Method Article

형태학 및 Murine 악의 관절 돌기 세포 분석 방법

DOI:

10.3791/55998

⸱

January 11th, 2018

 ,  ,  ,  , 
1Division of Orthodontics, University of Connecticut Health Center

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

이 원고 형태학 및 설치류의 악의 관절 돌기 내의 세포질 변화를 분석 하기 위한 메서드를 제공 합니다.

Abstract

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턱 관절 (TMJ) 외부 자극에 적응 하는 능력 있고 변경 로드 condyles의 위치 뿐만 아니라 악의 condylar 연골 (MCC)의 구조와 세포 구성 요소에 영향을 미칠 수 있습니다. 이 원고에는 이러한 변경 및 마우스 (즉, 압축 정적 TMJ 로드)에서 TMJ의 로드를 변경 하는 방법을 분석 하는 방법을 설명 합니다. 여기에 그림 구조 평가 Digimizer 소프트웨어를 사용 하 고 작은 뼈의 방사선에서 수행 되는 간단한 형태학 접근 이다. 또한, 휴대의 분석 선도 콜라겐 식, 뼈, 세포 분열, 변경에 변화와 proteoglycan 메일 고객 센터에서 설명 하는. 이러한 변화는 긍정적인 형광 픽셀을 사용 하 여 계산 하 여 조직학 단면도-의 정량화 이미지 소프트웨어 및 측정 거리 매핑 및 스테인드 영역 Digimizer-는 또한 설명 했다. 여기에 표시 된 메서드는 murine TMJ에 국한 되지 않습니다 하지만 추가 뼈 작은 실험 동물의 및 endochondral 나오고의 다른 지역에서 사용 될 수 있습니다.

Introduction

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TMJ craniofacial 지역에 위치한 독특한 로드 베어링 조인트 이며 fibrocartilage의 형성 된다. MCC는 TMJ의 말하기와 masticating, unhindered 턱 운동을 하 여 관절 기능을 위해 필수적 이지만 일반적으로 관절염1를 포함 한 퇴행 성 질환에 의해 영향을 받습니다. TMJ 고객 센터2,3,,45의 구성 요소 구조와 세포 변화를 선도 외부 자극 및 로드 변경에 적응 하는 능력이 있다. MCC의 부하 베어링 속성 그것의 성분, 물, 콜라겐 네트워크를 포함 하 고 밀도가 proteoglycans 포장 사이 상호 작용에 의해 설명 될 수 있다. 고객 센터는 콜라겐과 비 콜라겐 단백질의 종류를 나타내는 4 개의 고유 셀룰러 영역: 1) 표면 또는 관절 영역; 요구; 로드에 응답 하는 2) 증식 영역, 미 분화 간 엽 세포의 구성 성숙한 chondrocytes 표현 콜라겐 유형 2; 3) prehypertrophic 영역 구성 그리고 4)는 hypertrophic 영역, 콜라겐 표현 hyper....

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Protocol

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코네티컷 대학 건강 센터의 기관 동물 관리 위원회 승인 모든 동물 절차.

1. 압축 정적 TMJ 로드: 입 오픈 강요

참고: 4 주 오래 된 유전자 변형 쥐 박사 데이비드 로우 (코네티컷 대학), 친절 하 게 제공 하는 콜라겐 (Col2a1XCol10a1)에 대 한 형광 기자를 품고이 원고에 설명 된 실험을 위해 사용 되었다 (n = 8; 4 남성 및 4 명의 여성). 시안색 Col2a1 (블루) transgene MCC의 prehypertrophic 영역에는 셀에 표시 됩니다, 그리고는 Col10a1 동안 벚꽃 (빨간색) 셀 hypertrophic 지역8 (그림 1)에 있습니다. 마우스 동등 하 게 두 그룹으로 분할 되었다: 1) 로드 그룹, 쥐 쥐 없는 개입을 받은 컨트롤 그룹 (에서 설명한 단계 2) 및 2)를 로드 압축 정적 TMJ를 복종 되었다.

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Results

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기술 통계는 형태학 측정 (악의 길이, condylar 길이, condylar 폭) 및 조직학 분석의 분포를 검사를 수행 했다. 결과 로드 그룹 (즉, 마우스 베타 티타늄 스프링 압축 선적을 복종)와 (즉, 일치 하는 모든 프로시저에는 영향을 받지 않은 통제 쥐) 컨트롤 그룹 사이 비교 되었다. 수단 간의 통계적으로 유의 한 차이 짝이 없는 t-검정, 및 p-값에 의해 결정 되었다 < 0.05 통계적으로 중요 한 것으로 간주 되었다.

형태학 측정, 단계 4 및 그림 3에서 설명한 대로 로드의 mandibles 및 제어 그룹에서 수행 했다. 크게 증가 mandible 길이 제시 로드 그룹 (로드: 16.62 ± 0.23 m m 제어 대: 16.21 ± 0.2 m m; p &l.......

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Discussion

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이 원고는 형태학 측정 및 세포 분석 murine 악의 condyles mandibles의 방법을 설명합니다. 방사선 형태학 측정 작은 실험 동물에서 다른 뼈 분석을 사용할 수 있습니다. 또한, 세포 분석 (셀 정량화 및 연골 거리 매핑) 설치류 악의 관절 돌기에 국한 되지 않습니다 하지만 수많은 조직의 조직학 섹션 척도를 사용할 수 있습니다.

유전자 변형 마우스 모델 표현 형광 기자는 유전자 발현에 변화를 시각적으로 이해 우수한 도구입니다. Transgenes는 고객 센터의 prehypertrophic 및 hypertrophic 지역에서 그렇게 표현 됩니다 이후 더블 콜라겐 형광 기자 마우스 모델 (Col2a1XCol10a1)이이 보고서에 사용 되는 고객 센터의 연구에 특히 적합 했다 그 콜라겐 배포 평가 될 수 있습니다. 연구원에 형광 기자를 표현 하는 유전자 변형 마우스 모델에 액세스할 수 없는 경우에 조직학 단백질 표정 분석, 면역 형광 검사, 등의 다른 방법은 사용할 수.......

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Disclosures

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저자 아무 경쟁 금융 관심사 있다.

Acknowledgements

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저자는 친절 하 게 제공 하 고 유전자 변형 쥐 리 첸 조직학 지원에 대 한 박사 데이비드 로우를 감사 하 고 싶습니다.

이 간행물에 보고 된 연구는 국립 연구소의 치과 Craniofacial 연구의 보너스 번호 K08DE025914에서 건강의 국가 학회 및 미국 협회의 교정 기초 Sumit Yadav에 의해 지원 되었다.

....

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Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
MX20 방사선 촬영 시스템Faxitron X-Ray LLC 
디지마이저 이미지 소프트웨어 MedCalc 소프트웨어
Shandon Cryomatrix 임베딩 수지Thermo Scientific6769006
수동 현미경 Axio Imager Z1Carl Zeiss208562
노란색 형광 단백질 필터  - EYFPChroma Technology Corp49003
청록색 형광 단백질 필터 - ECFPChroma Technology Corp49001
빨간색 형광 단백질 필터 - Cy5Chroma Technology Corp49009
나트륨 아세테이트 무수Sigma-AldrichS2889
나트륨 L-타르타르트 이염기성 이수화물 시그마-알드리치228729
아질산나트륨 Sigma-Aldrich237213
ELF97 기판Thermo Fisher ScientificE6600
ClickiT EdU Alexa Fluor 594 HCS 키트Life TechnologiesC10339 EdU(5-에티닐-2'-데옥시우리딘) 포함 
DAPI (4',6-Diamidino-2-Phenylindole, Dihydrochloride)Thermo ScientificD1306
인산나트륨 이염기성 Sigma-AldrichS3264
인산나트륨 단일염기 시그마-알드리치71505
톨루이딘 블루 O 시그마-알드리치T3260
어도비 포토샵 Adobe Systems Incorporated
Phosphate 완충 식염수 정제(PBS)Research Products InternationalP32080-100T
CNA Beta III 니켈 프리 ArchwireOrtho Organizers, Inc.
GraphPad 프리즘 GraphPad 소프트웨어, Inc.

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. LeResche, L. Epidemiology of Temporomandibular Disorders: Implications for the Investigation of Etiologic Factors. Crit Rev Oral Biol Med. 8 (3), 291-305 (1997).
  2. Chen, J., et al.

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Mandibular Condyle AnalysisMorphometric MeasurementsHistological AnalysisCompressive TMJ LoadingCol10a1 ExpressionTRAP Activity QuantificationEDU StainingProteoglycan DistributionDigimizer SoftwareRadiograph Analysis

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