콜레라 여과액 용액 제조용 |
| 닭 RBC(10%) | Cedarlane | CLC8800 | Alsever의 용액에서 닭 적혈구 10% 현탁 |
| 콜레라 여과액 | Sigma-Aldrich | C8772 | 수용체 파괴 효소(RDE)로 사용 |
| Dulbecco의 PBS | Sigma-Aldrich | D8537 | 혈청 시료, 적혈구 및 항원 희석용 |
| Eppendorf Multichannel pipette, 12-channel, 10-100 µ l | Sigma-Aldrich | Z683949 | |
| Eppendorf 멀티채널 피펫, 8채널, 10-100 &마이크로; l | Sigma-Aldrich | Z683930 | |
| Guinea Pig RBC (10%) | Cedarlane | CLC1800 | Alsever의 용액에서 기니피그 적혈구의 10% 현탁 |
| Influenza Anti-A/California/7/09 HA serum | NIBSC | 14/134 | HI 분석에서 positive control로 사용 |
| 인플루엔자 Anti-A/Switzerland/9715293/2013-like HA serum | NIBSC | 14/272 | HI 분석 |
| Influenza Anti-A/Texas/50/2012-Like HA Serum에서 | NIBSC | 13/178 | HI 분석 |
| Influenza Anti-B/Brisbane/60/2008-HA serum 에서 | NIBSC | 13/254 | HI 분석에서 positive control로 사용 |
| 인플루엔자 Anti-B/Massachusetts/02/2012 HA 세럼 | NIBSC | 13/182 | HI 분석에서 양성 대조군으로 사용됨 |
| 인플루엔자 항원 A/California/7/09 (H1N1)(NYMC-X181) | NIBSC | 12/168 | 비활성화, 부분 정제 A/California/7/09 (H1N1)(NYMC-X181) 바이러스 (ca. 46µ gHA/ml) |
| 인플루엔자 항원 A/스위스/9715293/2013 (NIB88) | NIBSC | 14/254 | 불활성화, 부분 정제 A/스위스/9715293/2013 (NIB88) 바이러스 (ca. 55µ gHA/ml) |
| 인플루엔자 항원 A/Texas/50/2012 (H3N2)(NYMCX-223) | NIBSC | 13/112 | 불활성화, 부분적으로 정제된 A/Texas/50/2012 (H3N2)(NYMCX-223) 바이러스 (ca. 74µ gHA/ml) |
| 인플루엔자 항원 B/Brisbane/60/2008 | NIBSC | 13/234 | 불활성화, 부분 정제 B/Brisbane/60/2008 바이러스(ca. 42µ gHA/ml) |
| 인플루엔자 항원 B/Massachusetts/02/2012 | NIBSC | 13/134 | 불활성화, 부분적으로 정제된 B/Massachusetts/02/2012 바이러스(ca. 35µ gHA/ml) |
| 혈청 튜브 | S-Monovette, Sardstedt | 01.1601.100 | 응고 활성제를 사용한 혈청 추출용 |
| 단일 기증자 인간 적혈구, 유형 0 | 혁신적인 연구 | IPLA-WB3 | Alsever's solution에서 단일 기증자 인간 적혈구의 현탁액(약 26%) |
| 터키 RBC (10 %) | Cedarlane | CLC1180 | 에서 칠면조 적혈구의 10 % 현탁 |
| Gibco |
참고문헌
- Prevention and control of seasonal influenza with vaccines. Recommendations of the Advisory Committee on Immunization Practices--United States, 2013-2014. MMWR Recomm Rep. 62, Centers for Disease, C. & Prevention. RR-07 1-43 (2013).
- Dominguez-Cherit, G., et al. Critically Ill patients with 2009 influenza A(H1N1) in Mexico. JAMA. 302 (17), 1880-1887 (2009).
- Fox, B. D., et al.
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