미세 회전 및 재생성된 실크 fibroin monofilament의 미세 특성화에 대 한 프로토콜 제공 됩니다.
미세 회전 및 재생성된 실크 fibroin monofilament의 미세 특성화에 대 한 프로토콜 제공 됩니다.
프로토콜 누의 회전 과정을 흉내 낸에 대 한 메서드를 보여 줍니다. 기본 회전 과정에서 계약 회전 덕트 실크 단백질을 콤팩트 하 고 전단 및 신장 힘에 의해 정렬 될 수 있습니다. 여기, biomimetic 미세 채널 누의 회전 덕트의 특정 기하학을 모방 하도록 설계 되었습니다. 재생성 된 실크 fibroin (RSF) 회전 높은 농도, 첨가 온도 압력에서 드라이 스핀 섬유 아닌 통해 돌출 했다. 사후 처리 과정에서로 냈 지 섬유 했다 그려지고 에탄올 용액에 저장 됩니다. 싱크 로트 론 방사선 광각 x 선 회절 (SR-WAXD) 기술은 RSF 섬유 축 x-레이의 microbeam에 샘플 홀더를 고정 하는 단일 RSF 섬유의 미세를 조사 하기 위해 사용 되었다. 화도, crystallite 크기 및 결정 방향 섬유의 WAXD 데이터에서 계산 했다. 2 차원 WAXD 패턴의 적도 근처 회절 호 사후 처리 RSF 섬유 높은 방향 정도 나타냅니다.
거미 및 누 주위 온도 압력에서 수성 단백질 해결책에서 뛰어난 실크 섬유를 생산할 수 있다. 전단 및 extensional 흐름 실크 동맥1액정 텍스처의 형성을 유도할 수 있다. 최근 몇 년 동안, 고 강도 인공 섬유를 생산 하기 위해서는 거미의 회전 과정을 흉내 낸에 큰 관심이 되었습니다. 그러나, 거미 실크 단백질의 대량 수 없습니다 효율적이 고 경제적으로 의해 생산 농업 식인 풍습으로 인해 거미. 상당한 양의 누 실크는 농업에 의해 쉽게 얻어질 수 있다. 그렇지 않으면, 누와 거미 유사한 회전 과정과 아미노산 성분이 있다. 따라서 누 실크 fibroin 선택 대신 인공 동물 실크 스핀 많은 연구자에 의해.
거미 및 누에에서 섬유에 그들의 회전 덕트를 통해 단백질 해결책을 압출 성형. 가장 가능성이 회전 덕트를 따라 생성 높은 스트레스 힘 더 확장 구조2실크 fibroin 분자 스트레칭. 인공 실크 섬유 기존의 젖은 회전 및 회전 건조 프로세스3,4, 고려 하지 않는 사용 하 여 회전 된 유체 힘 회전 덕트에서 생성 된 계정.
첫째, 미세 접근 실크 단백질5,6의 어셈블리를 조사 하기 위해 사용 되었다. 다음, RSF의 미세 제조 전단 및 extensional 세력7,8모델링을 통해 연구 했다. 영의 계수 및 RSF 섬유의 직경이 미세 젖은 회전에 의해 조정 될 수 있다 하지만 그려진된 섬유의 인장 강도 100 MPa7. 마지막으로, 고 강도 RSF 섬유 미세 드라이 회전 메서드를 사용 하 여 성공적으로 준비 하지만 섬유의 직경은 2 µ m8만. 최근, 미세 젖은 회전 강도 재조합 거미 실크 섬유의 생산에서 성공적으로 사용 되었다. 공기에서 후 회전 그리기9인공 섬유 표면 및 내부 결함 개선.
이 연구에서는 향상 된 미세 회전 RSF 섬유에 대 한 과정 소개 된다. 그것은 회전 마약, 전단 세력, 그리고 드라이 회전 과정을 포함 하 여 누 실크 회전 과정을 모방 하는 것을 목표로. 이 회전 방법은 고 강도 인공 실크 섬유를 생산할 수 있다 뿐만 아니라 또한 섬유의 직경을 조정할 수 있습니다. 첫째, RSF 마약 회전 전단 이었고 두 번째 순서 지 수 감퇴와 biomimic 채널에 길쭉한. 둘째, 섬유 형태와 속성에 상대 습도 (RH)의 영향 미세 드라이 회전 과정10에서 공부 했다. 기존의 회전 spinneret에 비해, 우리의 미세 시스템 높은 생체 모방 이며 건조 하 여 주위 온도에 솔루션에서 고 강도 섬유를 생산 또는 회전 방법 젖은 사용할 수 있습니다.
때문에 고해상도, 고휘도, 고 에너지 싱크 로트 론 방사선 미소 초점 x 선의를 사용할 수 있습니다 몇 마이크로미터4,11 의 직경을 가진 단 하나 섬유의 미세 하 , 12 , 13 , 14. 여기, SR WAXD 기술은 화도, crystallite 크기 및 RSF 섬유의 결정 방향 계산에 사용 되었다.
주의: 사용 하기 전에 모든 관련 물질 안전 데이터 시트를 참조 하십시오. 성형을 준비에 사용 되는 화학 물질의 일부는 심하게 독성이 있습니다. 개인 보호 장비 (안전 안경, 장갑, 실험실 코트, 전장 바지 및 폐쇄 발가락 신발)를 사용 하십시오.
1. 미세 회전의 RSF 용액
2. 싱크 로트 론 방사선 특성의 결정 구조의 RSF 섬유
고 강도 RSF 섬유 미세 회전 메서드를 사용 하 여 성공적으로 생산 되었다. 응력-변형 곡선 및 뻗어 RSF 섬유 C44R40의 SEM 이미지는 그림 2에 표시 됩니다. 적어도 10 섬유는 인장 시험에서 측정 되었다. 응력-변형 곡선 섬유의 주요 스트레스와 긴장의 평균 값에 따라 선택 되었다. 섬유의 WAXD 데이터는 그림 3에 나와 있습니다. 화도 및 결정 방향 WAXD 데이터에 따라 계산 했다. 샘플 지정 사용 하 여 C와 R 회전 마약 및 상대 습도에 RSF의 농도 각각 제시. 예를 들어 섬유 40 ± 5% RH 4의 무승부로 비에 그린 후 C44R40으로 지정 되었다 44 wt %RSF 회전 마약에서 냈 지. 다른 섬유는 같은 설명에 따라 C44R50, C47R40, 및 C47R50로 변경 했다.

그림 1: 섬유 생산 및 구조 특성화의 도식. (한) 준비의 RSF 솔루션, (b) 미세 회전 RSF 단일 섬유의 (c) 싱크 로트 론 방사선 실험 설치 RSF 섬유의 과정. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.

그림 2: 후 처리 RSF 섬유의 응력-변형 곡선. C44R40의 쇼 SEM 이미지를 삽입 합니다. 눈금 막대 = 10 µ m. 이 그림10에서 수정 되었습니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.

그림 3: 사후 처리 RSF 섬유의 WAXD SR 데이터. (A) 2 차원 WAXD 패턴 후 치료 RSF의 단일 섬유: (한) C44R40, (b) C44R50, (c) (d) C47R50, C47R40 및 (B) 반죽 B. 모리 실크; (C) 1 차원 WAXD 데이터의 사후 RSF 섬유를 취급 하 고 (D) 피크 deconvolution에서 수행한 B. 모리 실크 반죽. 이 그림은 참조10에서 수정 되었습니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.
RSF 솔루션의 투 석 동안 pH 값이 다음 농도 과정에 대 한 중요 합니다. 이온된 수의 pH 값이 6 보다 작은, RSF 솔루션 집중 과정에서 젤 쉬울 것 이다. 겔 화를 피하기 위해, CaCl2 RSF 솔루션에 추가 됩니다. CaCl2 의 농도 1 mmol RSF의 무게 당.
우리의 이전 작품의 미세 드라이-8RSF 수성 해결책 가능성을 보여주었다. 미세 채널의 형상을 단순화 된 단일 단계 지 수 함수를 했다. 거미 및 누, 회전 진한 액체 섬유 형성1,20전에 2 단계 지 수 회귀 회전 덕트를 통해 아래로 추첨을 했다. 여기, 미세 채널 형상 누 회전 덕트1의 두 번째 순서 지 수 감퇴 기능을 흉내 낸에 의해 설계 되었습니다. Microfluidic 채널의 폭 265 µ m의 터미널 폭 2,065 µ m의 초기 폭에서 감소와 신장 채널의 길이 21.5 m m. 이전 기사에서 그려진된 RSF 섬유의 직경 2 µ m 이었다. 따라서, RSF 스레드 번들 기계 테스트 및 구조 특성화8사용 했다.
실험은 RSF 집중력과 상대 습도 영향을 지름 및 회전 건조 과정에서 RSF 섬유의 미세 보여줍니다. RSF 섬유 40 %RH 늘인 큰 직경 50 %RH 회전 하는 섬유 보다 더 많은 결정 구조를 보여 줍니다. 그러나, 50 %RH 냈 지 섬유 40 %RH 냈 지 보다 더 높은 결정 방향이 있다. 결과 다른 humidities에서 물의 증발 속도 관련이 있을 수 있습니다. 40 %RH 물의 높은 증발 속도 intramolecular 상호 작용을 향상 하 고 단단한 실크 섬유를 졸-겔에서 실크 fibroin의 빠른 상전이 용이 하 게. 더 낮은 증발 비율 50 %RH 물 잔류물 물 응고 섬유의 높은 콘텐츠를 이끌어 낸다. 작은 분자 윤활제로 물 실크 fibroin 방향을 용이 하 게 하 고 미세한 섬유를 늘여를 부분적으로 응고 섬유를 만드는. 이 과정은 물 기본 회전 과정 실크 섬유의 형성에 영향을 어떻게 이해 하는 데 도움이 됩니다.
사후 처리 RSF 섬유의 기계적 성질 반죽 실크4보다 더 있습니다. 후 처리, 후 섬유의 crystallinities 대폭 증가 했다. 사후 처리 RSF 섬유의 FWHM로 냈 지 섬유 보다 작습니다. 그것은 그 후 처리 향상 정자 섬유 축 방향을 나타냅니다. 그러나, 후 처리 과정의 복잡성 RSF 고 강도 섬유의 대량 생산을 제한합니다.
기존의 spinneret에 비해, 미세 채널은 천연 실크 동맥의 형상을 모방 하는 데 적합 합니다. 한편, 미세 회전 뛰어난 기계적 특성9재조합 거미 실크를 생산 하기 위해 사용 되었다. 전단 및 elongational 섹션은 어셈블리와 단백질 분자와 소의 방향을 유도 하 미세 회전 칩에 통합 했다. 따라서, 미세 회전 높은-성능 동물 실크의 생산 뿐만 아니라 솔루션에서 다른 합성 섬유에 유망 하다. 그러나, 미세 회전 방법만 단일 필 라 멘 트를 생산할 수 있는 그리고 그것은 인공 섬유의 높은 생산을 감당할 수 없습니다.
저자는 공개 없다.
이 작품은 주최 국립 자연 과학 재단의 중국 (21674018), 국가 핵심 연구 및 중국의 개발 프로그램 (2016YFA0201702 /2016YFA0201700), 그리고 "Shuguang 프로그램" 상하이 교육 개발 지원 재단과 상하이 시 교육 위원회 (15SG30), 상해시 영 교수 프로그램 (A201302), 중앙 대학 및 111 프로젝트 (No.111-2-04)에 대 한 근본적인 연구 자금을 구별.
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| B. mori | 저장성 퉁샹의 고치 농부 | ||
| 탄산나트륨, 무수, 99.8% | Shanghai Lingfeng Chemical Reagent Co., Ltd., 중국 | 분석적으로 순수한 | |
| 리튬 브로마이드, 99.1% | Shanghai China Lithium Industrial Co., Ltd., 중국 | 분석적으로 순수한 | |
| 염화칼슘, 무수, 96.0% | Shanghai Lingfeng Chemical Reagent Co., Ltd., 중국 | 분석적으로 순수한 | |
| 에탄올, 무수, 99.7% | Sinopharm Group Chemical Reagent Co., Ltd., 중국 | 10009218 | 분석적으로 순수한 |
| SU-8 감광액 | MicroChem Corp., 미국 | ||
| 개발 용액 | MicroChem Corp., 미국 | ||
| Sylgard 184 | Dow Corning, 미국 | ||
| 이소프로판올 | Shanghai Lingfeng 화학 시약 Co., Ltd., 중국 | 분석적으로 순수한 | |
| 농축 황산 | Pinghu 화학 시약 공장, 중국 | 분석적으로 순수한 | |
| 30 vol% 과산화수소 | Shanghai Jinlu 화학 시약 Co., Ltd., 중국 | 분석적으로 순수한 | |
| 아세톤 | Shanghai Zhengxing 화학 시약 공장, 중국 | 분석적으로 순수함 | |
| 산소 플라즈마 처리 | DT-01, Suzhou Omega Machinery Electronic Technology Co., Ltd., 중국 | ||
| 주사기 펌프 | KD Scientific, 미국 | KDS 200P | |
| 가습기 | SEN 전기 | ||
| 드릴러 | Hangzhou Bo Yang Machinery Co., Ltd., 중국 | 벤치 드릴링 머신 Z406c | |
| 재료 테스트 시스템 | Instron, 미국 | 모델: 5565 | |
| PeakFit | Systat Software, Inc., 미국 | 버전 4.12 |