검색 및 대 식 세포 관련 Murine 창 자 염증의 정량화에 대 한 단층 형광 중재

Summary

특정 대상 프로브 질병 (예를 들어, 염증, 감염, 및 tumorigenesis)의 다양 한 종류의 단백질 표정 등의 분자 메커니즘을 분석 하기 위한 혁신적인 도구를 나타냅니다. 이 연구에서 우리는 murine 모델 f 4/80 전용 형광 중재 단층 촬영을 사용 하 여 대 장 염의 장 대 식 세포 침투의 양적 차원 단층 평가 설명 합니다.

Abstract

질병의 murine 모델은 과학적 연구에 불가결. 그러나, 내 시경 검사 나 컴퓨터 단층 촬영 영상 등 많은 진단 도구는 정기적으로 동물 모델에서 채택 하지. 기존의 실험 판독 자주 내 개별 후속 시험을 방지 하 고 필요한 연구 동물의 수를 증가 하는 사후 고 비보 전 분석에 의존 합니다. 형광-중재 단층 형광 프로브의 비-침략 적, 반복, 양적, 3 차원 평가 수 있습니다. 매우 중요 한 특정 검색 및 고유한 분자 대상의 특성에 대 한 수 있는 분자 제조 업체의 사용 허가 하 고. 특히, 타겟된 프로브 염증, 자가 면역 질환, 감염, 혈관 질환, 셀 마이그레이션, tumorigenesis, 등에서 유전자 활성화 및 단백질 발현을 분석 하기 위한 혁신적인 도구를 나타냅니다. 이 문서에서는, 우리 단계별 지침을 제공이 정교한 이미징 기술에 vivo에서 탐지 및 (즉, f 4/80-긍정적인 대 식 세포 침투)의 널리 murine 모델에서 염증의 특성에 대 한 장 염증입니다. 이 기술은 또한 면역 세포 또는 줄기 세포 추적 같은 다른 연구 분야에서 사용할 수 있습니다.

Introduction

동물 모델 연구에서 널리 이용 된다 그리고 모니터 질병 활동과 활력, 몸 무게 변경의 정량화 등 혈액, 소변, 배설물의 분석에 많은 비-침략 적 절차 존재 한다. 그러나, 이들은 또한 간 개별 다양성에 적용 되는 간접 대리 매개 변수만 있습니다. 그들은 자주 조직 표본, 반복 시간 지점에서 직렬 관찰 방지의 사후 분석으로 보완 해야 한다 고 에 비보를 처리 하는 생리 적 또는 병 적인 관찰. 정교한 이미징 기술에 작은 동물 등장, 교차 단면 영상, 광학 이미징 및 내 시경, 이러한 프로세스의 직접적인 시각화를 가능 하 게 하 고 또한 같은 동물¹ 의 반복적인 분석에 대 한 허용을 포함 한 ^{, 2 , 3}. 또한, 반복적으로 같은 동물에 있는 질병의 다양 한 상태 모니터링에 동물 윤리의 관점에서 것 필요한 하는 동물의 수 저하 될 수 있습니다.

여러 다른 광학 이미징 기술을 형광 이미징 vivo에서 존재 한다. 원래, confocal 영상 표면과 표면 아래 형광 이벤트^4,....

Protocol

모든 동물 실험 Landesamt 위한 Natur, Umwelt und Verbraucherschutz (LANUV) 노르 트 베스트 팔 렌 독일 동물 보호 법률 (Tierschutzgesetz)에 의해 승인 되었다.

1. 재료 및 실험 설치

1. 동물 케어입니다.
   1. (예를 들어, C57BL/6) 어떤 DSS 취약 긴장의 성별 및 나이 일치 마우스를 사용 하 여 20 ~ 25 g bodyweight에.
   2. 현지 동물 보호 지침에 따라 마우스 실험 그룹과 집 당 적어도 5 개 이상의 마우스를 계획 합니다.
   3. 다이어트 및 압력가 음료수 광고 libitum표준 설치류 차를 제공 합니다.
   4. 표준 차를 제거 하 고 파 무료 차 우와 최소 3 일 전에 endoluminal 자동 형광을 줄이기 위해 검색 합니다.
2. DSS 유발 급성 대 장 염의 감 응 작용입니다.
   1. DSS의 2 세대 분해 (분자량 40000 ~ 다)의 2% (w/v 솔루션)를 얻기 위해 압력가 마로 소독 식 수 100 ml.
   2. DSS....

Results

Colitis의 평가:

DSS 유도 colitis 인간의 IBD를 닮 고 체중 감소, 직장 출혈, 표면 궤, 그리고 취약 쥐¹⁵점 막 손상에 이르게 하는 창 자 염증의 화학적으로 유도 된 murine 모델입니다. 타고 난 면역 체계가 장내 염증^10,11의 발전에의 기여를 연구 특히 유용 합니다. Potently colitic 염증 유도, 쥐 들이 지속적으로 실험 통해 DSS를 관리. 체중 감소와 지저분한 신비로운 혈액 염증의 임상 색인으로 사용 되었다. 그림 1A에서 같이, 마우스 제어 동물 물 혼자 받고 몸 무게에 중요 한 변경 보여.......

Discussion

의료 이미징 기술을 최근 몇 년 동안에서 급속 하 게 진화, 비록 우리는 여전히 개발의 그들의 초기 단계에서 염증 성 프로세스 또는 종양, 뿐만 아니라 다른 질병을 감지 하는 우리의 능력에 제한 됩니다. 그러나, 이것은 이해 종양 성장, 침략, 또는 전이 개발 및 염증 성 질환 및 퇴행 성, 심장 혈관과 면역 질병의 발달에서 세포 프로세스에 매우 중요. 전통적인 이미징 기술을 신체적 또는 생리 적 매개 변수에 의존, 분자 이미징 vivo에서특정 분자 마커²⁰의 시각화 수 있습니다.

작은 동물 이미징, 방사성 핵 종 기반 접근 (예를 들어, s잉 글-광자 방출 계산 된 단층 촬영 (SPECT)과 양전자 방출 단층 촬영 (PET)), 초음파, 및 중재 하는 형광 이미징을 사용할 수 있는 특정 시각화 대상 분자 구조입니다. 대부분의 사용 가능한 추적 백본으로 전장 항 체를 사용 하 여 오랫동안 레이블을, 긴 순.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Reagents
Alfalfa-free diet	Harlan Laboritories, Madison, USA	2014
Bepanthen eye ointment	Bayer, Leverkusen, Germany	80469764
Dextran sulphate sodium (DSS)	TdB Consulatancy, 웁살라, 스웨덴	DB001
Eosin	Sigma - Aldrich, Deisenhofen, Germany	E 4382
에틸렌디아민테트라아세트산(EDTA)	시그마 - Aldrich, Deisenhofen, Germany	E 9884
Florene 100V/V	Abbott, Wiesbaden, Germany	B506
Haematoxylin	Sigma - Aldrich, Deisenhofen, Germany	HHS32-1L
O.C.T. Tissue Tek compound	Sakura, Zoeterwonde, 네덜란드	4583	조직학적 분석을 위한 고정제
인산염 완충 식염수, PBS	Lonza, Verviers, Belgium	4629
염화나트륨 0,9%	Braun, Melsungen, Germany	5/12211095/0411
중탄산나트륨 분말	Sigma Aldrich Deisenhofen, Germany	S5761
Standard diet	Altromin, Lage, Germany	1320
Tissue-Tek Cryomold	Sakura, Leiden, Netherlands	4566
Hemoccult (guaiac paper test)	Beckmann Coulter, Germany	3060
Biotin rat-anti-mouse anti-F4/80 antibody	Serotec, Oxford, UK	MCA497B
Biotin rat-anti-mouse anti-GR-1	BD Pharmingen, 하이델베르크	독일 553125
Streptavidin-Alexa546	Molecular Probes, Darmstadt, Germany	S-11225	excitation/emission maximum:  556/573nm
anti-CD11b rat-anti-mouse 항체 TC	Calteg, Burlingame, USA	R2b06
Purified anti-mouse F4/80 antibody	BioLegend, London, UK	123102
DAPI	Sigma-Aldrich, Deisenhoffen, Germany	D9542
FITC-conjugated anti-Ly6C rat-anti-mouse 항체	BD Pharmingen, Heidelberg, Germany	553104
FACS buffer	BD Pharmingen, Heidelberg, Germany	342003
Cy7 NHS Ester	GE Healthcare  유럽, 프라이부르크, 독일	PA17104
MPO ELISA	Immundiagnostik AG, Bensheim, Germany	K 6631B
Cy5.5 labeled anti-mouse F4/80	antibody BioLegend, London, UK		123127 ready to use labelled Antibodies (alternative)
Anti-Mouse F4/80 Antigen PerCP-Cyanine5.5	eBioscience, Waltham, USA	45-4801-80	ready to use labelled Antibodies (alternative)
DMSO (Dimethyl sulfoxide)	Sigma-Aldrich, Deisenhoffen, Germany	67-68-5
Isoflurane	Sigma-Aldrich, Deisenhoffen, Germany	792632
에탄올	Sigma-Aldrich, Deisenhoffen, Germany	64-17-5
소 혈청 알부민 (BSA)	Sigma-Aldrich, Deisenhoffen, Germany	A4612
Tris Buffered Saline Solution (TBS)	Sigma-Aldrich, Deisenhoffen, Germany	SRE0032
Name	Company	카탈로그 번호	Comments
Equipment
FACS Calibur 유세포 분석 시스템	BD Biosciences GmbH, 하이델베르크, 독일
FMT 2000 In Vivo 이미징 시스템	PerkinElmer Inc., Waltham, MA, USA	FMT2000
True Quant 3.1 이미징 분석 소프트웨어	PerkinElmer Inc., Waltham, MA, USA	FMT2000
Leica DMLB 형광 현미경	Leica,  35578 Wetzlar, Germany	DMLB
Bandelin Sonopuls HD 2070	Bandelin, 12207 베를린, 독일	HD 2070	초음파 균질기
일회용 메스 No 10	Sigma-Aldrich, Deisenhoffen, 독일	Z692395-10EA
Metzenbaum 가위 14cm	Ehrhardt Medizinprodukte GmbH, Geislingen, 독일	22398330
루어 잠금 주사기 5ml	Sigma-Aldrich, Deisenhoffen, 독일	Z248010
주사기 바늘	Sigma-Aldrich, Deisenhoffen, Germany	Z192368
Falcon Tube 50ml	BD Biosciences, Erembodegem, 벨기에	352070