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방법 논문

높은 지방 다이어트 먹이 초파리 Melanogaster 의 높은 처리량 Triacylglyceride 분석 결과

11.3K 조회수

DOI:

10.3791/56029

2017년 9월 13일

이 논문에서

요약

이것은 높은 지방 다이어트를 먹이 초파리, 이해 기본적인 분자 메커니즘 lipotoxicity에 연루에 대 한 모델에서에서 비만 유발 하는 프로토콜 이다. 초파리 와 다양 한 식이, 환경, 유전적 또는 생리 적인 조건 하에서 (곤충) 잠재적으로 다른 모델에 지방 축적을 측정 하기 위한 높은 처리량 triacylglyceride 분석 결과를 제공 합니다.

초록

심장 질환은 인간의 죽음은 전세계의 번호 하나 원인이 다. 수많은 연구 비만 심장 기능 상실 사이 강한 연결 인간, 하지만 더 많은 도구 및 연구 노력 하는 데 필요한 더 관련 된 메커니즘을 명료 하 게. 세기 동안, 초파리 의 유전자 매우 온순한 모델이 되었습니다 핵심 유전자 및 분자 경로 매우 종에 걸쳐 보존 될 입증의 발견에. 많은 생물학 과정 및 질병 메커니즘 기능 개발 (예를 들어, 몸 계획, 심장), 암, 신경 질환 등 즉석에서 보존 하 고. 최근, 비만 심장 질환 모형 유기 체에서와 같은 보조 병 리의 연구는 인간의 신진 대사 증후군에 관련 된 주요 레 귤 레이 터의 식별에 매우 중요 한 역할을 했다.

여기, 우리는 비만, , 과도 한 지방 축적을 유발 하 고 태그 축적의 형태로 지방 콘텐츠를 모니터링 하는 효율적인 프로토콜을 개발 하는 효율적인 도구로이 모델 유기 체를 사용 하 여 제안 합니다. 높은 보존 뿐만 아니라, 하지만 덜 복잡 한 게놈 비행 또한 빠른 실험, 비용 효율성과 결합에 대 한 짧은 수명이 있다. 높은 지방 다이어트 (HFD) 비만 지방 콘텐츠에 높은 재현할 것을 목표로 관련된 증가 측정 하기 위한 높은 처리량 triacylglyceride (태그) 분석 결과 유도 하기 위해 초파리 에서 먹이 기를 위한 상세한 프로토콜을 제공 하는이 종이 대규모 유전자 또는 화학 심사에 대 한 효율적인. 효율적으로 규제 메커니즘 비만에 참여 조사 뿐 아니라 신약 개발에 약물의 효과의 빠른 테스트를 위해 발견에 대 한 표준화 된 플랫폼을 제공 하는 새로운 기회를 제공 하는 이러한 프로토콜 또는 비만, 당뇨병 및 대사 관련된 질환의 예방.

서론

우리는 비만, 및 그것의 관련된 경제적 부담이는 세계적인 문제1시간 에입니다. 매 3 미국인 중 2 개는 체중 또는 비만 관련된 심장 병 리, 성인 인구2내에서 죽음의 주요 원인으로. 새로운 효율적인 방법은 적절 하 게 구성 요소 유전 및 분자 모형 유기 체를 사용 하 여 변화 증후군의 규칙에 연루 조사 필요 합니다. 이러한 이유로, 우리 과일 파리 초파리 모델 생쥐와 인간3,4,,56을 포함 한 포유류와 함께 가장 기본적인 생물 학적 프로세스를 공유 하기 때문에 선택 합니다. 초파리의 게놈은 높게 진화 하는 동안 보존 하지만 전반적으로 훨씬 더 작은 적은 유전자 복제와 대사 복잡성,4 많은 인간 질병 내포 하는 근본적인 메커니즘을 이해 하기에 적합 , 7 , 8. 또한, 특성 프로세....

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프로토콜

1. 프로토콜을 먹이 HFD

figure-protocol-1
표 1. 비행 음식 레시피.
이 표에서 우리의 제어 음식을 준비 하는 데 사용 하는 다른 재료를 요약 합니다. 일단, 음식의 10 mL 작은 유리병에 부 어 냉각 이며, 장기 저장을 위한 4 ° C에 저장.

  1. HFD 준비
    1. 높은 지방 식품의 1kg를 만들기 위해 미리 만든 정상 비행 음식의 700 g의 무게 (표 1 참조) 및 분석 균형을 사용 하 여 두 개의 별도 용기에 코코넛 오일의 300 g.
    2. 는 내용을 완전히 용 해 될 때까지 각 컨테이너는 전자 레인지에서 개별적으로 열. 비행 음식 컨테이너에 코코넛 오일 붓으십시오. 기름은 비행 거리 음식으로 잘 혼합 때까지 털 다를 사용 하 여 저 어.
      참고: 아무 음식이 나 기름 덩어리는 표시 되어야 합니다. 날 식품은 전자 레인지에 때, 음식을 혼합 끓는 방지를 1 분 간격으로 중지.
    3. 다시....

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결과

D. melanogaster, 다른 종족과 경우는 성적인이 형태 성 남성 및 여성22사이. 그것은 잘 알려진 여성은 남성22보다 그들의 인체에 더 많은 지방, 더 큰입니다. 우리의 프로토콜의 효율성을 테스트 하려면 우리 차이 태그 콘텐츠 남성과 여성 표준 실험실 wildtype (w1118)의 파리 확인 하려면 태그 분석을 수행 합니다. 데이터는 여성의 그들의 남성 대조 물 (그림 2A, B) 보다 더 몸 전체 지방을 보여줍니다. 데이터는 또한 분석 결과 안정, 시간이 지남에 태그 정량화에 아무 변화를 보여주었다 (부 화 후 최대 50 분)와 아무 생물학 견본 크기 (3 또는 5 파리)에 따라.

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토론

생쥐에서 비만 유도 개월19,20걸릴 수 있습니다. 파리에서 프로토콜을 먹이이 HFD 과잉 지방 축적의 문제에 일의 또는 더 적은, 18 h ( 그림 2참조) 후 지방 축적 증가 일으키는 유도 수 있습니다. HFD 설명 프로토콜 먹이 포도 당 콘텐츠 12 증가 하 고 Bmm lipase와 PGC-1 식24감소. 이것은 지방 질 및 포도 당 내용25,26 모두 증가 Bmm24빠른 감소 되도록 성인 초파리 의 금식과 달리. 또한, Bmm 또는 PGC-1 레벨을 올.......

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공개 사항

저자는 공개 없다.

감사의 글

우리는 에리카 테일러가이 원고를 편집 하는 것을 감사 하 고 싶습니다. 이 작품은 부여는 건강의 국가 학회 (P01 HL098053, P01 AG033561 R01 HL054732) R.B., 박사 후 연구 보충 (R01 HL085481)와 친목 (AAUW)에서 S.B.D., 및 S.B.D.에는 미국 심장 협회에서 교부 금에 의해 투자 되었다 그리고 R.T.B.

....

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재료

이 논문에 사용된 재료 목록
이름회사카탈로그 번호댓글
Talboys Ball dropper/bead DispenserTalboys#: 930150
Talboys High Throughput HomogenizerTalboys#: 930145
그라인딩 볼, 스테인리스 스틸 OPS Diagnostics, LLC# GBSS156-5000-015000 볼
Masterblock 96 웰 딥 마이크로플레이트Greiner Bio-One# T-3058-1케이스 80 플레이트;
96 웰 마이크로플레이트 플랫 바텀Sigma Aldrich# M443640 플레이트
Greiner CapMat 멀티웰 플레이트 밀봉Sigma Aldrich# C360650 밀봉 플레이트
시약 저장고& 주의;Thomas Scientific# 1192T7112/PK
Thermo Scientific 핀피펫 4661040Thermo Scientific# 46610401-10 ul 멀티피펫
Thermo Scientific 핀피펫 4661070Thermo Scientific# 466107030-300ul 멀티피펫
Thermo Scientific 핀피펫 4661020Thermo Scientific#466102010-100ul 멀티피펫
멀티채널 팁Denville Scientific Inc# P3131-S10 uL 피펫
다채널 팁Denville Scientific Inc# P3133-S200 uL 피펫
다채널 팁Denville Scientific Inc#P1125100 uL 피펫
집게 Roboz Surgical# 5 Dumonts초미세 집게
Mettler Toledo Excellence XS 분석 저울 Mfr# XS64Cole-Parmer 과학 전문가# EW-11333-00
Metler Toledo Excellence XS 탑로딩 저울Cole-Parmer 과학 전문가# EW-11333-49
96-Well microplate 원심분리기Hettich Zentrifugen# Rotina 420R
Microplate 리더분자 장치# SpectraMax 190
Lab-Line Bench Top Orbit Environ Shaker IncubatorBiostad# 3527
Infinity Triglycerides 시약Thermo Scientific# TR22421
트리글리세리드 표준Stanbio#2103 - 030
Quick Start Bradford Protein AssayBio-RAD# 500-02051x 염료 시약
코코넛 오일Nutiva# 69275220001415 0z jar
PBS 10XThermo Scientific# AM9625500 ml
Triton X-100Sigma Aldrich# 9002-93-1
가스 투과성 호일Macherey-Nagel# 74067550개
필터 종이VWR# 28317-241100
초파리 바이알팩Genesee ScientificCat #: 32-116SB
퀵 스타트 소 혈청 알부민 표준Bio-Rad# 5000206
FlyNap 마취캐롤라이나# 173025100mL
Kimwipes Low-LintUline# S-81151-Ply, 4.4 x 8.4"
용 개의

참고문헌

  1. Ng, M., et al. Global, regional, and national prevalence of overweight and obesity in children and adults during 1980-2013: a systematic analysis for the Global Burden of Disease Study 2013. Lancet. 384, 766-781 (2014).
  2. Murphy, S. L., et al. Mortality in the United States, 2014. NCHS data brief, no 229. , Available from:

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재인쇄 및 허가

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