Intraganglionic 주입에 대 한 요 추 느 루트 신경 절 (DRG)에 대 한 액세스를 제공 하는 돼지에서 laminotomy 하는 방법을 설명 합니다. 사출 진행 intraoperatively 그리고 조직학 수술 후 21 일까지 확인 모니터링 합니다. 이 프로토콜 DRG 주입 관련 된 미래의 전 임상 연구 사용 될 수 있습니다.
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이 논문에서
요약
초록
지 루트 신경 절 (DRG)는 머리 아래 모든 기본 감각 신경 세포를 포함 하는 해부학 잘 정의 된 구조. 이 사실은 만성 통증을 치료 하기 위한 새로운 치료제의 주입을 위해 DRG 매력적인 목표 합니다. 작은 동물 모델에서 laminectomy 각 DRG를 둘러싼 척추 뼈의 외과 제거를 포함 하기 때문에 DRG 주입을 용이 하 게 사용 되었습니다. 큰 동물 종, 즉, 돼지에에서 요 추 DRG의 intraganglionic 주입에 대 한 기술을 설명합니다. Laminotomy는 DRG 표준 신경외과, 악기, 기술과 재료를 사용 하 여 직접 액세스할 수 있도록 수행 됩니다. Laminectomy 통해 더 광범위 한 뼈 제거와 비교, 우리가 충분 한 DRG 액세스를 달성 하는 동안 척추 해부학을 보존 하기 위해 laminotomy를 구현 합니다. DRG 주입의 자가 진행 비 독성 염료를 사용 하 여 모니터링 됩니다. 수술 당일 21 안락사, 다음 주입의 성공 조직학의 4', 6-diamidino-2-phenylindole (DAPI) intraganglionic 배포에 대 한에 의해 결정 됩니다. 우리는 프로토콜을 설명 하는 생물학으로 비활성 솔루션을 주입. 이 방법 적용된 미래에 전 임상 연구 대상 DRG 치료 솔루션을 수 있습니다. 우리의 방법론은 큰 동물성 종에 intraganglionic 작은 동물 패러다임의 translatability를 테스트 용이 해야. 또한,이 프로토콜은 그 돼지에서 DRG 주입의 전 임상 연구를 계획에 대 한 핵심 자원으로 봉사 할지도 모른다.
서론
지 루트 신경 절 (DRG)은 척추 칼럼을 따라 위치한, 신경 해부학 개별 컬렉션. 각 DRG 특정 신체 영역에서 인코딩 및 주변 자극 중앙 신경 시스템 (CNS)를 릴레이 하는 기본 감각 뉴런을 포함 합니다. 예를 들어, 관절염의 통증에는 통증 수용 체는 관절에 대 한 위치 인식 유해 자극 때 시작 됩니다. 이 과정은 불린다 nociception. 유해 자극의 장기 인식 만성 통증 1이끌어 낸다.
만성 통증 한 목표 intraganglionic 주입 3등 DRG, 진통제의 대상된 배달에 대 한 유용한 방법을 개발 하는 전 임상 연구 2 의 빈번한 주제 이다. 그러나, DRG는 범위 내에서 보 니 척추 foramina 4의 거주 때문에 접근 하기 어려운. 몇몇 그룹은 성공적으로 설치류 5,6,7,8,,
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프로토콜
여기에서 설명한 모든 방법을 기관 동물 관리 및 사용 위원회 (IACUC)의 메이 요 클리닉에 의해 승인.
1. 경직의 필수 구성 요소 및 재현성
- 디자인의 사후 보장, 좋은 연구실 관행 항상에 있으며 어떤 동물 이전 IACUC (또는 유사한 위원회)에 의해 내부 승인을의 국가 기준에 따라 실험에 참여.
참고:이 프로토콜은 임상 충실 한 접근을 유지 하도록 설계 되었습니다. 따라서, 재료, 악기와 관련 된 기술 설명 패션 인 간에 있는 임상 기준에 동일 합니다. 예를 들어, 엄격한 무 균 기법을 따라 하 고 만료 된 재료는 사용 하지 마십시오. - 실험 설정에이 방법론의 재현성을 지원 하기 위해 내부 표준 운영 절차를 개발 하 고 돼지 품종, 체중, 성별, 그리고 별도 동료 사이 나이에 변화에 대 한 제어.
참고:이 프로토콜의 디자인 무게 38-53 kg. 돼지의 사용에 근거 했다
2. 수술 동물 관리
- 절차에 앞서 1 일 5mg/kg에서 주어진 예방 근육 (IM) ceftiofur, 관리.
- 빠른 고체 음식 동물 및 미용 치료, 즉 기름 목욕, 절차 이전 12 h에서 동물....
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결과
Injectate의 더 평가
DRG injectate의 성공적인 납품 DAPI 확산의 조직학 평가 의해 결정 됩니다. 기법 바늘 팁은 DRG의 3 차원 중심에 위치 한다. 따라서, 배달 DAPI 바늘 끝에 조직학 단면도에서 둘 다 (중앙 DRG 섹션) 근처 고 먼 (주변 DRG 섹션) 얼룩의 정도 평가 하 여 결정 됩니다. 그림 1A 및 그림 1B 한 DRG의 성공적인 주입을 나타냅니다. DAPI 얼룩 모두 중앙과 주변 DRG 실질 통해 균등 하 게 분산 되었다. 따라서, 성공적인 DRG 주입 DAPI 3 차원 DRG 아키텍처에 걸쳐 얼룩의 확산 확산에 의해 그림입니다. 최적의 주입 일관성 얼룩 그림 이다. 예를 들어, 최소한의 얼룩 (그림 1C) 또는 외부 변죽만 DRG 실질 (그림 1D
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토론
우리는 DRG 통해 laminotomy 및 건강 한 큰 동물성 종에 있는 intraganglionic 주입 수술 노출 하는 방법을 설명 하고자 특히, 돼지. 설치류, 유사한 방법 자세한 12 되어 있으며 기존의 pharmacologic 요원 8,10 및 바이러스 성 벡터 6,7,,912 DRG를 제공 하는 데 사용. 위의 작은 동물 연구에서 결과 유망 하 고 우리의 프로토콜 돼지에 이러한 사전 결과 번역 하는 다른 사람에 대 한 방법을 포장 됩니다 바랍니다. 건강 하 고 병에 걸린 동물에 위의 연구, 전 임상 연구에서 작은 동물의 유틸리티를.......
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공개 사항
없음; 저자는이 연구에 관련 된 충돌의 관심 있다.
감사의 글
연구 지원 Schulze 가족 재단 (A.S.B.)에 의해 수행 되었다.
....액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
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참고문헌
- Millan, M. J. The induction of pain: An integrative review. Prog Neurobiol. 57 (1), 1-164 (1999).
- Burma, N. E., Leduc-Pessah, H., Fan, C. Y., Trang, T. Animal models of chronic pain: Advances and challenges for clinical translation. J Neurosci Res. , (2016).
- Pleti....
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