브리 parahaemolyticus 감지 polylactic 산 안정, 금 나노 입자 수정, 모티브로 탄소 전극으로 구성 된 전기 화학 DNA 바이오 센서의 개발에 대 한 프로토콜 제공 됩니다.
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브리 parahaemolyticus 감지 polylactic 산 안정, 금 나노 입자 수정, 모티브로 탄소 전극으로 구성 된 전기 화학 DNA 바이오 센서의 개발에 대 한 프로토콜 제공 됩니다.
(대 parahaemolyticus) 브리 parahaemolyticus 크게 인간의 사망률과 질병 률의 속도 영향을 미치는 보건 문제의 큰 비율에 세계적으로, 기여 일반적인 foodborne 병원 체 이다. 문화 기반 방법, 면역학 분석 실험, 분자 기반 방법 등 parahaemolyticus 대 의 검출을 위한 일반적인 방법 복잡 한 샘플 처리를 요구 하 고, 지루한, 시간과 비용이 많이 드는 있습니다. 최근, 바이오 센서는 빠른 검색, 비용 효율성, 실용성의 장점으로 유망 하 고 포괄적인 탐지 방법으로 입증 했습니다. 이 연구는 높은 선택도 및 DNA 교 잡의 원리를 사용 하 여 감도 parahaemolyticus 대 감지 하는 빠른 방법 개발에 중점을 둡니다. 작업, 합성된 polylactic 산 안정 금 나노 입자 (PLA-AuNPs)의 x 선 회절 (XRD), 자외선 보이는 분광학 (UV-Vi), 전송 전자 현미경 (TEM), 필드-방출을 사용 하 여 달성 되었다 스캐닝 전자 현미경 검사 법 (FESEM), 그리고 주기적 Voltammetry (CV). 우리는 또한 추가 안정성, 감도, 및 PLA AuNPs의 재현성의 테스트 실시. 우리는 PLA AuNPs 수성 해결책에서 안정 된 나노 입자의 소리 구조 형성을 발견. 우리는 또한 감도 작은 충전 전송 저항 (Rct) 값과 활성 표면적 (0.41 c m2)의 증가 결과로 향상 된 관찰. 우리의 DNA 바이오 센서의 개발은 PLA AuNPs와 redox 표시기로 메 틸 렌 블루 (MB)를 사용 하 여 모티브로 탄소 전극 (SPCE)의 수정에 근거 했다. 우리는 차동 펄스 voltammetry (DPV)에 의해 동원 정지 및 교 잡 이벤트를 평가. 보완, 보완, 우리 그를 발견 하 고 일치 하지 않는 oligonucleotides 특별히 조작된 바이오 센서에 의해 수훈이 있었다. 그것은 또한 다양 한 식품을 매개로 병원 체에 대 한 분 연구 하 고 신선한 cockles parahaemolyticus 대 의 식별에 안정적으로 민감한 탐지를 보여주었다.
최근 몇 년 동안에서 공공 및 과학적인 논쟁의 주요 주제, 식중독은 주로 3 에이전트와 관련 된: 미생물1, 화학2및 기생충3. 오염 된 음식 인간, 약한 면역 체계, 노인, 임신 여성, 아기, 그리고 어린 아이4에 그들의 더 높은 위험 그룹에서 특히 심각한 건강 결과 일으킬 수 있습니다. 아프리카, 아시아 및 라틴 아메리카에서 5 세 미만의 어린이에서 매년 발생 하는 급성 설사의 경우에 이상 백만, 식중독 주요 글로벌 질병5,6 와 세계 보건 기구 설립 7가장 중요 한 기여자 서의 미생물 비 브리 오 parahaemolyticus 가장 널리 인정 된 악성 종자 들 눈에 띈다. 그램 음성 박테리아는 높은 소금 환경에서 활성화 되 고 부적당 하 게 요리, 분실 또는 원시 해양에 먹을 때 심각한 인간의 위장염은 일반적으로 해안, 강어귀, 및 해양 환경8에서 발견, 제품9. 또한, ....
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참고: 모든는 화학과 생 화 확 적인 시 약 사용 될 분석 등급의 고 추가 정화 없이 사용. 살 균 이온된 수를 사용 하 여 모든 솔루션을 준비 합니다. 오토 클레이 브 살 균 전에 모든 유리.
주의: 사용 하십시오 모든 적절 한 안전 관행 공학적 통제 (연기 후드, 글러브)의 사용을 포함 하 여 실험실 활동을 수행할 때 및 개인 보호 장비 (안전 안경, 장갑, 실험실 외 투, 전체 길이 바지, 폐쇄 발가락 신발)입니다.
1. 제조 및 특성의 수정 전극 PLA AuNPs를 사용 하 여
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AuNPs의 형성 나트륨 시트르산 존재와 용액의 색깔에서 변화를 통해 밝혀졌다. 이 깊은 루비 레드 빛 노란색에서 변경 하려면 색상을 발생 합니다. PLA AuNPs의 세대 표면 플라스몬 공명 (SPR) 피크의 성장 약 540에서 발견 됐다 대 한 UV 스펙트럼 (그림 1)에서 확인 되었다 nm. 형성 및 PLA AuNPs의 존재는 입자 크기37에 따라 500-600 nm 파장 범위에 표시 했다. AuNPs 및 PLA AuNPs의 XRD 패턴은 그림 2에 표시 됩니다. 모든 crystallite 봉우리 31.7, 38.2, 44.4, 64.7, 77.7 °의 2θ에서 관찰 되었다. 그들은 (100) (111) (200) (220)에 기인 했다 입방 FCC (얼굴 중심 입방) 금 (311) 결정학 비행기 (금속) nanost.......
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전기 화학 바이오 센서의이 종류의 성공적인 개발을 위한 프레임 워크의 중요 한 단계는 핵 산 (DNA 여기); 변환기에 대 한 적절 한 생물학적 인식 요소 선택 트랜스듀서;의 감지 레이어를 생성 하기 위한 화학 접근 변환 자료; 최적화 DNA 동원 정지 및 교 잡; 그리고 실제 예제를 사용 하 여 개발 된 바이오 센서의 유효성 검사.
민감하고 선택적 전기 화학 DNA 바이오 센서의 성공적인 개발을 코어, immobilization와 교 잡 조건의 최적화입니다. 이 작품에서는, 우리는 복잡 한 산화로 MB를 사용. MB-DNA 상호 작용의 다양 한 원리는: (i) ssDNA와 dsDNA;의 인산 염 등뼈 음이온 혐의로 MB 양이온 책임의 정전기 상호 작용에 의해 (ii)에 의해 번갈아 dsDNA;에 G-C 기본 쌍 사이의 MB의 성공적인 삽입을 통해 MB 윤 (iii)에 의해 대상 ssDNA의 끝에 공유 결합, 생성 낮은 레이블 밀도 (하나 또는 두 개의 메가바이트 분자 DNA 가.......
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저자는 공개 없다.
저자는 Universiti 푸 트 라 말레이시아의 지원을 하 고 싶습니다.
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| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| 아세트산 | Merck | 100056 | |
| Chloroform | Merck | 102445 | |
| Diaminoethane tetraacetic acid | Promega | E5134 | |
| 이염기성 인산나트륨 | Sigma-Aldrich | S9763 | |
| 디소듐 수소 인산 | Sigma-Aldrich | 255793 | |
| 에탄올 | Sigma-Aldrich | 16368 | |
| Gold(III) chloride trihydrate | Sigma-Aldrich | 520918 | |
| Hydrochloric acid | Merck | 100317 | |
| Methylene blue | Sigma-Aldrich | M44907 | |
| Monobasic sodium phosphate, monohydrate | Sigma-Aldrich | S3522 | |
| Phosphate-buffered Saline | Sigma-Aldrich | P5119 | |
| 폴리(젖산) 수지, 상업용 4042D | NatureWorks | 4042D | |
| 염화칼 | R& M Chemicals | 59435 | |
| 인산이수소 | 시그마-알드리치 | P9791 | |
| 헥사시아노페레이트 칼륨 III | R& M 화학 물질 | 208019 | |
| 아세트산 나트륨 무수 염 | 시그마 -알드리치 | S2889 | |
| 염화 | 나트륨 시그마 알드리치 | S9888 | |
| 구연산 트리소듐 | 시그마-알드리치 | S1804 | |
| 트리스 (하이드 록시 메틸) 아미노 메탄 | 피셔 사이언티픽 | T395-100 | |
| 트리스 베이스 | 피셔 사이언티픽 | BP152-500 | |
| 이중 염료가 포함된 2X PCR 마스터 믹스 | Norgen Biotek | 28240 | |
| 아가로스 젤 | Merck | 101236 | |
| Bolton Agar | Merck | 100079 | |
| Bolton Broth | Merck | 100079 | |
| CHROMagar Vibrio | CHROMagar | VB910 | |
| dNTP | Promega | U1511 | |
| 뉴클레아제가 없는 물 | Thermo Scientific | R0581 | |
| Eosin 메틸렌 블루 한천 | Merck | 101347 | |
| GelRed | Biotium | 41001 | |
| 글리세롤 | Merck | 104092 | |
| Go Taq 버퍼 | Promega | M7911 | |
| 로딩 염료 100 bp DNA ladder | Promega | G2101 | |
| 로딩 염료 1kb DNA ladder | Promega | G5711 | |
| 염화 마그네슘 | Promega | 91176 | |
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