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방법 논문

마우스의 심장 형태학의 echocardiographic 및 조직학 검사

22.5K 조회수

⸱

DOI:

10.3791/55843

⸱

2017년 10월 26일

 ,  ,  ,  , 
1Université Côte d’Azur, CNRS, INSERM, iBV, 2Department of Pathology, CHU Nice, 3Institute for Molecular Health Sciences, ETH Zurich

이 논문에서

요약

Echocardiographic 시험 쥐에서 자주 사용 됩니다. 비싼 고해상도 초음파 장치가이 목적을 위해 개발 되었습니다. 이 프로토콜에서는 심장 형태를 결정 하는 조직학 형태학 분석 함께 저렴 한 echocardiographic 절차를 설명 합니다.

초록

유전자 변형된 마우스 모델의 증가 최근 몇 년 동안에서 가능한 되고있다. 또한, 약리 연구에서 쥐의 수는 높다. 이 마우스 모델의 phenotypic 특성에는 심장 기능과 형태학의 검사를 필요합니다. 심장 초음파 및 자기 공명 영상 (MRI)은 심장 기능과 마우스 형태학 특성을 일반적으로 사용 되 접근법입니다. Echocardiographic 및 MRI 장비 전문 사용 작은 설치류에 비싼 하 고 전용된 공간이 필요 합니다. 이 프로토콜 15 MHz 인간의 혈관 프로브 임상 echocardiographic 시스템을 사용 하 여 마우스에 심장 측정을 설명 합니다. 측정은 마 취 성인 쥐에 수행 됩니다. 적어도 3 개의 이미지 시퀀스는 기록 하 고 parasternal 짧은 축 보기에서 M 모드에서 각 동물에 대 한 분석. 나중에, 심장 조직학 검사 수행 및 cardiomyocyte 직경 hematoxylin에 결정 됩니다-오신-또는 밀 세균 agglutinin (WGA)-파라핀 섹션 스테인드. 배 밀도 Pecam-1 immunostaining 후 결정된 morphometrically입니다. 프로토콜 약리 연구에 성공적으로 적용 하 고 다른 유전 동물 모델의 왼쪽된 앞쪽 내림차순 관상 동맥 (영구 결 찰 하 여 실험적인 심근 경색 후에 뿐만 아니라 초기 조건 되었습니다. 젊은이)입니다. 우리의 경험에서는, echocardiographic 조사 마 취 동물에 제한 되 고 적어도 무게 성인 쥐에 가능 25 g.

서론

유전자 변형된 마우스 모델의 큰 다양 한 사용할 수 있습니다, 하 고 약리 연구에서 쥐의 수는 높은1,2. 심장 초음파 및 MRI은 심장 기능과 형태학이 마우스 모델3의 phenotypic 특성 일반적으로 사용 되 접근법입니다. 제시 프로토콜의 목적은 심장 기능과 성인 쥐에 형태 분석입니다. 그것은 echocardiographic, 조직학, 결합 및 immunohistochemical 측정. Echocardiographic 시험 쥐4,5,6,7,,89,10,11에서 널리 이용 된다 12. Pachon 외. 11 식별 205 연구 2012과 2015 사이의 순환, 순환 연구, 미국의 저널의 생리-심 혼과 순환 상 생리학, 및 심장 혈관 연구 에 게시 동물에 echocardiographic 검사를 사용합니다.

심장 초음파는 심장 고기 유전자 변형된 쥐5,6,13,,1415,16, 를 식별 하는 데 17 , 18 , 19 , 20 , 21 , 22, 또한 만성 과부하 유발 비 대, 심근 허 혈, 및 쥐 (12에서 검토) 심장 근육 병 증 모델에서 심장 기능 분석으로. 향상 된 심장 초음파 장비에 대 한 수는 왼쪽 심 실 (LV) 수축 기 및 diastolic 차원, 조직 도플러 영상, 심근 대비 진단법, 그리고 라스베가스 지역 기능과 관상 예비 의 평가의 표준 측정 12. 이상적으로, echocardiographic 시험 수축 기능, 자율 반사 제어에 마 취의 부정적인 영향을 피하기 위해 의식 쥐에서 수행 해야 하 고 심장 속도11. 그럼에도 불구 하 고,이 방법은 동물; 훈련 요구에 의해 제한 됩니다. 안정적인; 체온 유지에 어려움 운동 유물; 스트레스; 매우 높은 심장 주파수; 그리고 동물의 많은 수는 조사 하는 경우에 특히 실험을 수행 하기 위해 두 개 이상의 조사에 대 한 요구 사항. 흥미롭게도, 최근 연구 보고 훈련 하 고 훈련 되지 않는 동물19에 echocardiographic 매개 변수에서 차이가. 우리는 마 취 쥐에 echocardiographic 측정을 수행합니다. 다른 마 취 프로토콜 아래에 설명 될 것 이다.

비록 표준 해상도 심장 초음파 (> 10 MHz)은 측정 LV 수축 기 및 diastolic 크기와 성인 쥐에 심장 기능에 충분 한, 메서드를 기본 구조 현상의 설명에 제한 됩니다. 따라서, 우리가 결합 조직학을 vivo에서 측정 및 측정, 예를 들어 cardiomyocyte 직경 및 배 밀도를 immunohistological 분석. 동일한 유형의 다른 조직학 및 immunohistological 조사, 확산의 결정, apoptosis, 경색 크기 측정, 섬유 증, 및 특정 마커 식의 검사를 수행할 수 있습니다. 조직 처리 하지만이 프로토콜의 대상이 되지 않습니다. 조직학 분석 비보에 echocardiographic 시험의 기본 구조 변경에 대 한 추가적인 통찰력을 제공합니다. 추가 단계에서 우리는 분자와 울트라 구조 조사와이 측정을 완료할 수 있습니다. 조직학 분석 echocardiographic 시험 완료 뿐만 아니라 또한 불가결 될 때 심장 초음파의 해상도 충분 하지 않습니다. 이것은 유전자 변형된 생쥐 배아 치명적인23,24의 모델의 경우 특히.

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프로토콜

여기에 설명 된 실험 관련 기관 및 프랑스 동물 복지 법률, 지침 및 정책에 따라 실시 했다. 그들은 프랑스 윤리 위원회에 의해 승인 되었습니다 (위원회 회의 Institutionnel d ' Ethique 부 l ' 동물 드 응용; 번호 후부 터/2012-106).

1. 심장 초음파

  1. 꼬리 가볍게 잡고 적절 한 위치를 표준 실험실 균형을 사용 하 여 마우스의 몸 무게를 확인.
  2. 50 mg/kg pentobarbital 25 , 26의 복 (i.p.) 주입에 의해 동물 anesthetize.
    참고: 연구를 통해 동일한 프로토콜을 사용 하는 경우 마 취의 다른 종류를 사용할 수 있습니다. 장단점은 아래에 설명 될 것 이다.
  3. 마우스 응답 하지 않는 때까지 그것의 자신의 감 금 소 및 대기에 다시, 그것은 보여줍니다 지속적인 호흡, 그리고 후방 발 반사는 결 석. 이 테스트 하려면 약간 발을 짜 내 고 다리는 여전히 리트랙트 여부 관찰.
  4. 왼쪽 흉부와 상업 설치류 면도기를 사용 하 여 왼쪽된 겨드랑이 면도.
    참고: 전용된 설치류 면도기를 사용 하 여 정밀한 마우스 머리의 완전 한 제거를 위한 echocardiographic 측정에 간섭을 유발 하지 않도록 허용 됩니다. 상업적인 머리 제거 크림 또는 솔루션 피해 야 한다로 그들은 일반적으로 향수, 그것은 일어나 야 후 동물을 방해 합니다. 열 손실을 증가, 과도 한 면도 하지 마십시오.
  5. 따뜻한 패드 12 머리 얕은 왼쪽 양면 위치, 40-42 ° C로 설정 자 고 동물을 넣어 o ' 시계와 6 꼬리 o ' 시계. 테이프로 왼쪽된 팔, 왼쪽된 다리, 그리고 꼬리 수정.
  6. 적용 사전 예 열 변환기의 머리 면도 가슴에 심장 초음파 젤.
  7. 배치 변환기 parasternal-왼쪽, 젖꼭지 근육의 수준에 2 차원 (2D) parasternal 긴 축 보기를 목의 오른쪽으로 그것을 지시 합니다. Papilary 근육 수준에서 짧은 축 보기를 시계 방향으로 90 ° 변환기를 설정 합니다. 최소 깊이 설정과 확대/축소를 사용 하 여 이미지 품질 및 프레임 속도 최대화 하기 위해. 스윕 속도 최대로 설정. 이러한 설정, 다른 확대/축소 및 깊이 옵션 설정
    1. 컴퓨터와 소프트웨어에 따라 사용할 수 있습니다. 2D 기반 M 모드 이미지를 기록 짧은 축에 27 볼. 그림 1A와 B 27을 참조 하십시오.
      참고: 주의 가슴에 과도 한 압력을 적용 하지 않도록이 bradycardia을 발생할 수 있습니다.
  8. 각 동물에 대 한 3 마음 이길 시 네 루프의 기록 이상 3 시리즈.
    참고:이 연구에 사용 된 echocardiograph 소프트웨어에 대 한 누르십시오는 " 취득/저장 " 버튼을 한 번만. 이 방법론은이 특정 소프트웨어와 함께 echocardiograph에 적용 됩니다. 다른 컴퓨터와 다른 소프트웨어 패키지를 사용할 수 있습니다.
  9. 성공적인 기록, 닦아는 심장 초음파 젤 마우스 흉부, 생리대, 및 변환기에서 후. 사지 및 꼬리에서 테이프를 제거.
  10. 관찰 하 난방 패드, 손실을 방지 하기 위해 불필요 한 빛 노출 및 열, 최대 절전 모드 해제 될 때까지 조직으로 덮여에 마우스를 두고
  11. 동물의 장에 다시.
  12. 분석 parasternal 짧은 축 보기 왼쪽된 심 실 (LV) 치수 및 기능 결정에서 M 모드 이미지 기록. Systole와 심장 (LVAWs 및 LVAWd), LV 내부 끝 심장 수축 및 끝 확장기 직경 (LVIDs 및 LVIDd), 및 systole와 심장 (LVPWs 및 LVPWd)를 사용 하 여 LV 후부 벽 두께 (LVPW)에서 LV 앞쪽 벽의 두께 측정 합니다 저장 된 이미지에 조직 혈액 인터페이스의 식별.
  13. 명백한 최대한 LV 확장기 차원 시 확장기 치수를 측정 하 고 끝 심장 수축 차원 LV 후부 벽의 가장 앞쪽 수축 여행 시 LV. 터치 스크린에 꼭지는 " 분석 " 아이콘 다음에 " LVAWd " 아이콘. 오른쪽 심 실 구멍 및 심장에 LV 앞쪽 벽 사이의 인터페이스에 전자 캘리퍼스 위치.
  14. 전자 캘리퍼스 LV 앞쪽 벽와 LV 확장기 앞쪽 벽 두께를 LV 구멍 사이의 인터페이스에 위치, 소프트웨어 직접 LV 내부 끝 확장기 측정으로 전환 됩니다.
  15. LV 구멍 및 LV 직경 내부 끝 확장기를 LV 후부 벽 사이의 인터페이스에는 캘리퍼스를 위치, 소프트웨어 LV 후부 벽 두께 측정으로 전환 됩니다.
  16. LV 후부 벽과 LV 확장기 후부 벽 두께를 심장 막 간의 인터페이스에는 캘리퍼스를 배치 합니다. LV 수축 차원에 대 한 스크린에 터치에는 " LVAWs " 아이콘 및 위치 오른쪽 심 실 구멍 및 LV 앞쪽 벽 사이의 인터페이스에 전자 캘리퍼스 systole.
  17. LV 앞쪽 벽와 LV 수축 앞쪽 벽 두께를 LV 구멍 사이의 인터페이스에 전자 캘리퍼스를 배치 합니다. LV 내부 끝 수축 기 직경 및 LV 수축 후부 벽 두께 대 한 위에서 설명한 대로 프로세스를 반복 합니다. 심장 초음파 검사의 미국 사회에 의해 채택-첨단 규칙을 사용 하 여 추적 endocardial epicardial 테두리 13 , 27.
    참고: LV 수축 함수 매개 변수 자동으로 계산 됩니다 이전 측정을 사용 하 여. 분수 (FS) 단축 LV FS (%)로 정의 됩니다 [(LVIDd-LVIDs)/LVIDd =] x 100. LV 방출 분수 (EF) 수정된 Teicholz 수식으로 계산 됩니다 어디 EF (%) = [(LVIDd3-LVIDs3)/LVIDd 3] x 100 12. 그림 1A와 B를 참조 하십시오.
  18. USB 메모리 스틱 또는 콤팩트 디스크에 데이터를 저장 하 고 백업 복사본.
  19. 가져오기, 분석, 그리고 적절 한 소프트웨어를 사용 하 여 데이터를 내보냅니다.
    참고: 이러한 기준선 측정 후 실험 수 일시 정지 됩니다. 녹아웃 동물 및 야생-타입 littermates 사이 직접적인 비교를 수행 하는 경우 진행 조직학 분석 6. Cre-ERT2;에 대 한 lox/lox 마우스 라인 설명된 5 , 24로 i.p. 주입 tamoxifen 유도 함께 다음 날 계속. Echocardiographic 측정 후 직접 수술을 수행할 수 왼쪽된 관상 동맥 5 , 28의 결 찰 하 여 실험적인 심근 경색을 유도 하는 경우 때 쥐 마 취를 받고 있다입니다. 그렇지 않으면, 1 주일 사이 마 취의 두 라운드의 최소 지연 수술 치의 속도 제한에 유지 되어야 합니다.

2. 조직학 평가 위한 심장 샘플의 준비

  1. 경부 전위에 의해 동물 희생. 그들의 몸 무게를 측정 합니다. 가슴 및 복 부를 70% 알코올 면봉을 사용 하 여 소독.
  2. 게 가로 절 개 피부 1cm에에서 원심 흉 골. 무딘 집게를 사용 하 여, 가슴, 머리의 방향으로 이동에서 피부를 제거 합니다. 좋은 집게와 흉 골을 가볍게 잡고 하 고 좋은 위의 무뚝뚝한 끝을 삽입 하 여 횡 경 막 엽니다.
  3. 흉 골에 평행 하 게 양쪽에 흉 곽을 잘라. 흉 골의 머리 방향으로 이동 합니다. 가슴에서 마음을 찾습니다. 좋은 집게와 심장의 혈관 트렁크를 누른 좋은 위를 사용 하 여 아래 컷.
  4. 가슴을 열고 삭제할 흉부에서 전체 심장, 심장 무게를 측정 고 설정 마음-몸 무게 비율 4 , , 5 6 , 23 , 29 , 30 < /sup >.
  5. 수정 2 ml 15 mL 튜브에 10% 중립 버퍼링 된 포 르 말린 솔루션의 심장 4에서 하룻밤 ° C.
    주의: 위험! 화학 증기 두건;에 말린 솔루션 작업을 수행 해야 합니다. 착용 장갑 및 안전 안경.
    참고: 말린 솔루션에 대 한 버퍼 구성 다른 공급 업체에 따라 다릅니다, 연구를 통해 동일한 공급 업체 사용.
  6. 다음 날, 마음, 중간에서 가로 평면에서 잘라내어 파라핀 포함, 카세트에 그들을 전송는 자동된 삽입 장치를 사용 하 여 병 리 실험실에서 수행 됩니다.
  7. 단면 수행.
    1. 섹션 파라핀 톰와 40 ° C 물에 포함 된 증류수 목욕 float를 사용 하 여 3 µ m의 두께에서 차단.
    2. 이전 슬라이드에 섹션. 37 ° C 배양 기에서 건조 하룻밤 슬라이드를 허용 하 고 사용을 위해 준비 될 때까지 4 ° C에서 저장.
      참고: 프로토콜 일시 중지할 수 있습니다 여기 사용자 얼룩 (3 단계)에 대 한 준비가 될 때까지.
  8. Deparaffinize 및 리하이드레이션 조직 슬라이드.
    1. 얼룩이 지는 파라핀을 녹여 10 분 55 ° C 오븐에 유리 삽입과 함께 항아리에 슬라이드를 놓습니다.
    2. Deparaffinize 크 실 렌 또는 크 실 렌 대신 5 분의 200 mL의 두 변경에서 슬라이드.
      주의: 매우 가연성 및 독성! 화학 증기 두건;에서 일 착용 장갑 및 안전 안경.
    3. 는 100% 알코올 200ml에 슬라이드를 전송합니다. 3 분 동안 두 변경 하 고 3 분에 대 한 95% 알콜 200 mL를 통해 한 번 전송
      주의: 가연성! 멀리 점화;의 소스 금연.
    4. 린스 200 mL의 인산 염 버퍼 염 (PBS) 5 분에 두 번 3, 4, 또는 5 단계를 계속 하 고.

3. 되며 고 오신 얼룩

  1. 증류수에 그들의 단면도 가진 슬라이드 린스.
  2. 8 분에 대 한 되며 솔루션 핵 얼룩
  3. 실행 하는 10 분에 대 한 수돗물에 씻어
  4. 2 분에 오신 솔루션 얼룩
  5. Dehydrate 100% 에탄올 (EtOH)에 2 분 동안 세 번. 크 실 렌 또는 크 실 렌 대신에 2 분 동안 세 번을 선택을 취소 합니다. 크 실 렌 기반 설치 매체에 마운트.
  6. 는 슬라이드 사진 하 고 interventricular 심장의 경도 섹션에서 핵의 수준에서 cardiomyocyte 직경을 측정 한다. 심장 당 세 섹션 및 섹션 당 적어도 100 셀 측정.

4. WGA 얼룩

  1. tetramethylrhodamine (또는 다른 형광 성 염료) 2.7 단계에서 가져온 슬라이드를 품 어-습 한 챔버에 실 온에서 60 분에 대 한 WGA (PBS에 1: 100)를 활용.
  2. PBS를 가진 5 분 세 번 세척.
  3. 마운트 형광 DAPI 포함 된 미디어를 탑재와 함께입니다. 분석 하기 전에 어둠 속에서 4 ° C에서 저장소.
    주의: 눈 보호와 호환 화학 내성 장갑 착용.
  4. 슬라이드 사진.
    1. 사용 현미경 epi 조명 형광 및 필터 DAPI와 tetramethylrhodamine (테이블의 자료를 참조)를 설정 합니다. 최대 밝기를 자동 노출 조리개 설정.
    2. 취득 파란색과 빨간색 채널에 대 한 400 x 배율에서 이미지를 구분합니다. ImageJ에서 이미지를 엽니다. 밝기를 조정 하 고 필요한 경우를 대비 (이미지 > 조정 > 밝기/대비).
    3. 8 비트 각 이미지 설정 (이미지 > 유형 > 8-비트). DAPI WGA 이미지 오버레이. DAPI를 빨강 채널 파랑 채널을 사용 하 여 WGA;에 대 한 없음으로 녹색과 회색 채널 설정 (이미지 > 색상 > 채널 병합) 31.
  5. Cardiomyocyte 직경 interventricular 심장의 횡 근 섹션에서 핵의 수준에서 결정.
    1. 정의 ImageJ에 이미지의 규모. 이 목적을 위해 (예를 들어, 심장 섹션으로 같은 확대 hemocytometer 챔버; 단계 4.4) 알려진된 크기의 사진.
    2. 처음부터 끝까지 선을 그리는 직선 도구를 사용 하 여 알려진 구조 (분석 > 규모 설정).
      참고: 픽셀에서 거리 표시 됩니다 자동으로; 알려진된 거리와 길이 단위 입력 해야 합니다. 핵의 수준에서 cardiomyocyte 측정 진행.
    3. WGA-긍정적인 세포 막의 반대 사이트에 DAPI 긍정적인 핵 통해 WGA 긍정적인 막에서 직선을 그릴 (분석 > 측정). 결과 창에서 길이 값 소수 자릿수의 의미 있는 수 있는지 확인 (분석 > 측정을 설정 > 소수 자릿수).
    4. 심장 당 세 섹션 및 섹션 당 적어도 100 셀을 측정합니다. 결과 Excel로 내보내기 (결과 클릭 > 파일 >로 저장 >.csv) 6 , 31.

5. Pecam-1 Immunostaining

  1. 항 unmasking 수행.
  2. 나트륨 시트르산의 추가 1, 600 mL
      버퍼 (10 m m 나트륨 구 연산 염, 0.05% 트윈 20, pH 6.0) 압력 밥 솥입니다. 열판에 압력 밥 솥을 놓고 전체 전력에 그것을 설정 합니다. 이 시점에서; 압력 밥 솥의 뚜껑을 확보 하지 마십시오 단순히 위에 휴식.
      주의: 핫!
    1. 나트륨 구 연산 염 버퍼 끓는 일단 단계 2.5에서에서 압력 밥 솥 슬라이드를 전송. 압력 밥 솥 뚜껑을 보호 합니다. 밥 솥 전체 압력에는, 7 분을 기다립니다. 7 분 경과 열판을 해제 하 고 빈 싱크대에 압력 밥 솥을 배치. 압력 방출 벨 브를 활성화 하 고 밥 솥을 통해 냉 수를 실행. 그것은 드 가압, 일단 뚜껑 열고 냉 수 5 분 장소에 대 한 솥에 슬라이드에서에서 실행 200 mL PBS의.
      참고: 또는, 마이크로웨이브 항 unmasking 사용할 수, 과열 위험 증가.
  3. 사용 0.3%의 5 분에 대 한 블록 내 인 성 과산화 효소 활동에 메탄올에 과산화 수소 3 시간 2 분에 대 한 PBS의 각에서 200 mL에 대 한 슬라이드를 린스.
    주의: 가연성 및 독성!
  4. 희석된 정상적인 차단 혈 청 (PBS에 5% 정상 염소 혈 청) 또한 avidin 블록 (4 방울 1 ml에서)을 포함 하는 15 분에 대 한 슬라이드를 품 어.
  5. 신중 하 게 섹션에서 액체 누르고 토끼에서 Pecam-1 항 체, mL 당 biotin 블록의 2.5% 정상 염소 혈 청 및 4를 포함 하는 PBS에 희석된 1시 50분으로 그들을 품 어. 4 습 한 챔버에 하룻밤 슬라이드를 품 어 ° c.
  6. 는 PBS의 200 mL에 5 분에 대 한 세 번 슬라이드를 씻어. Biotinylated 염소-토끼 IgG 항 체 희석 1: 200 실 온에서 1 h 2.5% 정상 염소 혈 청을 포함 하는 PBS에로 섹션을 품 어. PBS의 200 mL에 5 분에 대 한 세 번 슬라이드를 씻어.
  7. 품 어 t그는 20 분 (시 약 A와 결합 된 30 분 이전 해야 시 B 사용)에 대 한 과산화 효소 avidin/biotin 기반 시스템 섹션입니다. PBS의 200 mL에 5 분에 대 한 세 번 슬라이드를 씻어.
  8. 분해 1 3, 3 '-diaminobenzidine (한 덩어리)와 과산화 수소 1 요소 두 번 증 류 물 5 mL에 태블릿. 약 3 분, 컬러 개발을 신중 하 게 모니터링 DAB 솔루션 섹션을 품 어. 부드럽게 200 ml PBS의 슬라이드를 세척 하 여 발 색 반응을 중지.
    주의: 발암 성; 화학 방지 장갑 착용!
  9. 는 Hematoxylin와 6 분에 대 한 핵 counterstain. 100% 알코올 200ml에 2 분을 위한 3 시간 2 분 Dehydrate의 수돗물을 실행에 린스. 크 실 렌 또는 크 실 렌 대신에 각 200ml 3 시간 2 분 대 한 선택을 취소 합니다. 크 실 렌 기반 설치 매체에 마운트.
  10. (적어도 10 필드 각 심장의 interventricular 심장에서 40 x 확대) 슬라이드 사진 하 고 자유롭게 사용할 수 ImageJ 소프트웨어 31를 사용 하 여 Pecam-1 영역 밀도 측정 한다. DAB 및 되며 색상 deconvolution 32 플러그인을 사용 하 고 같은 수준으로 이미지 대비를 조정.
    참고: 갈색과 보라색/파란색 색상 색상 deconvolution 어려움이 발생할 수 있습니다, 중요 한 스펙트럼 중복 경우에 하나를 명확 하 고, 밝은 파란색 핵 얼룩 되며 솔루션의 다른 브랜드를 시도할 수 있습니다. 면역 형광 검사 또는 모 세관의 수동 계산을 수행할 수 또는.

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결과

그림 1, 대표 echocardiographic 녹음 유전자 변형 쥐에서 심장 고기를 식별 하기 위해 심장 초음파의 유용성을 보여 줍니다. 정상적인 심장 기능 (그림 1A)와 마우스 및 넓혀 진된 좌 심 실 및 감소 된 LV 기능 (그림 1B)와 동물의 차이 쉽게 확인 될 수 있다. 그림 2 에서는 cardiomyocyte 비교 직경 측정 (그림 2A) 없이 동물 및 심장 비 대 (그림 2B) 되며 오신 스테인드 파라핀 심장 섹션의 측정을 사용 하 여 심 혼 직물의 경도 섹션입니다. 그림 3 에서는 c...

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토론

다른 방법은 심장 구조와 쥐, 심장 초음파, 등 대비 강화 된 MRI, 마이크로 CT, PET 스캔 기능을 평가 하기 위해 개발 되었습니다. 비용 효율성과 단순함, 심장 초음파는 마우스11기능 분석에 대 한 가장 널리 사용 되 기술입니다. 마음과 쥐에서 심장 박동, 주파수 변환기의 높은 주파수의 작은 크기 때문에 일반적으로, > 10 MHz 해야 사용할 수 있지만 성공적인 측정 8 또는 9 MHz 변환기4,7 보고 되었습니다 . 심장 기능은 체온과 심장 주파수에 밀접 하 게 관련 된다, 그것은 연구를 통해 이러한 매개 변수를 제어 하는 것이 중요입니다. 생리대에 마우스를 배치 마 취 동물의 체온 일정 유지 필수적 이다. 이상적으로, 몸 온도 38 ° C를 설정 하는 직장 프로브 제어 난방 패드를 사용 해야 합니다. 이 사용할 수 없는 경우에가 열 패드 2이 값 보다 3도 설정...

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공개 사항

저자는 공개 없다.

감사의 글

작품 "미래 위한 투자" LABEX SIGNALIFE 프로그램 (참조 ANR-11-LABX-0028-01) (국립 연구 기관, ANR) 프랑스 정부에 의해 지원 되었다 하 고 공화국을 교부 금에 의해 협회에서 D. W. 부 la Recherche 쉬르 르 암, Fondation 드 프랑스, 고 암 Inserm 계획입니다. D. B.와 A. V. 받은 장학 Fondation 부 라 검색 Médicale에서에서와 니스의 도시에서 각각. 필립스에 의해 제공 되는 echocardiograph와 변환기를 친절 하 게 했다. 우리가 그들의 숙련 된 기술 지원에 대 한 A. Borderie, S. Destree, M. Cutajar Bossert, A. Landouar, A. Martres, A. Biancardini, 및 S. M. 바그너 감사합니다.

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재료

이 논문에 사용된 재료 목록
이름회사카탈로그 번호댓글
밀 배아 응집소 (WGA) 공액 테트라메틸로다민Life Technologies, Molecular ProbesW849
비오틴화 염소 항토끼 IgG 항체VectorlabsBA-1000
Avidin/Biotin 차단 키트VectorlabsSP-2001
VECTASTAIN Elite ABC HRP Kit (Peroxidase, Standard)VectorlabsPK-6100
DAPIVectorlabsH-1200
SIGMAFAST 3,3'-디아미노벤지딘 정제SigmaD4168
과산화수소 용액SigmaH1009
Anti-Pecam-1 (CD31) 항체Abcamab28364
초음파 투과 젤, Aquasonic 100Parker
젤선형 초음파 프로브, L15-7io필립스 헬스케어
심초음파, IE33 xMATRIX필립스 헬스케어
현미경, 라이카 DMi8라이카
형광 필터 세트 DAPI라이카11525304
필터 세트 TxR라이카11525310
디지털 카메라, SPOT RT3 컬러 슬라이더스폿 이미징
이미징 소프트웨어, SPOT 5.2 고급 및 기본 소프트웨어스폿 이미징
이미징 컴퓨터Dell
Fine ScissorsFine Science Tools14028-10
대형 가위Fine Science Tools14501-14
메스 블레이드Fine Science Tools10023-00
Graefe 집게파인 사이언스 도구11650-10
설치류 면도기하버드 장치34-0243
파라핀 임베딩용 카세트사쿠라4155F
중립 완충 포르말린사쿠라8727
크실렌사쿠라8733
파라핀 TEK III사쿠라4511
자동 임베딩 장치, Tissue-Tek VIPSakura6032
파라핀 임베딩 스테이션 Tissue-Tek TEC 5Sakura5229
마이크로톰 블레이드, Accu-Edge S35Sakura4685
현미경 슬라이드, Tissue-TekSakura9533
커버 슬립, Tissue-TekSakura9582
마운팅 매체 Tissue-TekSakura1408
슬라이드 박스, Sakura3958
에오신 용액, Sakura8703
헤마톡실린 용액, Sakura8711
마이크로톰, RM2125RTLeica720-1880 (VWR)
수조, Leica HI1210Leica720-0113(VWR)
에탄올VWRACRO444220050
15 ml 튜브VWR734-0451
스테인딩 글라스 접시VWRMARI4220004
염색 항아리VWRMARI4200005
인큐베이터바인더9010-0012
DAB 및 요소 과산화수소 정제, SIGMAFAST 3,3′-Diaminobenzidine 정제SigmaD4293
PBS (10X)Thermo Fisher Scientific70011044
가 포함된 VECTASHIELD 안티페이드 마운팅 배지

참고문헌

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