성장과 재생산 꼬마 선 충 의 화학 물질의 효과 측정

요약

모델 동물, 꼬마 선 충, 화학 물질의 독성을 평가 하는 기본 프로토콜을 설명 합니다. 방법은 편리 하 고 다양 한 환경 오염 물질의 위험 평가 관해서는 뿐만 아니라 의약품의 개발에 유용 합니다.

초록

독물학 평가 기초 및 응용 생명과학 분야에서 살아있는 유기 체에 화학 물질의 효과 이해 결정적 이다. 라운드 비 포유류 땅 벌레, 꼬마 선 충, 독성 연구 편의 및 동물 윤리 문제 포유류 동물 시스템과 비교의 부족에 대 한 귀중 한 모델 생물 이다. 이 프로토콜에서 C. 선 충 에서 화학 물질의 독성 평가의 상세한 절차를 설명 합니다. 임상 항 암 약물, etoposide 인간의 topoisomerase II를 대상으로 하 고 인간 암 세포의 DNA 복제를 억제, 화학 테스트 모델로 선정 됐다. 나이-동기화 C. 선 충 알 디 메 틸 sulfoxide (DMSO) 또는 etoposide에 노출 됐다 고 다음 C. 선 충 의 성장 스테레오 현미경 관찰에 의해 4 일 동안 매일 모니터링 했습니다. C. 선 충 DMSO로 치료에서 계란의 총 수 고 또는 etoposide 또한 스테레오 현미경을 사용 하 여 계산 되었다. Etoposide 치료 성장과 C. 선 충의 번 식에 크게 영향을 받습니다. 비교 하 여 화학 물질의 다른 치료 기간을 가진 벌레에서 누워 계란의 총 수의 그것 수 있습니다 결정 C. 선 충 재생산에 화학 물질의 생식 독성은 가역 또는 돌이킬 수 없는. 이러한 프로토콜 모두는 다양 한 약물의 개발과 환경 유독의 위험 평가 대 한 도움이 될 수 있습니다.

서론

독성 평가의 영양 보충 식품, 약품과 cosmeceuticals, 개발 뿐만 아니라 다양 한 환경 독 소의 위험 평가 대 한 필수적입니다. 설치류 모델은 시스템 중 하나는 가장 인기 있는 vivo에서 실험이 독성 연구; 또는, C. 선 충 등 비 포유류 유기 체는 또한 널리 이용 된다. 비 포유류 독성 평가 모델 동물 윤리 문제 뿐만 아니라 그들의 편의 비용 효율성, 관리 용이성, 속도, 및 재현성^{1,2 고려 하는 유용성 때문에 도움이 됩니다. ,,34}.

C. 선 충, 토양에서 다양 한 기초 및 응용 생물학 및 화학 연구 모델 동물로 악용 되어 웜, 라운드. 그것은 긴 1 m m, 투명 한 선 충 류는 단순히에 고체 또는 액체 선 충 류 성장 미디어 (NGM) 세균성 긴장 대장균 OP50 먹이 유지. C. 선 충 은 짧은 라이프 사이클, 그리고 야생-타입 N2 C. 선 충 약 300 알을 낳는. 따라서, 그것은 쉽게 실....

프로토콜

참고: 전체 실험 20 ° c 낮은 먼지와 벌레와 세균 처리 하는 동안 오염 최소화 유지 깨끗 한 격리 된 실험실에서 수행 해야 합니다. 이 위해 실험 깨끗 한 벤치를 사용 하 여 알코올 램프의 불꽃에서 수행 해야 합니다.

1. C. 선 충 및 화학 시험에 대 한 계란 준비 유지 보수

1. 유지 선 충 C. N2 (브리스톨 그리고 var) 품고 NGM 한 접시에 20 ° C에서 대장균 OP50 라이브 ^{12 , 13}.
2. 준비 나이 동기화 계란 중 하나를 사용 하 여 표백 솔루션 치료 ⁵ 또는 시간 달걀 누워 방법 ^{6 , , 14 15}.
   참고: 전에 계란 준비, 코트와 etoposide 포함 NGM 플레이트 열 비활성화 대장균 OP50 아래 설명 된 대로. 열 비활성화 전자 대장균 OP50 대....

결과

Etoposide (h 24-96)의 치료는 크게 C. 선 충의 성장을 지체. 외피의 96 h 후 웜 etoposide 취급 차량 취급 웜 1.04 m m (그림 1) 성장 하는 동안 몸 길이 0.86 m m 성장 했다. 성장 지체도 분명히 스테레오 현미경 관찰 (그림 2)에서 관찰 되었다. 우리 보육의 72 h에 차량 처리 벌레에서 계란을 보고 시작. 다른 한편으로, 계란 96 h etoposide 치료 후 관찰 되었다. 이러한 데이터에서 우리가 추측 etoposide 치료 C. 선 충의 첫 번째 출생 시간 지연.

누워 계란의 지연 뿐만 아니라 etoposide 치료는 크게 웜 (그림 3.......

토론

이 문서에서는, 우리는 C. 선 충, 토양 선 충 류, toxicant 사례로 etoposide를 사용 하 여 화학 물질의 독성 평가 설명 합니다. 이 두 실험 조건 사용 했습니다. 첫 번째 세트에서 C. 선 충 etoposide 젊은 성인 단계에서 계란 접시 포함 하에 성장 했다 하 고 벌레 화학 물질 없이 정상적인 NGM 접시에 알 수 있었습니다. 두 번째 실험 세트에서 C. 선 충 전체 실험 기간 내내 etoposide와 지속적으로 치료 했다. 비교 하 여 두 실험 조건 사이 그 숫자의 우리 생식 독성 시험된 화합물의 가역 되었거나 돌이킬 수 없는 여부를 결정할 수 있습니다. Etoposide 크게 두 실험 조건 (그림 3)에서 누워 계란의 총 수를 감소. 이러한 데이터 암시는 초기 성장 단계 동안 etoposide의 전처리 생식 기관에 손상을 유발 하기에 충분 한, 포함 한 생식 세균 세포^.......

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
Agar	Affymetrix, 미국	10906
Caenorhabditis elegans N2	Caenorhabditis Genetics Center (CGC)		Wild type
Cholesterol	Sigma, USA	C3045
Dimethyl sulfoxide	Sigma, 미국	D2650
Escherichia coli OP50	Caenorhabditis Genetics Center (CGC)
Etoposide	Sigma, 미국	E1383
Image J software (ver 1.4)	Natinoal Institute of Health, 미국		https://imagej.nih.gov/ij/
현미경 카메라	Jenopitk, Progress Gryphax, 독일
Peptone	Merck, 미국	107213
35 × 10 mm 페트리 접시	SPL Life Sciences, 대한민국	10035
90 × 15mm 페트리 접시	SPL Life Sciences, 한국	10090
실체 현미경	니콘, 일본	SMZ800N
효모 추출물	Becton Dickinson, 미국	212750