우리는 장기간 생체 내 생체 태반 생리를 연구하기위한 상세한 방법을 제시합니다. 이 방법은 태아의 모체 및 태아 측에 유입 및 유출 혈관으로부터의 혈액 샘플링을 부피 혈류 및 태반 조직 샘플링의 초음파 측정치와 결합시킨다.
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이 논문에서
요약
초록
인간 태반은 여전히 utero에서 연구를 위해 매우 접근하기가 어렵습니다. 따라서 생체 내에서 인간 태반 생리학 에 대한 현재의 이해는 태반 해부학, 혈역학 및 임신 기간에있어서 종간의 다양성은 매우 높지만 동물 실험에 기반하고있다. 인간 태반 연구의 대다수는 생체 외 관류 연구 또는 시험관 내 영양막 연구입니다. 시험 관내 연구 및 동물 모델은 필수적이지만, 생체 내 인간 태반 에 대한 그러한 연구 결과의 외삽은 불확실하다. 우리 는 생체 내 에서 인간 태반 생리를 연구하고, 그 방법의 상세한 프로토콜을 제시하고자했다. 계획된 제왕 절개 도중에 자궁 절개 직전에 자궁 내 정맥에 대한 복강 내 접근을 이용하여 우리는 태반의 산모와 태아 측에서 들어오고 나가는 혈관으로부터 혈액 샘플을 채집합니다. 사기를 결합 할 때혈류량 측정을 통한 혈액 샘플의 중심 측정을 통해 태반 및 태아의 흡수 및 모든 화합물 방출을 정량화 할 수 있습니다. 또한, 동일한 모체 - 태아 쌍으로부터의 태반 조직 샘플은 운반체 밀도 및 활성 및 생체 내 태반 기능의 다른 측면의 측정을 제공 할 수있다. 이러한 4 혈관 샘플링 방법의 통합적 사용을 통해 우리는 정상 및 병리학 임신 모두에서 생체 내 태반 영양 전달 및 대사의 현재 개념을 시험 할 수 있습니다. 또한,이 방법은 태반에 의해 분비되는 물질을 모체 순환으로 확인하는 것을 가능하게하는데, 이는 태반 기능 장애의 바이오 마커 검색에 중요한 공헌을 할 수 있습니다.
서론
미국 국립 보건원 (National Institutes of Health)에 따르면, 태반은 인체 1 , 2 , 3 에서 가장 잘 이해되지 않는 기관입니다. 진행중인 임신에 비 윤리적 위험을 가하지 않으면 서 생체 내 에서 인간 태반 에 접근하여 연구하기가 어렵습니다. 그러므로 인간의 태반 기능에 대한 연구는 주로 시험 관내 및 생체 외 모델에 기반을두고있다. 태반 수송과 대사에 대한 이전 의 생체 내 연구의 대부분은 동물 4 , 5 , 6 에서 수행되었다. 그러나 태반의 구조와 기능은 종간에 상당히 다르기 때문에 인간에서 동물로 결과를 외삽하는 것은 신중해야한다. 인간 생체 내 (in vivo) 연구 에서 태아와 태아의 흡수 및 정상 생리학모든 조건을 가지고 있으며 , 화합물 7
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프로토콜
이 연구는 오슬로 대학 병원의 데이터 보호 관리 및 노르웨이 남부 의료 보건 연구 윤리위원회 (2419/2011)의 승인을 받았습니다. 모든 참가자는 포함시 서면 동의서에 서명했습니다.
1. 준비 사항
참고 : 절차 일정은 그림 1에 요약되어 있습니다.
그림 1 : 4- 용기 시료 채취 절차에 관련된 타이밍과 인원을 설명하는 순서도.
하나의 색상은 한 사람을 나타냅니다. 방법에 대한 자세한 설명은 프로토콜에 나와 있습니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.
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결과
4 혈관 샘플링 방법은 임상 실험에 적용 가능하며 우리는 209 명의 어머니 / 유아 쌍으로부터 혈액 샘플을 성공적으로 얻었습니다. 이 중 128 회에 우리는 또한 체적 유량을 측정했습니다. 70 마리의 모체 - 태아 쌍 ( 그림 3 )에서 모체와 태아 혈관 모두의 완벽한 4 혈관 표본 추출과 양질의 혈류 측정이 이루어졌습니다. 또한, 우리는 지금까지 30 명의 자간전증 환자로부터 혈액 및 태반 샘플을 수집했습니다. 우리는 이전에 방법 14 , 15 , 16 두 응용 프로그램을 보여주는 vasoactive 요인의 placental 릴리스뿐만 아니라, 인간의 태반이 양분 전송에 대한 기사를 게시했습니다.
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토론
태반 4 혈관 샘플링 방법은 세 가지 주요 목적과 관련이 있습니다. 첫째, 우리의 포도당과 아미노산 연구에 의해 입증 된 것처럼 특정 물질이 어떻게 모체 측의 태반에 흡수되어 제대혈과 태아로 옮겨지는지를 연구하는데 사용될 수 있습니다. 둘째,이 방법은 프로게스테론 결과에 의해 입증 된 것처럼, 태반에 의해 생성되어 산모 또는 태아 순환계로 방출되는 물질을 연구하는 데 매우 관련이 있습니다. 셋째, 빠른 성장과 조직 개조 과정 에서 생체 내 태아 가 어떻게 폐기물을 제거하는지 연구하는 것이 유용 할 수 있습니다.
4-vessel 방법의 중요 단계 및 물류 문제
태반 4 혈관 표본 추출은 정상적인 생리 임신 8 , 10 , 11 .......
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공개 사항
저자는 공개 할 것이 없습니다.
감사의 글
무엇보다도이 프로젝트에 참여한 어머니 들께 진심으로 감사드립니다. 다음으로, 우리는 샘플링 절차, 마취과 의사, 간호사 마취 전문의 및 외과 간호사를 돕고 촉진 한 모든 인원을 인정합니다. 이 프로젝트는 남유럽 노르웨이 지역 보건 당국과 노르웨이의 여성 건강, 오슬로 대학 자문단 및 오슬로 대학 병원이 제공하는 지역 기금으로 기금을 마련하지 않고는 불가능했을 것입니다.
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재료
혈액 샘플
, Arerial 캐뉼라 BD Medical 682245 또는 이와 유사한 20cc 편심 Luer Tip 주사기(바늘 Termo 없음), 주사기 를 , , , 자 차량
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| <강한>산모의 신체 구성 | |||
| 임피던스 척도 | Tanita | 또는 이와 유사 | |
| 한<강한>초음파 측정 | |||
| Sequoia 512 초음파 기계 | Acuson | 컬러 및 펄스파 도플러가 있는 곡선 변환기가 장착된 Acuson(주파수 대역폭 2 - 6MHz) | |
| SS-20ES | 또는 이와 유사한. 3 개가 필요합니다. | ||
| 10cc 편심 루어 팁 주사기(니들 없음 | Termo | SS-10ES | 또는 이와 유사). 9 필요. |
| 5cc 6% 루어 주사기(니들 없음 | Termo | SS-05S1 | 또는 이와 유사). 2개 필요. |
| 동맥혈 가스 주사기 | 방사선계 의료 | 또는 이와 유사한. 4 필요. | |
| 유연한 튜브에 연결된 멸균 날개 바늘, 21 게이지 | Greiner Bio-One | 450081 | (일회용).3 필요. |
| 진공 튜브 6 mL EDTA | Greiner Bio-One | 456043 | 또는 이와 유사한. 샘플 사이트가 있는 라벨. 10이 필요합니다. |
| Vacutainer 튜브, 5 mL, LH, 리튬 헤파린 분리기 | Greiner Bio-One | 456305 | 또는 이와 유사한. 샘플 사이트가 있는 라벨. 5 필요. |
| Vacutainer 튜브 6 mL 혈청 응고 활성제 | Greiner Bio-One | 456089 | 또는 이와 유사한. 샘플 사이트가 있는 라벨. 5 필요. |
| Vacutainer 튜브 3 mL 9NC 응고 나트륨 시트레이트 3.2% | Greiner Bio-One | 454334 | 또는 이와 유사합니다. 샘플 사이트가 있는 라벨. 5 필요. |
| 극저온 바이알, 2.0mL | Corning | 430488 | 또는 이와 유사한. 샘플 부위, 혈청/혈장 유형 및 ID. 90이 필요한 라벨. |
| 수술실에서 혈액 샘플을 운반하기 위해 | 운반하기 위한 주사기를 운반하는 표시가 있는 트레이 | ||
| 샘플의 부드러운 혼합을 위한 | 로커 | ||
| 스티로폼 상자에 | 얼음 | ||
| 적절한 용기에 | 액체 질소 | ||
| <강>태반 샘플 | |||
| 금속 트레이 | |||
| 스티로폼 상자 안의 | 얼음 | ||
| 보정 된 스케일 | |||
| 금속 눈금 | |||
| 1M 인산염 완충 식염수 | Sigma | D1408 | 또는 이와 유사한. 10m 희석 사용 전 1 M |
| RNA 안정화 솔루션 | Sigma | R0901-500ML | 또는 이와 유사한 |
| 최적 절단 온도(O.C.T.) 화합물 | vwr | 361603E | 또는 유사한 |
| 극저온 바이알, 2.0mL | Corning | 430488 | 또는 이와 유사한 것. 샘플 사이트가 있는 라벨. 콘텐츠 및 ID. 10이 필요합니다. |
| 원심분리기 튜브, 원뿔형 바닥 50mL | Greiner Bio-One | 227,285 | 또는 이와 유사한. "RNA later", 샘플 부위 및 ID. 2가 필요한 라벨. |
| 적절한 용기에 액체 | 질소 | ||
| <강>태아 체성분 | |||
| 보정된 저울 | |||
| 측정 테이프 |
참고문헌
- Jansson, T., Powell, T. L. Role of the placenta in fetal programming: underlying mechanisms and potential interventional approaches. Clin Sci (Lond). 113 (1), 1-13 (2007).
- Hanson, M. A., Gluckman, P. D. Early dev....
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