레이저 도플러 이미징 및 모니터링을 사용 하 여 쥐에서 척수 미세 분석 하

요약

여기 우리 레이저 도플러 관류 (LDPI) 이미징의 조합을 제시 하 고 소개 하는 척수에 대 한 표준화 된 절차 뿐만 아니라 국부 적으로 혈액 흐름과 산소 포화 (₂등), 코드 레이저 도플러 관류 모니터링 (LDPM) 척추를 측정 하 쥐에 외상입니다.

초록

레이저 도플러 flowmetry (LDF)를 측정 하는 척수의 microcirculatory 변경 시키는 혈액 흐름 (BF) 측정에 대 한 비 침 투 적인 방법입니다. 이 문서에서는, 우리의 목표 척수 부상 후 BF의 변화를 분석 하 레이저 도플러 영상 및 모니터링을 사용 했다. 레이저 도플러 이미지 스캐너와 프로브/모니터 각 판독을 고용 되 고. LDPI 데이터 부상 사이트 관류에 대 한 개요를 준 하 고 다른 위치 사이에서 BF의 비교 분석에 대 한 접근 했다 BF의 로컬 배포를 제공 합니다. 강렬 하지 시간 동안 검색 영역 측정, 결합 된 프로브 전체 척수 관류와 산소 공급을 보여주는 척수의 BF 및 산소 포화를 동시에 측정 하 사용 되었다. 자체 LDF 신호 감도 운동, 및 생물 학적 0 상대 플럭스, 같은 몇 가지 제한이 있다. 그러나, 기술은 그것의 간단한 설치와 BF의 빠른 측정 실험과 임상 연구에 적용 되었습니다.

서론

척수의 조직 매우 vascularized 이며 매우 민감한 척수 상해 (SCI)에 의해 유도 된 저 산소 증. 우리의 이전 연구 보여주었다 척수의 혈 뇌 진 탕 부상^1,2모터 기능의 적자에 관련이 있을 수 있습니다 후 크게 감소 했다. 최근 연구 결과 SCI에 따라 혈관의 무결성은 잘 상관 감각 모터 기능³의 개선 나타났습니다. 그것은 향상 된 vascularity 백색 질, 향상 된 기능⁴직접 이끌어 구출 수 있습니다 보고 되었습니다. 따라서, 포스트 상해 척수 관류의 유지 보수는 생존 능력 및 기능 유지에 대 한 기본 중요성의 것 처럼 보였다.

SCI 후 관류에 다양 한 치료의 효과 과학^5,,67의 실험 모델에서 다양 한 기법을 사용 하 여 수많은 수사에 의해 검사 되어 있다. 레이저 도플러, 잘 설립 된 기술로, 의심할 여 지 없이 여러 인간과 동물 연구

프로토콜

실험 동물 관련 된 동물 프로토콜 여는 국립 보건원 (NIH)을 설립 하는 지침을 따 랐 고 동물 관리 및 사용 위원회의 주요한 의학 대학에 의해 승인 했다.

문화를 도입 하 고 측정 하는 레이저 도플러 장비 아래에 설명 된 사용 하 여 척수의 BF의 절차는 게시 된 연구¹에서 사용 되었다.

1입니다. 수술을 위한 준비

1. 염 분에 pentobarbital 나트륨 솔루션 3% (w/v)을 준비 하 고 35 mg/kg의 복용량에서 관리.
   주의: pentobarbital 나트륨은 제어 물질 이다. 자세한 레코드를 보관 해야 하 고 안전 하 고 잠긴 위치에 저장 된 솔루션.
2. 장비를 소독 하 고 수술 영역을 준비 합니다.
   1. 다음 단계와 수술 장비를 청소: 75% 에탄올 청소, 다음 30 분 동안 121 ° C에 고압 다음 건조는 60 ° C 오븐에 하룻밤. 수술 지역 75% 알코올로 소독.

2입니다. 수술에 대 한 쥐의 준비

1. Pentobarbital 나트륨 (35 mg/kg)의 복 주사와 쥐 anestheti....

결과

LDPI 척수, 척수의 rostral 꼬리 축 선형 프로필 (그림 4)를 추출 하 여 계량 했다 BF 측정 하 사용 되었다. 그림 5A 와 그림 5B 가짜 그룹 문화 그룹의 척수의 유출 이미지를 각각 나타냅니다. 그림 5C 및 그림 5D 가짜 그룹 문화 그룹의 척수의 rostral 꼬리 축 변경 BF를 각각 나타냅니다. 그림 5A 와 그림 5B 의 비교 시연 SCI BF의 감소를 유발 진원지의 BF rostral 코드와 꼬리 코드 보다 낮은 했다.

토론

이 프로토콜을 수행할 때 몇 가지 세부 정보를 발견 한다. 첫째, 신속 하 고 우아하게 동물 소개 스트레스를 최소화 하기 위해 가능한 마 취와 수술의 과정 수행 되어야 합니다. 결과에 방해를 줄이기 위해, 동물 상대적으로 평화적이 고 안정적인 상태로 유지. 둘째, 혈액 잠재적으로 읽기를 방해할 수 있기 때문에, 레이저 도플러 장비를 사용 하 여 측정 하는 동안 출혈을 더 많은 주의 지불 합니다. 마지막으로, 데이터 기록 하는 동안 동물 온도 차이 의해 발생 하는 일관 되지 않은 결과 방지 하는 온도 제어 환경에서 유지 되어야 한다.

연구자는 레이저 도플러 검사를 사용할 때 고려해 야 하는 몇 가지 중요 한 요인이 있다. 프로토콜에서 설명 했 듯이, 스캔 거리 비교 결과 대 한 실험에 걸쳐 일관성이 유지 되어야 한다. 작은 영역에 대 한 고해상도를 여러 검사와 BF의 신뢰할 수 있는 데이터를 생성 하는 것이 좋습니다. 또한, 멸 균 거 즈만 추가 배경 최소화를 노출 하는 작은 창으.......

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
레이저 도플러 라인 스캐너	무어 인스트루먼트	moorLDLS2
레이저 도플러 모니터	무어 인스트루먼트	moorVMS-LDF
프로브	무어 인스트루먼트	VP3	무딘 바늘 끝 전달 프로브
임팩터	정밀 시스템 및 계측	IH-0400
페노 바르비탈 나트륨	시그마 - 알드리치	P3761
부프레노르핀	시그마-알드리치	B-908
주사기	Becton Dickinson Medica (s)	Pte.Ltd 300841
실이 있는 외과용 봉합사 바늘	Shanghai Pudong Jinhuan Medical Products Co., Ltd		18T0329 (배치 번호) /4-0
Shanghai Medical Instrument Co., Ltd.의	메스	J11030 4#
메스 블레이드	작동 기기 공장 Shanghai Medical Instrument Co., Ltd.	J12130 20#
안과 겸자	Shanghai Medical Instrument Co., Ltd.의 수술 기구 공장	JD1040
지혈 겸자	작동 기구 공장 Shanghai Medical Instrument Co., Ltd.	J31050
벤질 페니실린 나트륨	North China Pharmaceutical Co., Ltd		F6072116(배치 번호)
75% 알코올	Dezhou Anjie Gaoke 소독 제품 Co., Ltd		150421R(배치 번호)
요오드	Shandong Lierkang Medical Technology Co., Ltd		20170102(배치 번호)
Rat	Laboratory Animal Center, The Academy of Millitery Medical Sciences		Sprague-Dawly (쥐 균주)

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