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방법 논문

Intravital 현미경 Monocyte 유도 및 주변 동맥 질병의 Murine 모델에서 종양 관련 신생의

6.7K 조회수

⸱

DOI:

10.3791/56290

⸱

2017년 8월 26일

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Cardiology and Angiology, University of Magdeburg, 2Leibniz Institute for Neurobiology, 3Institute of Molecular and Clinical Immunology, University of Magdeburg, 4Division of Hematology/Oncology, Boston Children's Hospital, Harvard Medical School

이 논문에서

요약

Monocytes는 주변 동맥 질병의 맥락에서 arteriogenesis의 중요 한 중개자. 지하실 막 같은 매트릭스 및 intravital 현미경 검사 법을 사용 하 여,이 프로토콜 대 퇴 동맥 결 찰 murine 모델에 monocyte 주입 후 monocyte 유도 및 종양 관련 신생을 조사 합니다.

초록

주변 동맥 질환과 허 혈 성 심장 질환에 대 한 치료 목표 hemodynamic 협 착 증으로 인 한 허 혈 성 영역에 혈액 흐름을 증가 하는. 혈관 수술은 가능한 옵션을 선택한 경우에만 통증, 중요 한 사지 허 혈, 또는 생활에 주요 중단 휴식 또는 작업 진행 등 수술을 위한 표시 없이 환자에 대 한, 그들의 질병을 완화 하기 위해 몇 가지 가능성이 있다. 부수적인 형성의 자극을 통해 관류 monocyte 강화 통해 세포 치료 비-침략 적 몇 가지 옵션 중 하나입니다.

우리의 그룹 hindlimb 허 혈 모델을 사용 하 여 마우스에 monocyte 이식 후 arteriogenesis을 검사 합니다. 이전에 우리 hindlimb 관류 syngeneic monocyte 파상풍 자극이 식을 사용 하 여 향상을 증명 하고있다. 부수적인 형성에 효과 뿐만 아니라 종양의 성장 뿐만 아니라이 치료에 의해 영향을 받을 수 있습니다. 이러한 효과 조사, 우리 후 대 퇴 동맥의 폐색, 마우스의 측면에 Engelbreth-Holm-떼 육의 기질을 주입 하 여 지하실 막 같은 매트릭스 마우스 모델을 사용 합니다.

인공 종양 연구 후 우리를 vivo에서 종양-신생 및 부수적인 동맥 내에서 귀환 하는 monocyte intravital 현미경 검사 법을 사용. 이전 연구는 사후 아티팩트에 후속 분석을 전제로 동물 모델의 조직학 검사를 설명 했습니다. 우리의 접근 지역 실시간으로 시퀀스에서 담보의 monocyte 유도 시각화, 수행, 쉽게 arteriogenesis 및 종양 혈관 신생 비보의 과정을 조사 하 고.

서론

심혈 관 질환, 관상 동맥 심장 질환 또는 말 초 동맥 질환을 포함 하 여 죽음의 가장 일반적인 원인은 세계적으로1. 세포 치료 외과 중재를 받을 수 없는 사람들을 위해 특히 심혈 관 질환을 치료 하는 유망한 접근 이다. 치료 도구2,3는 관류를 개선 하 고 허 혈 성 및 underperfused 조직의 기능을 유지 하는 전반적인 목표와 셀 또는 그들의 secreted를 사용 하 여 여러 접근이 있다. 이 목표를 달성 하기 위해 한 시도 arteriogenesis, 부수적인 동맥의 개발을 향상을 향상 시킬 것입니다. Monocytes는 담보와 관련 한 중요 한 세포 유형입니다. 우리의 그룹 허 혈 및 후속 염증6유도 hindlimb 허 혈 모델을 사용 하 여 특히 염증4,5의 분야에서 monocytes의 효과 연구에 집중 했다. Monocytes 염증의 지역를 담보7의 개발을 이끌어 내는 복잡 한 조직 반응 일으킬 합니다.

Intravital 현미경 검사 법의 사용, 우리는 이러한 세포에 vivo에서 의 동작을 연구 하 고 염증의 지역에 주입된 monocytes의 추적 관찰 수 있습니다. 대부분의 이전 연구는만 사후 분석, 조직학 아티팩트 및 준비에 필요한 동물의 많은 수의 소개를 포함 하 여 단점을 보유 하 고 있는 설명 합니다. 우리의 접근, 우리 면역 프로세스를 조사할 수와 여러 시간 점에서 통해 부수적인 형성 라이브 이미징.

부수적인 동맥 허 혈 성 지역에서의 개발 이외 monocytes는 또한 종양의 성장 영향. 이러한 프로세스를 조사, 우리 Engelbreth-Holm-떼 마우스 육 종, 종양 세포 외 기질 단백질8, 풍부한에서 추출한 지하실 막 같은 매트릭스를 주사 하 고 intravital 현미경 검사 법을 사용 하 여 분석. 이 행렬은 내 피 세포 네트워크 형성 또는 신생 억제;을 통해 항 암 치료에 대 한 스크린 테스트 분자에 사용 이 경우에, 우리는 세포 치료9,,1011monocytes의 종양 신생 잠재력을 평가할 것입니다.

이 프로토콜의 목표는 vivo에서 모델에서 허 혈에 의해 발생 하는 면역 과정을 공부 하는 간단 하 고 효율적인 방법을 보여 줍니다. 우리는 사후 근육 조직의 조직학 검사 결과에 비해 더 현실적인 테스트 환경을 생성할 수 있습니다.

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프로토콜

우리의 연구 동물 보호에 대 한 독일 법의 섹션 8에 따라 작센-안할트, Landesverwaltungsamt 할리 상태의 권한으로 수행 되었다. (§ 8, 18.05.2016-BGBI에서에서 동물 보호에 대 한 독일 법의 단락 1. 나 S. 1206, 1313, 13.08.2013에서 § 31 TierSchVersV).

참고: 여기 실험에 대 한 8 12 주 오래 된 남성 BALB/c 마우스 사용 되었다, 및 혈액 기증자 로부터 인간 monocytes intravital 현미경 검사 법을 통해 monocytes의 시각화를 위해 사용 되었다.

1. 셀 준비

참고: monocytes의 격리를 참조 하십시오 우리의 이전 게시 된 비디오 정돈에 지침에 대 한: " 절연 및 정 맥 주입의 Murine 골 파생 Monocytes " 바그너 외. 여 4

참고: 때 셀 모든 단계 작업 것이 오염을 피하기 위하여 살 균 되어야 합니다.

  1. 셀 3, 3으로 얼룩 '-Dioctadecyloxacarbocyanine 과염소산염
    1. Resuspend 1 x 10 6 셀/mL의 농도와 혈 청 무료 문화 매체에 셀.
      참고:만 혈 청 자유로운 매체 수는 효율적인 얼룩, 닥터지 염료 이미 혈 청의 질 성 구성 요소에 의해 캡처 그렇지 않으면 것 때문.
    2. 1 m m 3, 3의 추가 5 µ L '-Dioctadecyloxacarbocyanine 과염소산염 dimethylformamide 셀 서 스 펜 션의 1 ml에 신중 하 게 resuspend와.
    3. 품 20 분 동안 37 ° C에서 셀 솔루션
    4. 37 ° C에서 5 분에 대 한 500 x g 세포를 원심
    5. 는 상쾌한을 꺼내 려 하 고 37 ° C 따뜻한 태아 종 아리 보충 하는 혈 청 매체와 셀 resuspend.
    6. 1.1.4와 1.1.5 단계를 반복 하 여 두 번.
    7. 수식 가진 셀의 개수:
      figure-protocol-1
    8. 150 µ L 살 균 0.9 %NaCl 용액으로 세포를 resuspend.
    9. 꼬리 정 맥에 주입 셀.

2. 마 취

  1. 흡입 마 취
    1. isoflurane 화학 안전 후드 닫힌된 빈에 5%의 농도 사용 하 여 기화 기의 도움으로 증발.
    2. 마우스를 신중 하 게 처리 하 고 빈에 넣어.
    3. 이동 중지 되었습니다 후 후부 목의 피부에 의해 동물 처리.
  2. 복 마 취
    참고: 사용 isoflurane 마 취, 단계 2.1, 복 주사를 수행 하려면 아래 설명 된. 빠른 복구와 isoflurane 마 취의 짧은 연기 마약 효과, 마우스를 처리 하 여 복 마 취 주사 쉽습니다.
    1. 2.4 mL 마 취 제 (10%), 0.8 mL Xylazine (2%), 및 6.8 mL NaCl (0.9%)의 솔루션을 사용 하 여 복 주입을 위해.
    2. 무게 동물 마 취 제를 적용 하기 전에.
      참고: 마 취에 대 한 공식 이다:
      figure-protocol-2
    3. 30g 바늘 1 mL 인슐린 주사기를 사용 하 여 왼쪽된 하복 부에 주입 솔루션.
    4. 마우스의 장에 놓고 마약 효과 기다립니다.
      참고: 마약 효과 일반적으로 나타납니다 5 분 이내 주사 된 경우. 마 취의 정확한 깊이 뚜껑 반사 또는 발가락을 꼬집어, 반응 없는 호흡의 일반, 제어 속도 의해 결정 수 있습니다.

3. 지하실 막 같은 매트릭스의 주입

참고:이 메서드는 monocyte 주입 후 종양 혈관 신생 연구 우리의 그룹에 의해 사용 됩니다. 실험에 따라 성장 요인 지하실 막 같은 매트릭스를 추가할 수 있습니다. 우리는 마우스의 측면에서 종양을 주입 하기 전에 대 퇴 동맥 결 찰을 수행. 매트릭스는 주입을 위해 4 ° C의 온도가지고 있어야 합니다. 이 온도에, 행렬은 액체; 젤은 체온 (37 ° C)에 고체를 견고 하 게. 피하 매트릭스의 더 나은 시정을 위한 플러그, 사출 사이트에서 마우스의 피부를 면도.

참고: 옵션: 추가 100 ng 기본적인 섬유 아 세포 성장 인자, 300 ng 혈관 내 피 성장 인자, 및 지하실 막 같은 매트릭스를 무 균 조건 하에서 26 I.U. 덤플링을.

  1. 30 G 인슐린 주사기를 얼음에 저장소 사용까지 매트릭스의 1 mL 로드.
  2. 동물 테이블에 누워 누르고 있으면 마우스의 피부 측면에 주사 부 옆.
  3. 지하실 막 같은 매트릭스의 500 µ L를 피하 주사.
    주: 실제적인 이유를 위해 그것은 피하 분산을 피하기 위해 한 위치에서 조밀 하 게 지하실 막 같은 매트릭스를 삽입 하는 데 필요한. 실험의 끝에 마우스를 희생 후 조직에서 인공 종양을 꺼내 려 하는 것이 쉬울 것 이다.

4. 정 맥 주입 꼬리

참고: 꼬리 정 맥 주입 실험 하기 전에 시험 동물에 NaCl 솔루션 연습. Monocytes는 적절 하 게 꼬리 정 맥에 주입 수 없습니다, 아무 조직의 효과 담보에 있을 것입니다. 이 프로토콜에서 2.5 백만 monocytes 주입 하 고. Bodyweight의 더 이상 5 µ L/g를 주사 하려고.

  1. 준비 단계 1.1.8 2.5 백만 monocytes를 포함 하는 monocyte 솔루션을 사용 하 여.
  2. 30g 바늘과 1 mL 인슐린 주사기를 사용 하 여 주입을 위해.
  3. 신중 하 게 마우스를 처리, restrainer에서 동물을 제 지 하 고 마우스 감염 되지 및 호흡에 대 한 충분 한 공간이 있는지 확인 하십시오.
  4. 꼬리 접시에 게 연락할 수 있도록 난방 패드는 restrainer 넣어.
  5. 꼬리 정 맥, 꼬리의 측면에 있는 식별.
  6. 90 °, 꼬리 꼬리 정 맥 꼬리의 위 부분에 나타나도록 설정.
  7. 주입 사이드는 monocytes를 주입 하기 전에 소독.
  8. 세를 직면 하는 바늘의 경사와 평면 각도에 monocyte 솔루션을 주입 하려고
    참고: 중지 주사 물집이 나타나면 이것이 실패 한 주입의 징조. 절차를 다시 시도 더 proximally.
  9. 주사 사이트에서 약 60에 대 한 꼬리에 부드러운 압력을 적용 하 여 출혈을 멈추게.
  10. 을 조직의 부작용에 대 한 모니터링 마우스 그것의 감 금에 있는 동물에는 완 치 후 30 분 동안 동물 관찰.

5. Intravital 현미경

  1. 준비
    1. 접착 테이프를 가진 일정 한 온도 유지 하 고 자리에는 발을 해결을 열 패드 (37 ° C)에 마 취 마우스를 놓습니다.
    2. 다리 또는 현미경에 사용 되는 측면의 사이트에서 피부를 소독.
    3. 머리 간섭을 유발 하지 않도록 더 나은 처리에 대 한 관심의 영역을 면도.
    4. 삭제할 살 균 메스와 0.5 x 0.5 cm의 사각형 영역에 미세 집게 피부.
      참고: 그것은 촉촉한; 관심 영역을 유지 하는 것이 중요 그렇지 않으면, 이미지와 조직의 품질 손상 될 것 이다. NaCl 솔루션 영역을 축 축 하 게 사용할 수 있습니다.
    5. 두 조정 가능한 우표 사이 다리를 놓고 우표 위에 커버 글라스를 위치.
    6. 조직과 젖어 유리 접촉 확인.
    7. Inj혈관의 더 나은 시정을 위한 정 맥 체계로 요법 50 µ L rhodamine dextran retrobulbar.
    8. 현미경 검사 법을 시작 하 고 필요한 경우 다리의 위치를 조정.
  2. Intravital 현미경 설정
    1. 현미경, 컴퓨터, 전자 인터페이스와 레이저.
    2. 보육 실의 난방 단위 설정 또는 난방 (플레이트/패드), 무대 설정 온도 37 ° c.
    3. 수집 소프트웨어를 시작합니다. 현미경 공명 스캐너를 갖춘 경우이 빠른 스캐닝 모드 선택.
    4. 온도가 일정 수준 (35-37 ° C) 도달할 때까지 기다렸다가
      참고: 안정 온도 대 한 중요 하다: (a) 마우스, 마 취의 밑에 그것의 온도, 및 (b) 피하 또는 적어도 최소화 초점 드리프트를 제어할 수 없습니다. 이 주변 조건 (예를 들어, 에어컨 시스템 및 사람들을 포함 한 방에 열원 수)에 따라 몇 시간 1 시간을 걸릴 수 있습니다. 침수 목적 사용 하는 경우 렌즈와 커버 유리 (또는 조직) 사이의 접촉 영역 불안정의 전형적인 소스입니다. 렌즈는 객관적인 히터 난방 도움이 될 수 있습니다; 또는, 자동 초점 시스템 현미경 좋습니다.
    5. 실험의 확인 요구 사항을 충족 높은 숫자 조리개와 확대 렌즈 선택 (이 섹션의 끝에 참고).
    6. 이득, 채널 설정, 검사 속도, 픽셀 해상도, 깊이 볼륨, 스텝 크기 및 단계에 실험 동물을 배치 하기 전에 평균 현미경 설정을 최적화.
    7. 수집 시간을 줄이기 위해 양방향으로 스캔.
    8. 현미경에는 안정적인 상태에 도달 했습니다 및 설정을 dummy의 도움으로 테스트 후 마 취 마우스 prewarmed 현미경 스테이지에 배치.
    9. 관심 영역 지하실 막 같은 매트릭스 내의 초점으로 밝은 빛 조명 사용 하 여 가져오고 간단히 적용된 fluorophores에 대 한 적절 한 필터 설정으로 자외선에 의해 모 세관 검사.
    10. 스캐닝 모드; 전환 낮은 해상도 256 x 256 모드에서 검색을 시작 하 고 이득을 강화 하 고 레이저 출력 신호 모니터에 관찰 때까지.
    11. 관심의 구조에 초점입니다. 모든 세부 사항을 볼 수 있습니다 때까지 확대.
    12. 정의 " 시작 " 및 " 끝 " 축 방향에 위치.
    13. 검색 중지.
    14. 스테핑 크기 (예를 들어, 0.5 µ m) 및 초점 비행기 (예를 들어, 10-20)의 수 정의.
    15. 스위치 이동 subcellular 구조 또는 셀 선택 검사의 속도 따라 최종 픽셀 해상도 (512 x 512 또는 1024 x 1024) 속도 (스캔 주파수) 움직임에 가장 맞는. 스택의 인수를 고정 권장 양방향 검색.
      참고: 충분 한 이미지 품질을 제공 하는 검색의 높은 스캔 속도 선택 합니다. 전형적인 포인트 스캐너 400 Hz 및 1.4 kHz 사이 속도 제공합니다. 공 진 스캐너 추가 8 kHz 또는 12 kHz를 제공합니다. Y-방향으로 줄 수를 줄이면, 스캔 속도 증가 될 수 있다 추가 (일반적인 값은 512 x 512, 512 x 256 또는 512 x 200 픽셀 해상도). 신호 대 잡음 비율에 따라 하나 2와 4 사이 평균 라인을 추가 하 여 이미지 품질을 개선 하기 위해 시도할 수 있습니다. 일반적으로, 8 KHz 공명 스캐너; 양방향 모드에서 18 ms의 인수 시간/프레임에 결과 없이 평균 512 x 200의 설정 512 x 200과 x 평균 4 프레임 당 56 ms 아래로 느려집니다.

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결과

Intravital 현미경 종양 성장과 부수적인 선박 monocytes에 의해 실행의 시험에 대 한 종양 혈관 신생 및 arteriogenesis의 분자 메커니즘에 새로운 측면을 보여줄 수 있습니다. 셀 준비 되어야 하 고 신중 하 게 프로토콜의 단계를 사용 하 여 주입. 차이 단일 실험 사이 변이 발생할 수 있습니다. 정 맥 시스템 (그림 1) 조직의 효과 유지 하 고 주입 동맥 시스템에서 실시 하는 경우 발생할 수 있는 혈을 방지 하는 monocytes는 주입 해야 합니다.

지하실 막 같은 매트릭스를 사용 하는 경우 분산을 피하기 위해 천천히 주입 플러그 explantation 추가 조직학 검사에 대 한 도움이 될 것입니다 (그림 2,

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토론

여기 설명 하는 방법을 부수적인 동맥의 개발이이 선박에 monocytes의 동작 및 arteriogenesis의 과정에 빛이 나. 이 프로토콜을 적용 하기 위한 단계는 쉽게 학습과 과학의 다른 분야에서 사용 될 수 있습니다. 이러한 장점에도 불구 하 고 몇 가지 단점이 있다. 예를 들어, 현미경 장비 설명된 기법을 실행 해야 합니다. 한 실험에 대 한 장비를 얻는 하는 것은 장치를 공유 하는 다른 기관과 협력 하는 것이 중요 하다 그래서 지속 가능한, 하지입니다.

다른 어려움 연습 피할 수 있는이 프로토콜 연결을 확인 하 고 있습니다. 처음에는, 현미경, 마우스 위치에 대 한 문제가 있을 수 있습니다 그리고 이미지 품질은 이러한 상황에서 고통을 수 있습니다. 또 다른 중요 한 점은 꼬리 정 맥 주입입니다. Monocytes 제대로 주입 하는 경우는 혈관에 볼 수만 있습니다. 따라서, 그것은 마우스를 위치 하기 전에 주사를 실행 하는 것이 좋습니다.

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공개 사항

저자 들은 아무 경쟁 금융 관심사 선언 합니다.

감사의 글

이 작품은 ELSE Kröner 재단에 의해 지원 되었다 그리고 DFG (도이치 가운데, 독일 연구 재단) SFB 854 (Sonderforschungsbereich, 공동 연구 센터). 특별 기술 지원에 대 한 한스-홀거 Gärtner, Audiovisuelles Medienzentrum, 오토 폰 Guericke 대학 마그데부르크, 마그데부르크, 독일, 감사 합니다.

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재료

이 논문에 사용된 재료 목록
이름회사카탈로그 번호댓글
10% 태아 송아지 세럼 (FCS)Sigma Aldrich, 함부르크, 독일
1% 페니실린/스트렙토마이신Sigma Aldrich, 함부르크, 독일
1mL Omnifix -F 인슐린 주사기B. Braun, Melsungen AG, Melsungen, Germany
50 ml 주사기 Fresenius Kabi AG, Bad Homburg, GermanyInjectomat- 주사기 50 ml with canule
6-well-ultra-low-attachement-platesCorning Incorporated, NY, USA
8- 12 주, 수컷, C57BL/6, BalbC 마우스 Charles River, Sulzfeld, Germany
접착 테이프TESA SE, 함부르크, 독일
Acquisition SoftwareLeica, Wetzlar, Deutschland Leica Application Suite Advanced Fluorescence (LAS AF); 버전: 2.7.3.9723
CanulesB. Braun, Melsungen AG, Melsungen, Germany29G, 30G
세포 배양 접시Greiner Bio-One GmbH, Frickenhausen, Germany
세포 배양 배지단일 성분Medium199, 10% 태아 송아지 혈청, 1% 항생제(페니실린/스트렙토마이신)
원심분리기Beckman Coulter GmbH, Krefeld, 독일Allegra X-15R 원심 분리기
탈모 크림Veet, Mannheim, 독일
DiOInvitrogen Eugene, Oregon, USA
소독제Sch ü LKE& Mayr GmbH, 노르더슈테트, 독일
일회용 메스 No.10 깃털 안전 면도기 Co.Ltd, 오사카, 일본 
EDTASigma Aldrich, 함부르크, 독일
Erlenmeyer 플라스크GVB, Herzogenrath, 독일
에탄올 70%Otto Fischar GmbH und Co KG, Saarbrü cken, 독일
태아 송아지 혈청시그마 Aldrich, 함부르크, 독일
Fine ForcepsRubis, Stabio, 스위스
Flurophor/RhodamindextranThermo Fischer Scientific, Waltham, MA USAKatalognummer: D-1819
장갑Rö sner-Matby Meditrade GmbH, Kiefersfelden, Germany
히팅 패드 라보텍트 GmbH, Gö 팅겐, 독일 핫 플레이트 062
인간 대식세포 콜로니 자극 인자Sigma Aldrich, 함부르크, 독일SRP3110 
인도적인 백혈구 필터혈액 보존
인큐베이터Ewald Innovationstechnik GmbH, Bad Nenndorf, Germany
IsofluraneBaxter Deutschland GmbH, Unterschleiß Heim, Germany
케타민 (10%)Ketavet, Pfizer Deutschland GmbH, Berlin, Germany
Leukocyte separation tubes (필터가 있는 튜브) Bio one GmbH, 프리켄하우젠, 독일
광학 현미경 Carl Zeiss SMT GmbH, Oberkochen, GermanyAxiovert 40 C
림프구 분리 매체 LSM1077GE Healthcare, Pasching, Austria
Matrigel Becton, Dickinson and Company, Franklyn Lakes, New Jersey, USA
미디엄 M199 PAA Laboratories GmbH, Pasching, Austria
Microbiological work benchThermo Electron, LED GmbH, Langenselbold, GermanyHera safe
Microscope slideCarl Roth GmbH + Co. KG, KarlsruheArt. Nr. 1879
인큐베이터와 가열 장치가 있는 현미경 스탠드  Leica DMI 6000, Pecon, Germany
Monocyte wash buffer우리 그룹에서 제조하였으며, 단일 구성 요소PBS, 0.5% BSA, 2mM EDTA
마우스 억제다양한
다광자 현미경으로라이카, 베츨라, 독일 라이카 SP5 컨포칼 현미경, 카멜레온, 코히런트
NaCl (0,9%)Berlin Chemie AG, 베를린, 독일
Neubauer counting chamber Paul Marienfeld GmbH und Co.KG, Lauda-Kö nigshofen, 독일
ObjectiveLeica, Wetzlar, Deutschland Leica HC PL APO 10x/0.4 CS
PBSLife technologies GmbH, 다름슈타트, 독일ph 7,4 sterile
Penicillin/StreptomycinSigma Aldrich, Hamburg, Germany
Percoll단일 성분90 % Percoll, 10% 1,5M NaCl, ρ= 1,064 g cm-3
Percoll 솔루션GE Healthcare, Bio-Science AB, 웁살라, 스웨덴
피펫Eppendorf AG, 함부르크, 독일10µ L/100&마이크로; L/200&마이크로; L/1000&마이크로; L
Pipettes serologicalGreiner Bio-One GmbH, 프리켄하우젠, 독일  Cellstar2ml, 5ml, 10ml
피펫팅 헤드Eppendorf AG, 함부르크, 독일
PipetusEppendorf AG, 함부르크, 독일
폴리스티롤 튜브Cellstar, Greiner Bio-One GmbH, 프리켄하우젠, 독일
ScissorWord Precision Instruments, Inc., Sarasota, USA
ScaleMettler PM4800 Delta Range, Mettler-Toledo GmbH, Gieß en, 독일
흡입 장치Integra bioscience, Fernwald, 독일Vacusafe comfort
Surgical scissorsWord Precision Instruments, Inc., Sarasota, USA
Trypan blue solution 0,4 %Sigma Aldrich, Hamburg, Germany
캡이 있는 튜브Greiner Bio-One GmbH, Frickenhausen, Germany15ml, 50ml Cellstar
자일라진 (2 %)Ceva Tiergesundheit GmbH, Dü sseldorf, 독일
기 제조되었습니다.

참고문헌

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  4. Wagner, M., et al. Isolation and intravenous injection of murine bone marrow derived monocytes. Journal of visualized experiments JoVE. (94), (2014).
  5. Herold, J., et al. Transplantation of monocytes: a novel strategy for in vivo augmentation of collateral vessel growth. Human gene therapy. 15 (1), 1-12 (2004).
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  13. Houthuys, E., Movahedi, K., Baetselier, P., de Van Ginderachter, J. oA., Brouckaert, P. A method for the isolation and purification of mouse peripheral blood monocytes. J. Immunol. Methods. 359 (1-2), 1-10 (2010).
  14. Berthold, F. Isolation of human monocytes by Ficoll density gradient centrifugation. Blut. 43 (6), 367-371 (1981).

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