인간 지방 조직 Microvascular 함수 Videomicroscopy를 사용 하 여 평가

Summary

Videomicroscopy 시스템은 고립 된 지방 조직 arterioles 생리 및 약리 자극에 대 한 응답에서의 기능 속성을 검사 하는 데 사용 됩니다. 이 기술은 비만 인 간에 있는 다른 지방 조직 도메인에 microvascular 고기 검사를 사용할 수 있습니다.

Abstract

비만 대사 및 심혈 관 질환의 발전에 밀접 하 게 연결 된다, 그러나 약간이 프로세스를 제어 하는 메커니즘에 대 한 알려져 있다. 그것은 국부 적으로 그리고 체계적으로, 중앙/내장 adiposity와 협회에서 특히 지방 조직에서 발표 프로 atherogenic 중재자 병원 성 혈관 변화를 촉진 수 있습니다 그리고 개념 심혈 관 질병이 있을 수 있습니다 가상은 지방 조직 장애의 결과 진화 하 고 있습니다. 여기, 우리는 그대로 작은 인간의 arterioles 살아있는 인간을 대상의 지방 창 고에서 제거의 vasodilator 및 vasoconstrictor 응답의 분석을 포함 하는 videomicroscopy의 독특한 방법을 설명 합니다. Videomicroscopy는 응답을 vivo에서 조건 압력된 시스템을 사용 하 여 약리학 또는 생리 적 자극으로 격리 된 microvessels의 기능 속성을 검사 하는 데 사용 됩니다. 기술은 이상과 지방 조직 환경 내에서 로컬로 혈관 장애에 기여 하는 분자 메커니즘의 이해를 얻기 위해 유용한 방법입니다. 또한, 지방 조직 microvasculature에 이상 또한 조직의 질병으로 연결 되었습니다. 우리는 뚱뚱한 주제에 있는 창 고 전용 혈관 응답 검사에이 기술을 적용. 우리는 증가 흐름을 두 개의 서로 다른 많은 플랫폼에서 동일한 개인에서 bariatric 수술 동안 격리 지방 arterioles (50-350 µ m 내부 직경, 길이 2-3 m m)에서 아 세 틸 콜린 endothelium 종속 엷게 평가. 우리는 내장 지방에서 arterioles 피하 창 고에서 고립 된 선박에 비해 장애인된 endothelium 종속 엷게 전시 시연 했다. 연구 결과 내장 microenvironment는 조직의 질환 메커니즘을 증가 내장 adiposity를 연결 하는 임상 관측에 관련 될 수 있는 혈관 내 피 기능 장애와 관련 된 것이 좋습니다. Videomicroscopy 기술은 다른 지방 창 고에서 관 고기 검사 하 고 결과 비교 하 여 비만 대사 장애의 다른 정도 가진 개인에 걸쳐 사용할 수 있습니다. 메서드 또한 임상 내정간섭에 응답에 경도 혈관 반응 검사를 사용할 수 있습니다.

Introduction

Videomicroscopy 작은 arterioles 생활 인체 ex vivo에서제거의 조절과 기능 검사를 활용 하는 유용한 기술입니다. 우리 연구소는 microvasculature에 다양 한 많은 microenvironments의 효과 특성을 다른 지방 조직 구획에서 작은 microvessels에 밖으로 해 부에 집중 했다. 이 기술의 주요 장점은 인체에서 제거 하는 혈관 기능 유지와 생 시간을 몇 분 안에 쉽게 시험 될 수 있다. 생리 적인 조건 유사 하 고 과거 압력 마이크로 유리 뉼 많은 비보에 특성을 정리를 통해 intraluminal 공간에서 유지 관리를 꾸준히. ^{1 , 2} 또한, 자동된 가장자리 감지 소프트웨어와 신뢰할 수 있는 videomicroscopy 설정 endothelium 종속-독립적인 vasodilator 및 vasoconstrictor 용량 절연의 질적 및 양적 평가 대 한 허용 물리적 및 약리 자극에 대 한 응답에서 실시간, 허용 빠른 생리 적 평가에서 선박. ³ 다른 microvascular 기법 와이어 myography 적은 시간이 소요 되며 힘 변환기에 의해 다양 한 agonist....

Protocol

프로토콜 및 여기에 설명 된 예제에서 보스톤 대학 학교의 약 기관 검토 위원회 (IRB, 프로토콜 #H-25644)를 승인 했다 고 헬싱키 선언에 따라 실시 했다. 참여 하기 전에 서 면된 동의 제공 하는 모든 과목.

1. 솔루션의 준비 및 마이크로 유리 뉼

1. 준비 4-2-hydrosyethyl-1-piperazineethanesulfonic 산 성 염 (HEPES) 솔루션. 1 L에 대 한 8.059 g, NaCl 0.298 g, KCl 0.296 g MgSO ₄ 분해 • 7 H ₂ O, 0.235 g CaCl ₂ • 2 H ₂ O, 0.16 g KH ₂ 포 ₄, 950 mL에 0.01 g EDTA, 1.081 g D-포도 당, 및 2.383 g HEPES 산 이온 물입니다. 이온을 제거 된 물 1 L에 볼륨을 확인 합니다. PH를 7.4 NaOH를 사용 하 여 조정 합니다. HEPES 버퍼 7 일 4에서 저장 될 수 있다 ° c.
2. 소금 버퍼 재고 x 20을 준비합니다. 1 L에 대 한 추가 143.8 g NaCl, KCl 7.0 g, 5.9 g MgSO _4....

Results

우리 연구소는 endothelium 종속 검사를 videomicroscopy를 사용 하 고 있다 고-지방 조직 arterioles의 vasocontractile 기능 뿐만 아니라 독립적인 혈관, 피하와 내장 지방 비만 인간의에서 격리. 특성 실험 설정 그림 1A에 표시 됩니다. 지방 조직 arterioles 두 유리 모 세관 펫 사이 일시 중단 하 고 챔버 내에 장기 그림 1B와 같이 봉합과 장소에 고정 됩니다. Arteriolar 응답 다음 사전 수축 외 1 ~ 55%의 초기 직경 (그림 2B), 다음, 다음 주 작동 근 유도 기준선 (그림 2A)에서 선박을 검사 하 여 평가 될 수 있다 위에서 설명한 섹션 5.1, 혈관 고

Discussion

해 부 및 주위 조직에서 지방 arterioles의 절연 기술 프로토콜 세부 사항에 주의 함께 시간과 노동 집약적인 과정 수. 있습니다 서 절차 세심 한 기술과 부드러운 근육 또는 내 피 손상을 방지 하기 위해 특수 해 부 기구는 microvasculature의 레이어를 셀 필요 합니다. Arteriolar 벽에도 작은 실수로 구멍 intraluminal 가압 및 실패 한 실험에서 결과 방지할 수 있습니다. 또한, cannulation arterioles 봉합 활용의 그릇의 각 끝에 유리 모 세관 피펫은 끝 사이 arterioles 확보 중요 합니다.

인간의 고립 된 microvessels 60 mmHg에서 가압의 30-40 분 후 자발적인 조직적 톤을 개발할 수 있습니다. 그러나, 우리 인간의 많은 arterioles 일반적으로 50-350 µ m 내부 luminal 직경의 혈관 평활 근의 스파스 레이어와 상대적으로 작은 고 골격 근육 arterioles에 비해 중요 한 조직적.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
화학명
Acetylcholine	Sigma Aldrich	A6625
염화칼슘(CaCl2)	Sigma Aldrich	223506
D-(+)-Glucose	Sigma Aldrich	G5767
Endothelin-1	Sigma Aldrich	E7764
에틸렌 글리콜 -비스 (2- 아미노 에틸 에테르) -N, N, N', N'- 테트라 아세트산 (EGTA)	시그마 알드리치	E3889
에틸렌 디아민 테트라 아세트산 (EDTA)	시그마 알드리치	E9884
HEPES	시그마 알드리치	H3784
N w < / sub>-nito-L- 아르기닌 메틸 에스테르 염산염	시그마 알드리치	N5751
황산마그네슘(MgSO4)	Sigma Aldrich	M7506
염화칼륨(KCL)	Sigma Aldrich	P3911
인산칼륨(KH2PO4)	Sigma Aldrich	P5655
파파베린	Sigma Aldrich	P3510
중탄산나트륨(NaHCO 3 )Sigma	Aldrich	S6014
염화나트륨(NaCl)	Sigma Aldrich	S7653
인산나트륨 일염기성 일수화물(NaH2Po4)	Sigma Aldrich	S9638
Name	Company	카탈로그 번호	Comments
Equipment
Forceps	Finescience tools	15000-08
Inverted microscope	Zeiss Achromat
Laboratory tubing	Euro-Pharm	250100306F999
Needle/pippette puller	David kopf instruments	720
Ophthalmic monofilament nylon suture	외과 전문	A7756N
가위	Finescience 도구	150000-08
용기 챔버	DMT	VAS v.2.1