이 원고 조작 하 고 인간 면역 결핍 바이러스 1 형 감염에 대 한 강력한 접착제 및 항 바이러스 활동을 보여 주는 Griffithsin 수정 폴 리 유산 공동 glycolic acid () electrospun 섬유를 특성화 하는 절차를 설명 합니다. 생체 외에서. 합성 하는 데 사용 하는 방법 표면 수정, 결과 형태, 활용, 특성 및 표면 수정 섬유에서 Griffithsin의 탈 착에 설명 되어 있습니다.
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방법 논문
감염 성병 제조 및 방지를 위한 Griffithsin 수정 섬유 장비의 특성
* These authors contributed equally
이 논문에서
요약
초록
Electrospun 섬유 (EFs) 널리 다양 한 치료 애플 리 케이 션;에 사용 되었습니다. 그러나, 그들은 단지 최근에 적용 되었을으로 방지 하 고 치료 성적으로 기술 전송 감염 (STIs). 또한, 많은 EF 기술 biofunctionality를 얻으며 표면을 활용 하 여 상대적인 활성 에이전트를 캡슐화에 초점. 여기 조작 및 poly(lactic-co-glycolic) 산 (PLGA) electrospun 섬유, 강력한 항 바이러스 lectin Griffithsin (GRFT)와 표면 수정 하는 방법을 설명 합니다. PLGA는 약물 전달의 뛰어난 화학 및 생체 특성 때문에 널리 사용 된는 FDA 승인 중합체 이다. GRFT 자연, 강력한, 및 안전 lectin 인간 면역 결핍 바이러스 1 (hiv-1) 형을 포함 하는 수많은 바이러스에 대 한 광범위 한 활동을 소유 하는. 결합 될 때, GRFT 수정 섬유 체 외에에이즈-1의 강력한 비활성화를 증명 하고있다. 이 원고에서는 조작 하 고 GRFT 수정 EFs를 특성화 하는 방법을 설명 합니다. 첫째, PLGA 섬유 비 계를 만들 electrospun입니다. 섬유는 이후에 표면 수정 1을 사용 하 여 GRFT-에틸-3-(3-dimethylaminopropyl) carbodiimide (EDC) 및 N-hydroxysuccinimide (NHS) 화학. 스캐닝 전자 현미경 (SEM) 크기와 표면 수정 공식의 형태를 평가 하기 위해 사용 되었다. 또한, gp120 또는 조류 (하)-기반된 ELISA, 활용 된 GRFT GRFT 섬유 표면에서 탈 착의 양을 계량 하 사용할 수 있습니다. 이 프로토콜은 섬유를 서로 다른 단백질의 다양 한 표면 수정 조작 하 더 광범위 하 게 적용할 수 있습니다.
서론
국 소 전달 플랫폼으로 EFs 사용 하 여 성병을 줄일 가능성이 있다. 현재, 36 백만 이상의 사람들이 HIV에 보고 2015 혼자1,2의 이상 2 백만 새로운 케이스와 함께 살고 있다. 또한, 포진 심 플렉스 바이러스 2 (HSV-2) 감염의 영향을 수백 전세계 사람들의 수백만 입력 하 고 2-5 배3HIV의 수집을 향상을 보여줘 왔다. 이 관계 HSV-2 감염 및 HIV 취득으로 인해 여러 성병에 대 한 동시 보호를 제공 하는 새로운 활성 에이전트 개발에 상당한 관심이입니다. 또한, 이러한 항 바이러스 대리인의 납품을 개선 하기 위해 새로운 차량의 개발 추가 보호 및 치료 효능을 향상 시키기 위해 잠재력을 제공 합니다. 이 목표를 향해 EFs V-1와 h s V-2 감염의 보급을 줄이기 위해 새로운 배달 플랫폼으로 조사 되어 있다.
지난 2 년 동안 EFs는 약물 전달 및 조직 공학4의 분야에서 광범위 하 게 사용 되어 왔습니다. 종종, 생체 고분자는 쉽게 치료 응용 프로그램을 변환할 선택 됩니다. 고분자 EFs를 조작 하 선택 된 폴리머는 유기 용....
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프로토콜
1. 준비 및 제조 Electrospun 섬유 발판의
주의: 화학 증기 두건 .에 용 매 또는 폴리머 솔루션으로 모든 작업을 수행 해야 프로토콜을 시작 하기 전에 각 시 약의 물질 안전 데이터 시트를 참조.
- Electrospin 3 mL 15 %w / w PLGA 폴리머 솔루션에 무게의 50: 50 폴 리 (유산 공동 glycolic 산) 720 mg (PLGA; 0.55 0.75 dL/g, 31-57 kDa) 10 mL 섬광 유리병에. 솔루션의 볼륨은 현재 연구에 사용 되는 일반적인 일괄 처리 크기에 따라.
참고: 폴리머 질량 주어진된 양의 용 매를 추가 하는 폴리머를 분해 하는 데 사용 하는 용 매에의 밀도 확인 하 여 계산 되어야 합니다. 용 매 Hexafluoro-2-프로 판 올 (HFIP)의 조밀도 1.59 g/mL 이다. 따라서, 용 매, 무게 4.8 g (3.0 x 1.59 g/mL)는 3.0 mL HFIP 필요의 볼륨에 따라. 15 %w / w HFIP PLGA의 일부분, 720 mg PLGA 3.0 mL HFIP (0.15 x 4800 mg = 720 mg)에 추가 되어야 합니다. %W / v, 보다는 오히려 %w / w 폴리머/솔루션을 사용 하 여의 장점은이 마지막 해결책의 ....
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결과
섬유 형태 바이러스에 대 한 보호를 제공 하는 표면 수정 EFs의 기능에 상당한 효과가 있다. 전기는 편리 하 고 간단한 절차, 최적화 되지 않은 폴리머 제형 불규칙 한 섬유 형태 (그림 5B-C) 발생할 수 있습니다. 파란색 또는 비정 질 매트 같은 형태학의 대형 귀착되는 전기 조건에서 변경 종종 용 폴리머 호환성, 낮은 폴리머 점도, 흐름 속도, 또는 다른 전기 조건에 의해 발생 합니다. 섬유 구조에 결과 유사 약물 통합 섬유 또는 불일치 활용 효능, 물리적 또는 화학적으로 바이러스 침투를 방해 하는 섬유 수 변경에 대 한 다른 릴리스 프로필에 발생할 수 있습니다. 설명된 전기 조건을 사용 하 여 날조 PLGA EFs 1.5와 2.8 µ m (그림 6) 사이 배열 하는 직경 고유 섬유 형태학 발생 한다. 섬유 형태 및 직경을 확인 .......
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토론
그들의 다공성 구조와 큰 표면 영역, EFs 헬스케어, 치료 배달 차량으로 봉사를 포함 하는 중 하나는 다양 한 응용 프로그램을 발견 했다. 약물 및 다른 활성 에이전트 통합할 수 있습니다 EFs에서 가변 배달 동안 생물 의약품 및 화학 ligands 셀-특정 대상52 또는 바이오 센 싱53섬유 표면에 활용 될 수 있습니다. 여기 GRFT의 제조 표면-수정 PLGA EFs, HIV 감염을 방지 하기 위해 배달 비 계 설명. GRFT-EFs 다른 섬유 생산 방법49,53상대적인 낮은 비용과 높은 생산 비율의 혜택을 제공, 전기에 의해 합성 되었다.
프로토콜의 중요 한 단계
EFs의 형성은 비판적으로 특히 솔루션 또는 용 매 점도
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공개 사항
저자는 공개 없다.
감사의 글
우리는이 연구 자금에 대 한 우수성에 대 한 유태인 유산 기금에 감사입니다. 우리 닥터 스튜어트 윌리엄스 II 전기 시스템의 사용을 아낌없이 제공 감사. 우리는 또한 Griffithsin를 제공에 대 한 박사 케네스 팔 머 감사 합니다. 우리는 또한 박사 노부유키 마토 바와 그의 연구소 GRFT ELISA에서 작동 하는 훈련에 대 한 감사 합니다.
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재료
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| 1,1,1,3,3,3-Hexafluoro-2-propanol (HFIP) | Thermo Scientific | ||
| 블런트 디스펜싱 바늘 18g X 1/2 | Brico 의료 용품 | BN1815 | |
| BD 3mL 주사기 Luer-lok 팁 | VWR | 309657 | |
| 파라필름 (플라스틱 필름) | Sigma Aldrich | P7793 | |
| 2-(N-Morpholino)ethanesulfonic acid (MES Buffer) | Sigma Aldrich | M3671 | |
| 염화나트륨 | 시그마 알드리치 | S7653 | |
| 염화칼 | 시그마 알드리치 | P9333 | |
| 인산나트륨 이염기성 | 시그마 알드리치 | S7907 | |
| 인산칼륨 단염기 | 시그마 알드리치 | P0662 | |
| 하이드록시숙신이미드 (NHS) | Thermo Scientific | 24500 | |
| 1-에틸-3-(3-디메틸아미노프로필)카르보디이미드 염산염(EDC) | Thermo Scientific | 22980 | |
| 2-Mercaptoethanol | Fisher | BP176 | |
| Griffithsin (GRFT) | Kentucky Bioprocessing | NA | 맞춤 제작, 제품 번호 없음 |
| Dimethyl Sulfoxide | Milipore | 317275 | |
| 폴리에틸렌 글리콜 소르비탄 모노라우레이트 (Polysorbate, Tween 20) | Sigma Aldrich | P9416 | |
| Tris EDTA 버퍼 | Sigma Aldrich | 93283 | |
| 플랫-바텀 이뮤노 비멸균 96-웰 플레이트 | Thermo Scientific | 3355 | |
| 인플루엔자 헤마글루티닌 (HA) | 켄터키 바이오프로세싱 | NA | 맞춤형, 제품 번호 없음 |
| Goat Anti-GRFT (1차 항체) | Kentucky Bioprocessing | NA | 맞춤형, 제품 번호 없음 |
| 토끼 안티 염소 IgG-HRP (2차 항체) | Santa Cruz | 2056 | |
| Sure Blue TMB Microwell Peroxidase Substrate | KPL | 52-00-00 |
참고문헌
- Gottlieb, S. L., et al. Toward global prevention of sexually transmitted infections (STIs): the need for STI vaccines. Vaccine. 32, 1527-1535 (2014).
- Fact sheet November 2016. , Available from: http://www.unaids.org/en/resources/fact-sheet (2016).
- Freeman, E. E., et al.
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