셀 침공 및 마이그레이션 프로세스의 평가: 비디오 현미경-기반 스크래치의 비교 분석 결과 및 Boyden 챔버 분석 결과 상처

Summary

이 연구 보고서의 세포 침입과 마이그레이션 분석에 대 한 두 가지 방법: Boyden 챔버 분석 결과 및 체 외에서 비디오 현미경-기반 상처 치유 분석 결과. 이 두 실험에 대 한 프로토콜 설명, 그리고 그들의 장점과 단점 비교 됩니다.

Abstract

종양 세포의 침입과 마이그레이션 능력 암 진행 및 재발 주 기여자입니다. 많은 연구는 새로운 치료 전략을 개발 하는 것을 목적으로, 암 세포 전파 하는 방법을 이해 하려면 마이그레이션 및 내 습 능력 탐험 있다. 이러한 능력의 세포질과 분자 기초의 분석 세포 이동성의 특성화 및 골격 및 세포 microenvironment의 물리 화학적 특성을 주도하 고 있다. 몇 년 동안, Boyden 챔버 분석 결과 스크래치 상처 분석 결과 표준 기술을 공부 셀 침공 및 마이그레이션 되었습니다 합니다. 그러나,이 두 기술에는 제한이 있습니다. Boyden 챔버 분석 결과 어렵고 시간 소모, 그리고 스크래치 상처 분석 결과 낮은 재현성. 현미경 검사 법에 특히 현대 기술의 개발은 스크래치 상처 분석 결과의 재현성을 증가 했다. 강력한 분석 시스템을 사용 하 여, 세포 이동과 내 습의 자동 및 실시간 분석을 제공 하는 "인큐베이터" 비디오 현미경을 사용할 수 있습니다. 이 문서의 목표는 보고 하 고 셀 침공 및 마이그레이션 공부 하는 데 사용 하는 두 분석 비교: Boyden 챔버 분석 결과는 최적화 된 생체 외에서 비디오 현미경-기반 스크래치 상처 분석 결과.

Introduction

셀 침공 및 마이그레이션 저항 처리¹ 의 주요 원인, 암 세포의 보급에 참여 하 고 locoregional 또는 전이성 재발 암 치료²후 발생할 수 있습니다. 상피 엽 전환 (응급) 셀 침공-마이그레이션은 암에서 세포에서 전환 상피는 엽 형의 초기 과정입니다. E-Cadherin 상피 형³의 extracellular 마커 이며 N cadherin vimentin의 증가 식 엽 형⁴의 특징입니다. 또한 마이그레이션 매트릭스 metalloproteases⁵의 행동을 통해 기질 (ECM)을 침략 암 세포의 내장 용량에 의존 한다.

이 침공-마이그레이션 메커니즘, 머리와 목 암⁶특히 여러 위치에서 암에 대 한 설명 하고있다. 많은 연구원은 암 세포가이 지식 새로운 치료 전략으로 이어질 것입니다 희망에서 보급 하는 방법을 더 잘 이해 하려면 마이그레이션 및 내 습 프로세스에 집중 했다. 그것은 중요 이러한 연구 신뢰성 및 재현성 분석 실험을 사용 하 여 수행 됩니다.

Protocol

참고: ECM의 포함 없이 Boyden 챔버와 스크래치 분석 실험 이라고 마이그레이션 분석 결과, 그리고 ECM과 같은 분석을 침공 분석 결과 라고.

1. Boyden 챔버 분석 결과

참고:이 프로토콜은 재발 머리와 목 편평 상피 세포 암 (HNSCC) 후 두 암에서 파생 되 고 존에서 얻은 SQ20B의 셀 라인에 맞게 작은 (보스턴, 메사추세츠, 미국).

주 1

1. 시드 셀
   1. 시드 2 10⁶ SQ20B 175 cm² 플라스 크 하루 전에 72 h에에서 문화 매체 (CM)의 12 mL에서 세포 고 80% 셀 합류에 성장 하는 세포.
      1. SQ20B 셀에 대 한 CM을 준비, 10% 태아 종 아리 혈 청 (FCS), 0.04 mg/mL 날린, 100 U/mL 페니실린과 0.1 g/L 스 Dulbecco의 수정된이 글 매체 (DMEM)을 보충.
   2. 층 류 흐름 후드 셀 trypsinize. 매체를 제거 하 고 세척 멸 균 인산 염 버퍼 식 염 수 (PBS), 셀 try....

Results

우리 보고 여기 셀 침공 및 마이그레이션 분석을 두 가지 방법. 그림 1 는 Boyden 챔버 실험을 보여준다. 셀은 CM에 시드와 삽입 chemoattractant 매체와 동반자 접시에 배치 됩니다. 막 코팅 수 (마이그레이션 분석 결과) 또는 코팅 (침공 분석 결과). 셀은 s c M에 상단 챔버로 시드. 낮은 챔버는 chemoattractant으로 CM으로 가득 합니다. 셀 2 배 시간 전에 고정 됩니다.

그림 2 는 셀 고정 후 Boyden 멤브레인을 보여준다. 그림 2A 는 차선의 결과, 막의 상부에 셀 클러스터를 보여 줍니다. 그림 2B 셀 .......

Discussion

우리 보고 여기 두 다른 modalities 셀 침공 및 마이그레이션 과정을 공부 합니다. 이 프로세스의 분석은 암 줄기 세포^10,11이라고 하는 암 세포의 부분 모집단의 증가 운동에 의해 설명 될 수 있는 전이성 재발에 관련 된 요소를 이해 해야 합니다.

Boyden 챔버 실험은 가장 자주 사용 되는 기술을 탐구 하 세포 내 습 및 마이그레이션. 이 기술은 높은 실험의 전문성에 의존 하지만이 방법의 장점 중 하나는 재현성 이다. 셀 계산 수동 이며 경험 사이 다를 수 있습니다. 많은 중요 한 단계 표준화 하 고 뒤에 각 셀 라인에 적절 한 chemoattractant 및 기아 매체의 사용을 보장 하는 등 주의 해야 합니다. 면봉으로 위 막에서 세포를 제거 하는 것이 또한 최적의 결과 보장 하 고 그림 2A에 표시 된 차선.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
태아 송아지 혈청 골드	GE 헬스케어	A15-151
하이드로코르티손 수용성	시그마-알드리치	H0396-100MG
페니실린/스트렙토마이신 100 X	Dominique Dutscher	L0022-100
DMEM	Gibco	61965-026
F12 너트 믹스 (1X) + GlutaMAX-I	Gibco	31765-027
EGF	Promega	G5021	용액은 매우 불안정하기 때문에 사용 직전에 준비해야 합니다
Z1 쿨터 입자	Beckman Coulter	6605698
광학 현미경	Olympus	CKX31
SQ20B 세포주	존 리틀의 선물 s	Laboratory-Wound
Maker	Essen Bioscience	4494	안전하고 건조한 장소에 보관
96웰 ImageLock Plate	Essen Bioscience	4379
CoolBox 96F 시스템(CoolSink 포함) 96F	Essen Bioscience	1500-0078-A00
CoolBox(M30 시스템 포함	Essen Bioscience	1500-0078-A00
Boyden Insert	Dominique Dutcher	353097
Boyden 코팅 인서트	Dominique Dutcher	354483	-20 ° C
Companion 24웰 플레이트	Dominique Dutcher	353504
BD Matrigel 표준	BD BioScience	BD 354234	-20°C에 보관
RAL 555 염색 키트	RAL 진단	361550	안전하고 건조한 장소에 보관
Microcentrifuge 튜브	Eppendorf	33511