유전자 교란 mutans 연쇄 상 구 균 긴장 없이 유전자 복제의 생성

요약

우리 유전자 교란 구 mutans 의 생성에 대 한 손쉬운, 신속한, 그리고 상대적으로 저렴 한 방법 설명 변종; 이 기술은 다양 한 종의 유전자 교란 종자의 생성에 대 한 적용할 수 있습니다.

초록

특정 유전자의 기능 설명에 대 한 일반적인 방법을 야생-타입 스트레인 및 관심사의 유전자 교란 되었습니다 했다 긴장의 비교 phenotypic 분석을 포함 한다. 유전자 장애 DNA 구조 적당 한 항생제 내성 표시 유전자를 포함 하는 박테리아의 변종 유전자 교란의 세대에 대 한 유용 합니다. 그러나, 전통적인 건축 방법, 유전자 복제 단계를 필요로 하는 복잡 하 고 시간이 걸리는 프로토콜을 포함 한다. 여기, 타겟된 유전자 장애 mutans 연쇄 상 구 균에 에서 대 한 상대적으로 손쉬운, 빠르고 비용 효율적인 방법을 설명 합니다. 메서드는 2 단계 융합 연쇄 반응 (PCR) 중단 구조 및 유전자 변환 위한 electroporation 생성 하 이용 한다. 이 메서드는 효소 반응, PCR, 이외의 필요 하지 않습니다 그리고 또한 중단 구성의 디자인 측면에서 더 큰 유연성을 제공 합니다. 고용 electroporation의 유능한 세포 준비를 용이 하 게 하 고 변환 효율을 향상 시킵니다. 현재 메서드는 다양 한 종의 유전자 교란 종자의 생성에 대 한 적응 수 있습니다.

서론

유전자 기능 분석은 일반적으로 야생-타입 긴장과 긴장에 관심사의 특정 유전자 중단 되었습니다 phenotypic 비교를 포함 한다. 이 유전자-중단 기술은 다양 한 포유 동물에 박테리아에서 taxa에에서 유전자 기능 분석에 대 한 활용 되었습니다. 유전자 장애 개념은 유전자 교란 스트레인;의 생성에 필요한 이 deoxyribonucleic 산 (DNA) 구문 업스트림 및 다운스트림 영역 대상 유전자의 측면에 융합 항생제 내성 표시 유전자의 구성 되어 있으며 동종 재결합을 통해 게놈으로 통합 됩니다. 유전자 교란 스트레인 항생제를 포함 하는 선택적 미디어를 사용 하 여 격리 될 수 있습니다. 유전자 교란 스트레인의 건설에 사용 되는 기존의 방법 중 합 효소 연쇄 반응 (PCR), 적당 한 플라스 미드, 제한 된 소화에 유전자의 결 찰에 의해 대상 유전자의 증폭 등의 복잡 한 단계 필요 효소, 그리고 항생제-저항 마커 유전자 삽입을 religation. 이 과정은 시간이 많이 걸리는, 각 단계의 성공에 따라 몇 주 몇 일 복용. 또한, 장애 구문 디자인 대상 유전자의 금지 효소 사이트에 따라 달라 집니다. 이러한 문제를 해결 하려면 DNA PCR 기반 접합 방법^1,2 Dictyostelium discoideum³ , Synechocystis sp. PCC6803⁴ 의 돌연변이 유전자 교란의 디자인에 대 한 보고 되었습니다. 현재 연구에서 메서드는 상대적으로 손쉬운, 신속 하 고 저렴 한 방식으로, 파괴의 건설에 대 한 수정 된 PCR 기반 방법 (지정 2 단계 융합 PCR)을 이용 하 여 유전자 교란 연쇄 구 균 긴장을 생성 하 개발 되었다 구문 및 electroporation 유전자 변환에 대 한입니다.

PCR는 적절 하 게 genomic DNA, PCR 템플릿으로 항생제 내성 표시 유전자 및 4 쌍의 필요 2 단계 융합 oligonucleotide 뇌관 설계 되었습니다. 첫 번째 단계 (1^세인트 PCR), 1 kb 업스트림 측면에 서 지역 1 kb 다운스트림 측면에 서 지역 대상의 대상 유전자의 유전자, 그리고 항생제-저항 마커 유전자 PCR에 의해 증폭 됩니다. 역방향 뇌관 및 증폭의 상류와 하류에 대 한 앞으로 뇌관의 5' 지역 지역, 각각, 측면 15 기지 마커 유전자의 끝에 보완을 포함 됩니다. 5' 영역 마커 유전자 증폭에 대 한 정방향 및 역방향 뇌관의 비슷하게 포함 15 기초 대상 유전자의 상류 측면에 서 영역의 아래쪽 끝 고 대상 유전자의 하류 측면에 서 영역의 위쪽 끝을 보완 각각. 따라서, 3 개의 증폭 된 파편 퓨전 사이트에서 겹치는 30-기본적인 쌍 지역 포함. 두 번째 단계 (2^차 PCR), 1^세인트 PCR 템플릿으로 의해 증폭 3 조각을 사용 하 여 중첩된 한 PCR 뇌관으로 PCR 수행 됩니다. 서식 파일의 상호 보완적인 영역 또한 2^차 PCR을 통해 서로 연결 됩니다. 마지막으로, 동종 재결합에 대 한 구문 electroporation 야생-타입 스트레인에 소개 된다. 성공적인 유전자 장애 특정 뇌관을 사용 하 여 PCR에 의해 확인 될 수 있습니다. 중단 구조는 고 충실도 DNA 중 합 효소를 사용 하 여 증폭, 비록 추가 효소 반응, DNA 결 찰 등 DNA 소화, 구조를 생성 하기 위해 필요 하지 않습니다. 또한, 게놈에 삭제 또는 보존 지역 뇌관 디자인에 따라 유연 하 게 선택할 수 있습니다.

현재 작업에서 glucosyltransferase mutans 연쇄 상 구 균에에서 인코딩하는 gtfC 유전자의 전체 코딩 영역의 삭제 연쇄 구 균 종에서 신속 하 고 쉽게 유전자 장애 메서드를 보여 주기 위해 수행 되었다. 또한, gtfB-방해 스트레인 같은 방식으로 생성 된. GtfC 와 gtfB 에 의해 glucosyltransferases cariogenic 치과 biofilm 개발^5,6에 기여 한다. 야생-타입의 biofilm 형성 능력 스트레인 (S. mutans WT), gtfC-스트레인 (S. mutans ΔgtfC), 및 gtfB중단-방해 스트레인 (S. mutans ΔgtfB) 평가 했다 대 한 비교 phenotypic 분석. 이 프로토콜 추가 종 유전자 장애에 대 한 2 단계 방법의 응용 프로그램을 확장 하 고 taxa의 넓은 범위에서 유전자 기능 연구에 대 한 수정할 수 있습니다.

프로토콜

1. 뇌관 디자인

1. 뇌관 2 단계 융합 PCR 및 유전자 장애의 확인에 대 한 준비.
   주: 표 1이 프로토콜에 사용 되는 뇌관 시퀀스를 보여 줍니다. 그림 1 S. mutans Δ gtfC를 생성 하는 데 사용 하는 2 단계 융합 PCR 방법의 개요 그림을 보여준다.
2. 디자인 뇌관 spectinomycin 저항 유전자 (spc ^r) ⁷ 게놈에 대상 영역의 교체에 대 한
   . 이 프로토콜 spc ^r gtfC 유전자의 코딩 지역 전체 바꿉니다.
   1. 5에서 15 기지 spc ^r의 위쪽과 아래쪽 끝에 보완을 포함 ' 최대 역의 지역 및 다운-앞으로 뇌관, 각각. 마찬가지로, 5에서 15 베이스 gtfC의 업스트림 측면에 서 영역의 아래쪽 끝 및 gtfC의 다운스트림 측면에 서 영역의 위쪽 끝에 보완을 포함 ' spc ^r의 지역-앞으로 및 spc ^r -반전 뇌관, 각각 ( 그림 1A).
      참고: 시퀀스의 최대 반전, 아래-앞으로, spc ^r-앞으로, 및 spc ^r-반전 뇌관 중단 구성의 사이트에 따라 자동으로 결정 됩니다.
   2. 구성에 최대-앞으로 및 다운 반전 뇌관 디자인 > 1 kb 업스트림 및 다운스트림 측면 gtfC 유전자의 지역 각각. 최대-앞으로의 녹는 온도 (T _m)을 설정 하 고 다운-반전 뇌관 최대 반전 및 다운-앞으로 뇌관의 녹는 온도 따라 각각 ( 그림 1A).
      참고: T _m을 결정 하는 다음 수식에 참조: T _m (° C) 2 = (* 나 + * NT) + 4 (* 노스캐롤라이나 + * NG)-5, 어디 * N (A, T, C, 또는 G) 지정 된 id 가진 뇌관 뉴클레오티드의 수를 나타냅니다.
   3. 디자인 2 ^차 PCR ( 그림 1B)에 대 한 중첩 된 뇌관 (N_up-앞으로 및 N_up 역).
      참고: 바깥쪽 뇌관 쌍 (최대-앞으로 및 역방향 다운) 2 ^차 PCR 뇌관으로 사용 될 수 있습니다, 있지만 중첩 된 뇌관 (N_up-앞으로 및 N_up 역)이이 프로토콜에 설계 되었습니다. 중첩 된 뇌관은 자주 필요 2 ^차 PCR, 대표 결과에 설명된대로.
   4. 디자인 뇌관 spc ^r에 대 한 특정. GtfC 장애에 대 한 화면으로 식민지 PCR에 사용 되는 뇌관.
   5. GtfC의 확인에 대 한 디자인 뇌관 중단.
      참고: 이러한 뇌관을 사용 하 여 증폭 PCR 제품 gtfC 또는 spc ^r 상류 또는 하류 측면 gtfC의 지역 사이 국경에 걸쳐져. 뇌관 세트 ' gtfC 최대-앞으로 및 gtfC 최대 역 '와 ' gtfC 다운-앞으로 및 gtfC 다운 역 ' gtfC에 대 한 특정 및 ' gtfC 최대-앞으로 및 spc ^r 2 -역 '와 ' spc ^r 2-앞으로 및 gtfC 다운 역 ' spc ^r에 대 한 특정 있다.

2. S. mutans에서 게놈 DNA 추출

1. 행진 주식 S. 뮤턴트의 UA159 두뇌 심 혼 주입 (BHI) 한 접시에. 혐 기성 조건 하에서 37 ° C에서 하룻밤 접시를 품 어.
2. 소독된 이쑤시개를 사용 하 여 단일 식민지를 데리 고 BHI 국물의 5 mL에 접종. 혐 기성 조건 하에서 37 ° C에서 하룻밤 S. 뮤턴트의 문화를 품 어.
3. 2000 × g.에서 15 분 동안 원심 분리기 세균성 세포 배양의 인산 염 버퍼 식 염 수 (PBS) 5 mL에 셀 펠 릿 Resuspend.
4. 2000 × g.에서 15 분 동안 원심 분리기 PBS의 200 µ L에서 셀 펠 릿 Resuspend.
5. 제조업체에서 제공 하는 지침에 따라 비드 박동 베이스 게놈 DNA 추출 키트를 사용 하 여 정지에서 게놈 DNA를 추출. 유리 구슬 (키트에 포함)를 포함 하는
   1. 전송 현 탁 액 2.0 mL 샘플 튜브. 세포 현 탁 액을 세포 솔루션 (키트에 포함)의 750 µ L을 추가.
   2. 단단히 뚜껑과 구슬 박동 장애 기구의 튜브 홀더에 대칭으로 튜브를 놓습니다. 5 분에 대 한 최대 속도에서 프로세스입니다. 10000 × g.에 1 분 동안 구슬 구타 원심 분리기 샘플 2.0 mL 컬렉션 튜브 및 7000 × g .에서 1 분 동안 원심 분리기에서 회전 필터 (키트에 포함)에 상쾌한 전송
   3. 추가 1200 µ L의 DNA 바인딩 버퍼 (키트에 포함)는 여과 액입니다. 10000 × g.에 1 분 동안 원심 분리기를 2.0 mL 컬렉션 튜브 (키트에 포함) 스핀 열에 혼합물의 800 µ L를 전송
   4. 흐름을 통해 삭제 열 매트릭스를 세척 하 고 10000 × g. 흐름 통해 삭제에서 1 분 동안 원심, 스핀에 500 µ L 워시 버퍼 (키트에 포함)의 추가 스핀 열 미리 세척 버퍼 (키트에 포함)의 200 µ L을 추가 열 열 매트릭스를 세척 하 고 10000 × g.에 1 분 동안 원심을
   5. 스핀 열 새로운 microcentrifuge 1.5 mL 튜브에 놓고 열 매트릭스를 100 µ L 차입 버퍼 (키트에 포함)의 추가.
   6. 30 대 분리기 elute 게놈 DNA를 10000 × g에서 s. 260에서 흡 광도 측정 하 여 DNA의 농도 및 순도 추정 nm 및 280 nmusing 분 광 광도 계는 A ₂₆₀ /A ₂₈₀ 비율이 1.8 보다 크면 확인 하십시오.

3. PCR 증폭

1. 수행 1 ^세인트 PCR PCR 템플릿 (표 1 참조)으로 미 뮤턴트의 WT 게놈 및 합성 spc ^r 유전자를 사용 하 여. GtfC 유전자의 측면에 서 상류 지역, gtfC 유전자와 뇌관 당로 ( 그림 1A), 위에서 설명한의 3 세트를 사용 하 여 spc ^r 유전자의 측면에 서 하류 지역 증폭 표 2 및 표 3.
   참고: PCR 뇌관, 시 약, 및 증폭 사이클에서 요약 된다 표 1, 표 2 및 표 3, 각각.
2. 1 %agarose 젤에 PCR 제품 각 충분치 고 젤 밴드 커터를 사용 하 여 해당 밴드 소비 세.
3. 스핀 열 및 실리 카 멤브레인 기반 젤 추출 키트를 사용 하 여 젤에서 각 증폭된 DNA 제품을 정화.
   1. 전송 깨끗 한 microcentrifuge에 젤 조각 튜브와 500 µ L 바인딩 버퍼 (키트에 포함)와 혼합. 젤 조각 완전히 해산 될 때까지 15 분 동안 55 ° C에 혼합물을 품 어.
   2. (키트에 포함) 스핀 열 컬렉션 튜브 (키트에 포함)로, 스핀 열에 샘플 로드 놓고 30 원심 11000 × g에서 s. 통해 흐름, 워시 버퍼 (키트에 포함)의 600 µ L를 실리 카 막 씻어 30 원심 회전 열 추가 11000 × g에서 s.
   3. 흐름을 통해 및 실리 카 막 건조 11000 × g에서 2 분 동안 원심 분리기 삭제.
   4. 스핀 열 새로운 1.5 mL microcentrifuge 튜브로, 50 µ L을 추가 차입 버퍼 (키트에 포함), 2 분에 대 한 실 온에서 품 어와
   5. 11000에서 2 분 동안 원심 분리기 × g elute 증폭 된 DNA를. 260에서 흡 광도 측정 하 여 DNA의 농도 및 순도 추정 nm 및 280 nmusing 분 광 광도 계는 A ₂₆₀ /A ₂₈₀ 비율이 1.8 보다 크면 확인 하십시오.
4. 수행 2 ^nd 2 단계 융합 표 2에 의하여 PCR 템플릿으로 세 약 아데닌 파편을 사용 하 여 PCR PCR < /st룽 > 및 표 3.
   참고: 이러한 증폭 된 조각과 중첩 된 뇌관을 사용 하 여 접합 ' N_up-N_down-리버스와 ' 또는 바깥쪽 뇌관 ' 최대-앞으로 및 역방향 다운 ' ( 그림 1B). PCR 뇌관, 시 약, 및 증폭 주기 각각 표 1, 표 2 및 표 3에 요약 됩니다.
5. 0.8 %agarose 젤에 PCR 반응 혼합물 (5 µ L)의 1/10을 로드 하 고 적절 한 amplicon ( 그림 1C)의 생성을 확인 하려면 예상된 밴드 크기와 증폭된 밴드 크기 비교.
6. 정화 없이 에탄올 강 수에 의해 나머지 최종 PCR 제품 집중.
   1. 추가 55 µ L의 울트라 순수 물 100 µL.Add에 총 볼륨을 조정 하려면 남은 PCR 혼합물에 3m 나트륨 아세테이트 (10 µ L), pH 5.2, 뒤에 100% 에탄올 (250 µ L)의 2.5 볼륨의 1/10 볼륨. 혼합 하 고 30 분-80에 대 한 동결 ° c.
   2. 4 ° C에서 15000 × g에서 20 분 동안 원심 분리기 튜브의 하단에 펠 릿에 대 한 확인 하 고 삭제는 상쾌한. 70% 에탄올, 4 ° C에서 15000 × g에서 5 분 동안 원심 분리기의 1 mL와 펠 릿을 세척 하 고는 상쾌한 삭제. 약 30 분 동안 펠 릿 건조 및 매우 순수한 물 10 µ L로 분해.

4. 유능한 세포 준비 및 셀 변환

1. 행진 주식 S. 뮤턴트의 UA159 BHI 한 천 격판덮개에. 혐 기성 조건 하에서 37 ° C에서 하룻밤 접시를 품 어.
2. 소독된 이쑤시개를 사용 하 여 단일 식민지를 데리 고 BHI 국물의 5 mL에 접종. 혐 기성 조건 하에서 37 ° C에서 하룻밤 S. 뮤턴트의 문화를 품 어.
3. 뮤턴트 S. s 문화 2 mL 50 mL BHI 국물의 전송 및 6-8 h 600에서 광학 밀도를 37 ° C에서 품 어 혐 기성 조건 하에서 0.2-0.4 nm (OD ₆₀₀).
4. 4 ° C에서 2000 × g에서 15 분 동안 세포를 원심, 상쾌한, 폐기 및 40 mL 40 mL 10% 글리세롤의 뒤 차가운 물로 두 번 셀 세척.
   참고: 잔여 물질에 영향을 미칠 후속 electroporation.
5. 발음 파스퇴르 피 펫으로 신중 하 게 상쾌한 10% 글리세롤에 셀 펠 릿의 부착 감소. 신선한 10% 글리세롤의 1 mL에 셀 resuspend, 각 microcentrifuge 1.5 mL 튜브에 정지의 50 µ L를 분배 하 고 사용 직전까지-80 ° C에 저장.
6. 믹스 50 µ L 약 수 차가운 유능한 세포의 파괴의 5 µ L로 구성 섹션 3에에서 위에서 설명한. (전극 사이의 0.2 cm 거리)와 큐 벳 electroporation에 혼합물을 추가 합니다. 황색 포도상구균 모드 사용 (1.8 k v, 600 Ω, 10 µ F, 1 펄스)의 electroporate electroporation 기구.
7. Electroporation 직후 BHI 국물의 500 µ L에서 세포를 일시 중단 하 고 spectinomycin 포함 된 BHI-한 천 배지를 현 탁 액의 50 µ L을 추가.
   참고: 추가 보육 시간 후 electroporation 필요 하지 않습니다. 그러나, electroporation 후 1-2 h에 대 한 보육 변환 효율을 향상 시킬 수 있습니다.
8. 혐 기성 조건 하에서 37 ° C에서 2-6 일 동안 접시를 품 어.
   참고: 위에서 설명한 대로 S. mutans Δ gtfB가 생성 됩니다. GtfB 유전자의 전체 코딩 영역이 S. mutans Δ에 리스로 마이 신 저항 유전자 ⁸ 대체 gtfB. 각 S. mutans 긴장은 혐 기성 조건 하에서 37 ° C에서 BHI 국물에 교양.

5. 유전자 장애 및 스토리지의 확인

1. 임의의 식민지를 선택 하 고 식민지 PCR 표 2와 표 3을 수행을 PCR 혼합에 그들을 예방. PCR 뇌관, 시 약, 및 증폭 주기 각각 표 1, 표 2 및 표 3에 요약 됩니다.
2. Spc ^r 것인지 1 %agarose 젤에 PCR 반응 혼합물을 로드-특정 DNA 밴드.
3. 혐 기성 조건 하에서 37 ° C에서 2 일 동안 소독된 이쑤시개와 spectinomycin 포함 된 BHI의 10 mL에 2 차 배양 세포를 사용 하 여 긍정적인 식민지 국물 선택.
4. S. mutans Δ의 생성을 확인 gtfC.
   1. 세포 현 탁 액을 동등 하 게 분할. 위에서 설명한 세포에서 게놈 DNA를 추출 (2.3 단계. 2.5.5에.). GtfC 장애 표 2와 표 3 (표 1)의 확인에 대 한 프라이 머를 사용 하 여 PCR 템플릿으로 게놈 dna는 PCR을 수행.
      참고: PCR 뇌관, 시 약, 및 증폭 사이클에서 요약 된다 표 1, 표 2 및 표 3, 각각.
   2. 2 %agarose 젤에 PCR 혼합물을 로드 하 고 적절 한 amplicon .의 생성을 확인 하려면 예상된 밴드 크기와 증폭된 밴드 크기 비교
   3. 4 2000 × g에서 15 분 동안 나머지 세포 현 탁 액을 원심 ° C. PBS의 5 mL에 셀 펠 릿 Resuspend.
   4. 4 2000 × g에서 15 분 동안 원심 분리기 ° C. Resuspend 셀 포함 하는 25% 글리세롤 BHI 국물 1.5 mL에 작은 고-80 ° 오호-20 ° C에에서 저장

6. Phenotypic 분석

BHI 천 배지에

1. 행진 각 S. 뮤턴트의 스트레인. 혐 기성 조건 하에서 37 ° C에서 하룻밤 접시를 품 어.
2. 소독된 이쑤시개를 사용 하 여 단일 콜로 니를 선택 하 고 적절 한 항생제 없이 BHI 국물의 2 개 mL에 접종. 혐 기성 조건 하에서 37 ° C에서 밤새 품 어.
3. 하룻밤 문화 서 스 펜 션의 20 µ L 유리 시험관에 항생제 없이 1% 또는 5% 자당을 포함 된 BHI 국물의 2 개 mL에 접종, 혐 기성 조건 하에서 37 ° C에서 하룻밤 경사 위치에 테스트 튜브 셀 문화.
4. 소용돌이 유리 시험관 10 s 및 문화 현 탁 액을 가만히 따르다. 시험관 증류수로 세 번 세척. 0.25 %Coomassie 화려한 튜브 벽에 있는 biofilms 얼룩 (CBB) 블루 하 고 다음 1 분에 대 한 품 어의 1 mL을 추가
5. 얼룩 솔루션을 가만히 따르다, 증류수와 세 번 시험관을 세척 하 고 건조 테스트 튜브.
6. 색상 밀도 CBB 스테인드-biofilm phenotypic 분석에서 biofilm을 형성 하는 능력을 결정 하는 시각의 확장을 모두 평가.

결과

그림 2 는 그 1^세인트 PCR, 각 제품의 크기, 1 %agarose 젤에 관찰 했다 약 1 kb의 예상된 크기와 좋은 계약에. 그림 3 의 2^차 PCR 제품의 젤 전기 이동 법 분석을 보여준다. 그림 4 는 S. mutans 식민지 붕괴 구조와 식민지 PCR 제품의 젤 전기 이동 법 분석 변환. 모든 식민지에서 amplicons 예측된 크기의 이었다. 그림 5 는 gtfC 중단 및 젤 전기 이동 법의 PCR 제품의 확인에 대 한 입문서-바인딩 사이트. GtfC-특정 뇌관 세트를 사용 하 여 증폭 하 여 얻은 PCR 제품 확인 되었다

토론

현재 프로토콜 1^세인트 PCR 뇌관 상류와 하류 측면 게놈에서 대상 영역의 영역 약 1kb를 증폭 설계 되어야 합니다. 이러한 긴 측면에 서 시퀀스는 동종 재결합의 효율성을 개선 하는 데 필요한.

뇌관의 시퀀스 (최대 반전, 아래-앞으로, spc^r-앞으로, 및 spc^r-리버스)이이 프로토콜에서 자동으로 결정 되었다 중단 구성의 사이트에 따라. 각 뇌관 15 기초 5' 영역에서 2^차 PCR 서식 파일의 끝에 보완을 포함 되어 있습니다. 더 이상 바인딩 사이트 중단 건설의 보다 효율적인 생산을 수 있습니다. 각 뇌관의 5' 영역에서 적어도 10 보완 기지의 포함⁹것이 좋습니다.

중첩 된 뇌관 (N_up-앞으로 및 N_up 역) 바깥쪽 뇌관 (최대-앞으로 및 다운 역) 보다는 2

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
실험실의 Streptococus mutans	Stock 균주.		야생형 균주(균주 UA159)
게놈 DNA 추출 키트	자이모 리서치	D6005
비드 박동 파괴 장치	타이텍	GM-01
합성 유전자	유로핀 유전체학	맞춤형	주문 스펙티노마이신 및 에리트로마이신 내성 유전자
열 순환기	Astec	PC-708
PCR 프라이머	Eurofins Genomics	맞춤 주문	35개 염기 길이
DNA 중합효소	Takara	R045A	고충실도 DNA 중합효소
겔 추출 키트	Nippon Genetics	FG-91202	아가로스 겔에서 DNA 추출
겔 밴드 커터	Nippon Genetics	FG-830
분광 광도계	Beckman Coulter	DU 800
Electroporator	Bio-rad	1652100
Electroporation 큐벳	Bio-rad	1652086	0.2cm 갭
Anaeropack	Mitsubishi Gas Chemical	A-03	혐기성 배양 시스템
뇌 심장 주입 국물	Becton, Dickinson	237500	박테리아 배양 매체
Spectinomycin	Wako	195-11531	항생제
에리스로마이신	Wako	057-07151	항생제
설탕	Wako	196-00015	생물막 현상용
CBB R-250	Wako	031-17922	생물막 염색용