양적 Confocal 반사 현미경을 통해 3D 매트릭스에 포유류 세포 분열

Lijuan He; Alexandra Sneider; Weitong Chen; Michelle Karl; Vishnu Prasath; Pei-Hsun Wu; Gunnar Mattson; Denis Wirtz

doi:10.3791/56364

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방법 논문

양적 Confocal 반사 현미경을 통해 3D 매트릭스에 포유류 세포 분열

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DOI:

10.3791/56364

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2017년 11월 29일

Lijuan He^*¹^,² , Alexandra Sneider^*¹ , Weitong Chen¹ , Michelle Karl¹ , Vishnu Prasath³ , Pei-Hsun Wu¹^,² , Gunnar Mattson³ , Denis Wirtz¹^,²^,⁴

¹Department of Chemical and Biomolecular Engineering, Johns Hopkins University, ²Johns Hopkins Physical Sciences - Oncology Center, Johns Hopkins University, ³Department of Biomedical Engineering, Johns Hopkins University, ⁴Departments of Oncology and Pathology and Sidney Kimmel Comprehensive Cancer Center, Johns Hopkins University School of Medicine

^* These authors contributed equally

이 논문에서

요약

이 프로토콜은 효율적으로 세포 분열의 동기화를 통합 하 여 3D 콜라겐 매트릭스에 포유류 세포 분열을 연구 부문 이벤트 라이브 셀 이미징 기법, 시간 해결 confocal 반사 현미경을 사용 하 여 3D 매트릭스에서의 모니터링 그리고 양적 이미징 분석입니다.

초록

어떻게 포유류의 세포 연구 규제는 3d 환경 크게 그것의 생리 적인 관련성 및 치료의 중요성에도 불구 하 고 미개척 남아. 탐험의 부족에 대 한 가능한 이유는 실험 제한 및 비효율적인 3D 문화에서의 세포 연구를 렌더링 하는 기술적 과제 이다. 여기는 포유류 세포 분열 및 세포-매트릭스 상호 작용 3D 콜라겐 매트릭스에 효율적으로 공부 하는 영상 기반 방법에 설명 합니다. 형광 H2B 표시 셀 티 미 딘 및 nocodazole 처리, 기계적인 동요-오프 기술에 의해 다음의 조합을 사용 하 여 동기화 됩니다. 동기화 된 셀 다음 3D 콜라겐 매트릭스에 포함 됩니다. 세포 분열은 라이브 셀 현미경을 사용 하 여 모니터링 됩니다. 변형 콜라겐 섬유의 세포 분열, 세포-매트릭스 상호 작용은, 전후 동안 모니터링할 수 있습니다 그리고 양적 confocal 반사 현미경을 사용 하 여 계량. 포유류 세포 분열 및 세포-매트릭스 순수 관련 3D 환경에서 상호 작용을 공부 하는 효율적이 고 일반적인 접근 방식을 제공 합니다. 이 방법은 정상 조직과 질병 개발의 분자 기초에 새로운 통찰력을 제공 뿐만 아니라 또한 새로운 진단 및 치료 접근의 디자인에 대 한 수 있습니다.

서론

세포 유사 분열의 규제 조직 및 장기 개발에 중요 한 역할 세포 인생에서 중요 한 이벤트입니다. 비정상적인 유사 분열은 자연 유전 변이, 인간의 노화 과정과 암¹^,²^,³^,^,⁴⁵의 진행에 연루 됩니다. 정상 세포와 비교 하는 종양 세포의 증식의 증가 속도 사실 셀 동작 종양의 종류 및 환자 중 에서도 상당히 이질적인에 불구 하 고 암의 특징 중 하나입니다. 유망한 임상 결과도 불구 하 고 일부 새로 개발 된 antimitotic 약물 임상 시험⁶^,⁷^,^,⁸⁹^,¹⁰ ^{에에서 효과가 표시 되지 않은}¹¹. 실험 및 전 임상 모델의 관련성 고려 될 수 있다. 많은....