교차 reactivity 무료 및 정찰 병 무료 스냅 칩 샌드위치 Immunoassays 다중화

요약

두 슬라이드를 간단 하 게 스냅 하 여 교차 reactivity 무료 다중화 샌드위치 immunoassays를 수행 하기 위한 스냅 칩 기술을 설명 합니다. 스냅 기구 시 약 microarray microarray에서 안정적으로 전송 하는 데 사용 됩니다. 어떤 생 화 확 적인 반응을 교차 오염 없이 다른 시 약의 colocalization를 요구에 대 한 스냅 칩을 사용할 수 있습니다.

초록

멀티플렉스 단백질 분석 우수한 진단 민감도 단일 단백질에 비해 정확도 보이고 있다. 항 체 microarrays는 단일 칩에 동시에 수행 하는 마이크로 스케일 immunoassays의 수천 수 있습니다. 샌드위치 분석 결과 형식 두 항 체, 각 목표를 감지 하 여 분석 결과 특이성을 향상 하지만 분 따라서 그들의 멀티플렉싱 기능을 제한 하는 시 약 사이에서 겪고 있다. 항 체 colocalization microarray (ACM) 교차 reactivity 무료 다중화 단백질 검출에 대 한 개발 되었습니다 하지만 microarray 제조 분석 실험 중에 비싼 반점을 찍는 현장. 이 작품에서는 단순히 맞춤 2 칩 함께, 따라서 아무 정찰 병 샘플 인큐베이션 및 탐지 항 체 (dAbs) 시의 후속 응용 프로그램 필요에 의해 microarray microarray에서 시 약을 전송 하는 스냅 칩 기술 시연 미리 발견된 슬라이드, 슬라이드 준비 분석 결과 실행에서 해리의 스토리지. 두 메서드 모두 단일 및 이중 전송 두 microarrays 사이 정확한 줄 맞춤을 달성 하기 위해 제공 됩니다 그리고 두 방법에 대 한 슬라이드 제작 설명. 결과 < 40 μ m 맞춤 이중 전송, 625 명소/c m²의 배열 밀도 도달 달성 되었습니다. 50 plexed immunoassay 다중화 단백질 분석에 스냅 칩의 유용성을 설명 하기 위해 실시 되었습니다. 35 단백질의 검출 한계 범위의 pg/ml에서는 이다입니다.

서론

높은 감도 특이성 암^1,2등 복잡 한 질병의 진단에 단일 바이오 마커 보다 여러 단백질을 구성 하는 바이오 마커의 패널 제공할 수 있습니다. 효소 연결 된 immunosorbent 분석 결과 (ELISA) 골드 표준 기술 플라즈마, 낮은 pg/mL에 탐지의 제한 하지만 분석 결과^3,,45당 하나의 대상에 한계를 달성 하는 임상 실험실에서 사용 되었습니다. 항 체 microarrays는 단일 현미경 슬라이드^6,,78에 병렬로 실시 소형된 분석 실험의 수천을 수용에 대 한 개발 되었습니다. 그러나,이 방법의 멀티플렉싱 기능 dAbs, 혼합물의 응용 프로그램에서 발생 하는 시 약 기반 분으로 제한 하 고 대상^9,10 의 증가 함께 더 많은 문제가 된다

프로토콜

1. 스냅 칩 제조 및 저장

1. 이전 방법 ( 그림 1a)
   1. 자리 cAb 솔루션 400 µ g/mL 항 체를 포함 하 고 20% 글리세롤 인산 염 버퍼 염 분에 (PBS)을 nitrocellulose (또는 기능성된 유리)에는 잉크젯 microarray 정찰 병 ¹³ 60%의 상대 습도에서 분석 결과 슬라이드 (1.2 각 명소에 대 한 nL) 800 µ m 센터-센터 간격. 슬라이드 한 구석에 따르면 정찰 병 갑판에 고정 되어 있는지 확인 (여기, 왼쪽 아래 사용 되었다).
   2. 60%의 상대 습도와 1 시간 실 온에서 발견된 분석 결과 슬라이드를 품 어.
   3. 클램프 16 구획 16 우물으로 그것을 분할 하는 분석 결과 슬라이드에 슬라이드 모듈 가스 켓. 0.1%를 포함 하는 PBS의 80 µ L을 추가 하 여 슬라이드 세 번 씻어 트윈-20 (PBST) 각 잘 떨고 통, 5 분 각 시간에 450 rpm으로.
   4. 차단 솔루션을 각각 잘 고 450 rpm에서 1 h에 대 한 동요의 추가 80 µ L.
   5. 개 스를 제거 하 고 건조 한 질소의 스트림 분석 결과 슬라이드.
   6. 정찰 병 갑판에 전....

결과

단일 및 이중 전송 방법에 대 한 분석 결과 절차는 그림 1에 표시 됩니다. 단일 전송, 분석 결과 슬라이드에 직접 택시를 발견 하 고는 dAbs 분석 결과 슬라이드 거울 패턴의 택시 (그림 1a)에서 사용 시에 전송 됩니다. 하나의 전송 절차는 필요, 하지만이 방법은 주로 슬라이드와 잉크젯 갠트리 (그림 2) 사이 모 난 부정합으로 인 한 두 microarrays 사이의 부정합에서 겪고 있다. 이 문제를 해결 하기 위해 한 가지 방법은 택시와 분석 결과 슬라이드에 순차적으로 dAbs 구경, 그리고 스냅 장치에 슬라이드를 제대로 수정 후 전송 하는 것입니다 (그림 1b). 이 메서드를 사용 하 여 두 microarrays는 정확한 동일한 위치로 전송 됩니다. .......

토론

이 작품에서는, 우리는 기본적인 실험 설치 연구자 멀티플렉스 교차 reactivity 무료 immunoassays 널리 이용할 수 있게 하는 스냅 칩 기술을 제시 했습니다. 다른 기존 항 체 microarrays, 아니 microarray 정찰 병은 최종 사용자를 위해 필요 합니다. 단일 및 이중 전송 방법을 시연 하 고 이중 전송 월급 우수한 정렬 정확도 ~ 40 μ m 63 µ m¹⁴의 가장 큰 오차와 98%의 관광 명소에 대 한. 새로운 스냅 기구가이 기술 연구에 액세스할 수 만들기, 일관 된 압력으로 두 개의 슬라이드를 편리 하 게 개발 되었다. 신뢰할 수 있는 시 약 전송 nitrocellulose-코팅 슬라이드에 뿐만 아니라 일반 유리 슬라이드에이 기술의 광범위 한 훈련의 필요 없이 응용 프로그램을 크게 확대 실현 된다. 단백질의 70% 범위의 pg/mL¹⁴에서 Lod를 달성 및 스냅 칩의 유용성을 보여 50-플렉스 immunoass.......

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
인산염 완충 식염수 정제	Fisher Scientific	5246501EA
Streptavidin-conjugated Cy5	Rockland	s000-06
Tween-20	Sigma-Aldrich	p1379
소 혈청 알부민	Jackson ImmunoResearch Laboratories, Inc	001-000-162
글리세롤	Sigma-Aldrich	G5516
차단 솔루션: BSA가 없는 StabilGuard Choice 마이크로어레이 안정제	SurModics, Inc	SG02
니트로셀룰로오스 코팅 슬라이드	Grace Bio-Laboratories, Inc	305116
아미노실란 코팅 슬라이드	Schott North America	1064875
Snap Device	Parallex BioAssays Inc.	PBA-SD01
잉크젯 마이크로어레이 스포터	GeSiM	Nanoplotter 2.0
슬라이드 모듈 개스킷	Grace Bio-Laboratories, Inc	204862
습도 안정화 비드	Parallex BioAssays Inc.	PBA-HU60
어레이 프로 분석기 소프트웨어	미디어 사이버네틱스	버전 4.5
형광 마이크로 어레이 스캐너	애질런트	SureScan 마이크로 어레이 스캐너
생물 통계 소프트웨어	GraphPad 소프트웨어 GraphPad 프리	즘 6
엔도 글린 캡처 항체	R & D 시스템	MAB10972
엔도글린 단백질	R& D Systems	1097-EN
엔도글린 검출 항체	R& D 시스템	BAF1097
IL-6a(표 1 참조)	R& D Systems
IL-6b(표 1 참조)	Invitrogen