선 충 꼬마 선 충-모델을 다양 한 비보에 호스트-미생물 상호작용 연구

요약

여기, 선물이 미생물 상호 작용을 공부 하는 다양 한 호스트 모델로 선 충 류 꼬마 선 충 .

초록

모델 호스트 꼬마 선 충 을 사용 하 여 미생물의 상호 작용을 공부 하는 방법을 설명 합니다. 미생물은 소장 질환에 대 한 기본 위치를 만드는 다이어트를 통해 소개 합니다. 선 충 장 구조상으로 그리고 기능적으로 포유류 창 모방 이며 투명 한 식민의 현미경 연구 의무가 만들기. 여기 우리가 병원 체 질병과 죽음을 발생할 수 있습니다 보여줍니다. 변경 된 독성을 나타내는 미생물 돌연변이 식별할 수 있습니다. 생물 스트레스를 보존된 타고 난 응답은 C. 선 충 호스트 타고 난 면역 상호 작용의 측면을 우수한 시스템. 우리는 듀얼 산화 효소 유전자에 있는 돌연변이와 호스트 반응성 산소 종 생성 수 없습니다 및 미생물 모욕을 저항할 수 없습니다 보여줍니다. 추가 제시 생존 분석 결과의 다양성 미생물 성장 억제제의 효과 연구에 사용할 수 있습니다 표시 하 여 설명 합니다. 이 분석 결과 또한 새로운 항진균 제의 개발에 대 한 대상으로 곰 팡이 독성 요소를 발견 하 고 더 호스트-미생물 상호작용을 폭로 하는 기회를 제공 사용할 수 있습니다. 이 분석 결과의 디자인 잘에 빌려준다 높은 처리량 전체 게놈 스크린을, 나중에 사용할 곳을 알아내는-보존 웜 수 하면 공부 비용 효과적이 고 매력적인 전체 동물 모델.

서론

C. 선 충 50 년 이상에 대 한 강력한 모델 생물으로 사용 되었습니다. 1960 년대, 남아 프리 카 공화국 생물학자 시드니 브 레너 선 충에서 세포 및 동물 생물학의 다양 한 측면을 연구 과학자의 긴 계보에 대 한 방법을 포장 신경 개발 공부 C. 선 충 의 사용을 개척. 크레이그 멜로 앤드류 불 그들의 RNAi 작업¹에 대 한, 로버트 Horvitz 및 기관 발달에 apoptosis^2,3,4, 그들의 작품에 대 한 존 Sulston 마틴 챌 노벨상 수 상자를 포함 하는이 계보 녹색 형광 단백질⁵에 그의 작품은. 이 모델 생물 전통적으로 지난 15 년 동안 분자 및 발달 생물학을 공부 하는 데 사용 되었습니다, 비록 연구원 C. 선 충 녹을 포함 하 여 다양 한 인간의 병원 균의 생물학 조사를 사용 하 여 시작 녹 농 균, 황색 포도상구균, 살 모 넬 라 enterica, Serratia marcescens

프로토콜

1. 선 충 류 성장 매체 (NGM)의 준비

1. 대 1 L 미디어의 결합 20 g 한 천, 2.5 g 유기 질소 소스 (예:, bacto 펩), 그리고 3 세대 2 L 플라스 크에 염화 나트륨. 메 마른 물 975 mL을 추가.
2. 추가 메 마른 저 어 바에서
   입니다. 15 분;에 대 한 자동 미디어 pourer, 고압 배관 및 미디어를 사용 하는 경우 미디어 해야 압력가 마로 소독에 대 한 더 이상 높은 볼륨 이루어집니다.
3. 저 어 접시에 미디어를 설정 하 고 시원한 수.
   1. 미디어 aseptically (약 60 ° C) 터치 따뜻한 되 면 추가 1 mL의 1 M MgSO ₄ ● H ₂ O, 1 mL의 1 M CaCl ₂, KPO ₄, 25 mL 및 에탄올에 0.5% 콜레스테롤의 1 mL.
   2. 붓고 미디어 (손으로 또는 자동 펌프) 층 류에서 35 m m x 10 m m 멸 균 페 트리 디쉬. 사용 하기 전에 1-2 일에 대 한 후드 건조 허용.
      참고: 접시는 오염을 방지 하기 위해 4 ° C에 저장 되어야 합니다.

결과

병 인 분석 결과 (그림 1) C. albicans 및 C. 선 충 을 사용 하 여 이전 우리의 실험실^17,18 및²⁰다른 연구소^19,의해 설명 하고있다. C. 선 충 C. albicans 셀 벌레에 의해 신속 하 게 섭취 하 고 느린 운동을 일으키는 창 자 루멘에 축적을 보여주는 C. albicans 독성 연구를 사용 하 여 적중이 시연 항문 변형 지역 (Dar) (그림 2A), (그림 2B) 외 음부의 붓기, 고 소장 (<.......

토론

우리가 설명 하는 C. albicans 에 일생 노출 C. 선 충 감염 및 생존 시 금 하는 방법 다른 병원 체를 테스트를 수정할 수 있습니다. 다른 세균 이나 곰 팡이의 액체 문화 만든 하 고 비슷한 방식으로 C. 선 충 을 먹이 수 있습니다. 또한, 직렬 감염 분석 될 수 있습니다 설명, 한 병원 체에 애벌레를 먼저 노출 하 고 다음 성인 기에 도달 후 별도 병원 체를 포함 하는 새로운 접시에 동물을 전송 하 여.

이 분석 결과 수행 하는 동안 그것은 타이밍에 주의 깊은 관심을 지불 하는 것이 중요입니다. 첫째, 분석 결과 대 한 알을 수확 하기 위해 계란 준비를 완료 하는 때 그것은 계란 표 백제에 노출 되는 시간의 양을 제한 하는 중요 한. 계란을 풀어 표 백제 솔루션에서 성인을 분해 하는 데 필요한 시간의 양은 다릅니다. 표 백제 솔루션을 관리, 직후 웜 솔루션 해 부 현미경 밀접 하 게 지켜 수 해야 합니다. 벌레의 약 .......

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
한천(과립, 세균 등급)	Apex BioResearch 제품	20-248
알루미늄 와이어(95% Pt, 32 게이지)	Genesee Scientific	59-1M32P
Axiovision Zeiss 도립 현미경	Axiovision Zeiss
Bacto-Peptone	Fisher BioReagants	BP1420-500
C. elegans strain Bli-3	Caenorhabditis Genetics Center	Bli-3(e767) CB767
염화칼슘	Fisher Scientific	BP51-250
콜레스테롤, 시그마 등급, 최소 99%	Sigma	C8667-25G
일회용 배양 튜브(20 x 150mm)	FIsherBrand	14-961-33
해부 현미경(NI-150 고강도 조명기)	Nikon Instrument Inc.
E. coli	Caenorhabditis Genetics Center	OP50
GraphPad Prism (Survival Curve Analysis Software)	GraphPad Software
LB Broth (Miller's)	Apex BioResearch Products	11-120
Magnesium Sulfate	Fisher	Scientific 10034-99-8
Medium Petri Dish (35 X 10 mm)	Falcon
353001 인산칼륨 일염기성	시그마	P0662-500G
염화나트륨	피셔 사이언티픽	BP358-1
인산나트륨	피셔 사이언티픽	BP332-500
야생형 C. 알비칸스 SC5314	ATCC	SC5314
야생형 C. 예쁜꼬마선충	Caenorhabditis Genetics	Center N2