Echocardiographic 시험 쥐에서 자주 사용 됩니다. 비싼 고해상도 초음파 장치가이 목적을 위해 개발 되었습니다. 이 프로토콜에서는 심장 형태를 결정 하는 조직학 형태학 분석 함께 저렴 한 echocardiographic 절차를 설명 합니다.
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이 논문에서
요약
초록
유전자 변형된 마우스 모델의 증가 최근 몇 년 동안에서 가능한 되고있다. 또한, 약리 연구에서 쥐의 수는 높다. 이 마우스 모델의 phenotypic 특성에는 심장 기능과 형태학의 검사를 필요합니다. 심장 초음파 및 자기 공명 영상 (MRI)은 심장 기능과 마우스 형태학 특성을 일반적으로 사용 되 접근법입니다. Echocardiographic 및 MRI 장비 전문 사용 작은 설치류에 비싼 하 고 전용된 공간이 필요 합니다. 이 프로토콜 15 MHz 인간의 혈관 프로브 임상 echocardiographic 시스템을 사용 하 여 마우스에 심장 측정을 설명 합니다. 측정은 마 취 성인 쥐에 수행 됩니다. 적어도 3 개의 이미지 시퀀스는 기록 하 고 parasternal 짧은 축 보기에서 M 모드에서 각 동물에 대 한 분석. 나중에, 심장 조직학 검사 수행 및 cardiomyocyte 직경 hematoxylin에 결정 됩니다-오신-또는 밀 세균 agglutinin (WGA)-파라핀 섹션 스테인드. 배 밀도 Pecam-1 immunostaining 후 결정된 morphometrically입니다. 프로토콜 약리 연구에 성공적으로 적용 하 고 다른 유전 동물 모델의 왼쪽된 앞쪽 내림차순 관상 동맥 (영구 결 찰 하 여 실험적인 심근 경색 후에 뿐만 아니라 초기 조건 되었습니다. 젊은이)입니다. 우리의 경험에서는, echocardiographic 조사 마 취 동물에 제한 되 고 적어도 무게 성인 쥐에 가능 25 g.
서론
유전자 변형된 마우스 모델의 큰 다양 한 사용할 수 있습니다, 하 고 약리 연구에서 쥐의 수는 높은1,2. 심장 초음파 및 MRI은 심장 기능과 형태학이 마우스 모델3의 phenotypic 특성 일반적으로 사용 되 접근법입니다. 제시 프로토콜의 목적은 심장 기능과 성인 쥐에 형태 분석입니다. 그것은 echocardiographic, 조직학, 결합 및 immunohistochemical 측정. Echocardiographic 시험 쥐4,5,6,7,,89,10,11에서 널리 이용 된다 12. Pachon 외....
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프로토콜
여기에 설명 된 실험 관련 기관 및 프랑스 동물 복지 법률, 지침 및 정책에 따라 실시 했다. 그들은 프랑스 윤리 위원회에 의해 승인 되었습니다 (위원회 회의 Institutionnel d ' Ethique 부 l ' 동물 드 응용; 번호 후부 터/2012-106).
1. 심장 초음파
- 꼬리 가볍게 잡고 적절 한 위치를 표준 실험실 균형을 사용 하 여 마우스의 몸 무게를 확인.
- 50 mg/kg pentobarbital 25 , 26의 복 (i.p.) 주입에 의해 동물 anesthetize.
참고: 연구를 통해 동일한 프로토콜을 사용 하는 경우 마 취의 다른 종류를 사용할 수 있습니다. 장단점은 아래에 설명 될 것 이다. - 마우스 응답 하지 않는 때까지 그것의 자신의 감 금 소 및 대기에 다시, 그것은 보여줍니다 지속적인 호흡, 그리고 후방 발 반사는 결 석. 이 테스트 하려면 약간 발을 짜 내 고 다리는 여전히 리트랙트 여부 관찰.
- 왼쪽 흉부와 상업 설치류 면도기를 사용 하 여 왼쪽된 겨드랑이 면도.
참고: 전용된 설치류 면도....
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결과
그림 1, 대표 echocardiographic 녹음 유전자 변형 쥐에서 심장 고기를 식별 하기 위해 심장 초음파의 유용성을 보여 줍니다. 정상적인 심장 기능 (그림 1A)와 마우스 및 넓혀 진된 좌 심 실 및 감소 된 LV 기능 (그림 1B)와 동물의 차이 쉽게 확인 될 수 있다. 그림 2 에서는 cardiomyocyte 비교 직경 측정 (그림 2A) 없이 동물 및 심장 비 대 (그림 2B) 되며 오신 스테인드 파라핀 심장 섹션의 측정을 사용 하 여 심 혼 직물의 경도 섹션입니다. 그림 3 에서는 c.......
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토론
다른 방법은 심장 구조와 쥐, 심장 초음파, 등 대비 강화 된 MRI, 마이크로 CT, PET 스캔 기능을 평가 하기 위해 개발 되었습니다. 비용 효율성과 단순함, 심장 초음파는 마우스11기능 분석에 대 한 가장 널리 사용 되 기술입니다. 마음과 쥐에서 심장 박동, 주파수 변환기의 높은 주파수의 작은 크기 때문에 일반적으로, > 10 MHz 해야 사용할 수 있지만 성공적인 측정 8 또는 9 MHz 변환기4,7 보고 되었습니다 . 심장 기능은 체온과 심장 주파수에 밀접 하 게 관련 된다, 그것은 연구를 통해 이러한 매개 변수를 제어 하는 것이 중요입니다. 생리대에 마우스를 배치 마 취 동물의 체온 일정 유지 필수적 이다. 이상적으로, 몸 온도 38 ° C를 설정 하는 직장 프로브 제어 난방 패드를 사용 해야 합니다. 이 사용할 수 없는 경우에가 열 패드 2이 값 보다 3도 설정.......
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공개 사항
저자는 공개 없다.
감사의 글
작품 "미래 위한 투자" LABEX SIGNALIFE 프로그램 (참조 ANR-11-LABX-0028-01) (국립 연구 기관, ANR) 프랑스 정부에 의해 지원 되었다 하 고 공화국을 교부 금에 의해 협회에서 D. W. 부 la Recherche 쉬르 르 암, Fondation 드 프랑스, 고 암 Inserm 계획입니다. D. B.와 A. V. 받은 장학 Fondation 부 라 검색 Médicale에서에서와 니스의 도시에서 각각. 필립스에 의해 제공 되는 echocardiograph와 변환기를 친절 하 게 했다. 우리가 그들의 숙련 된 기술 지원에 대 한 A. Borderie, S. Destree, M. Cutajar Bossert, A. Landouar, A. Martres, A. Biancardini, 및 S. M. 바그너 감사합니다.
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재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| 밀 배아 응집소 (WGA) 공액 테트라메틸로다민 | Life Technologies, Molecular Probes | W849 | |
| 비오틴화 염소 항토끼 IgG 항체 | Vectorlabs | BA-1000 | |
| Avidin/Biotin 차단 키트 | Vectorlabs | SP-2001 | |
| VECTASTAIN Elite ABC HRP Kit (Peroxidase, Standard) | Vectorlabs | PK-6100 | |
| DAPI | Vectorlabs | H-1200 | |
| SIGMAFAST 3,3'-디아미노벤지딘 정제 | Sigma | D4168 | |
| 과산화수소 용액 | Sigma | H1009 | |
| Anti-Pecam-1 (CD31) 항체 | Abcam | ab28364 | |
| 초음파 투과 젤, Aquasonic 100 | Parker | ||
| 젤선형 초음파 프로브, L15-7io | 필립스 헬스케어 | ||
| 심초음파, IE33 xMATRIX | 필립스 헬스케어 | ||
| 현미경, 라이카 DMi8 | 라이카 | ||
| 형광 필터 세트 DAPI | 라이카 | 11525304 | |
| 필터 세트 TxR | 라이카 | 11525310 | |
| 디지털 카메라, SPOT RT3 컬러 슬라이더 | 스폿 이미징 | ||
| 이미징 소프트웨어, SPOT 5.2 고급 및 기본 소프트웨어 | 스폿 이미징 | ||
| 이미징 컴퓨터 | Dell | ||
| Fine Scissors | Fine Science Tools | 14028-10 | |
| 대형 가위 | Fine Science Tools | 14501-14 | |
| 메스 블레이드 | Fine Science Tools | 10023-00 | |
| Graefe 집게 | 파인 사이언스 도구 | 11650-10 | |
| 설치류 면도기 | 하버드 장치 | 34-0243 | |
| 파라핀 임베딩용 카세트 | 사쿠라 | 4155F | |
| 중립 완충 포르말린 | 사쿠라 | 8727 | |
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| 자동 임베딩 장치, Tissue-Tek VIP | Sakura | 6032 | |
| 파라핀 임베딩 스테이션 Tissue-Tek TEC 5 | Sakura | 5229 | |
| 마이크로톰 블레이드, Accu-Edge S35 | Sakura | 4685 | |
| 현미경 슬라이드, Tissue-Tek | Sakura | 9533 | |
| 커버 슬립, Tissue-Tek | Sakura | 9582 | |
| 마운팅 매체 Tissue-Tek | Sakura | 1408 | |
| 슬라이드 박스 | , Sakura | 3958 | |
| 에오신 용액 | , Sakura | 8703 | |
| 헤마톡실린 용액 | , Sakura | 8711 | |
| 마이크로톰, RM2125RT | Leica | 720-1880 (VWR) | |
| 수조, Leica HI1210 | Leica | 720-0113(VWR) | |
| 에탄올 | VWR | ACRO444220050 | |
| 15 ml 튜브 | VWR | 734-0451 | |
| 스테인딩 글라스 접시 | VWR | MARI4220004 | |
| 염색 항아리 | VWR | MARI4200005 | |
| 인큐베이터 | 바인더 | 9010-0012 | |
| DAB 및 요소 과산화수소 정제, SIGMAFAST 3,3′-Diaminobenzidine 정제 | Sigma | D4293 | |
| PBS (10X) | Thermo Fisher Scientific | 70011044 |
참고문헌
- Ormandy, E. H., Dale, J., Griffin, G. Genetic engineering of animals: ethical issues, including welfare concerns. Can Vet J. 52 (5), 544-550 (2011).
- Karl, T., Pabst, R., von Hörsten, S. Behavioral phenotyping of mice in pharmacological and toxicological resear....
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