일시적인 수용 체 잠재력 Vanilloid 타입-1의 Ultrapotent 주 작동 근의 순수한 작은 섬유 신경 병 마우스 모델 수립

요약

이 연구는 resiniferatoxin (RTX)와 순수한 작은 섬유 신경 병의 실험 모델을 설정합니다. RTX의 독특한 복용량 (50 µ g/k g)은 환자 특성을 모방 하는 작은 섬유 신경 모델을 개발 하기 위한 최적의 neuropathic 고통을 기본 nociceptive 분자 의미를 조사 하는 것을 도울 수 있었다.

초록

당뇨병 mellitus (DM) 또는 화학요법 대리인의 신경 효과 발생 환자 변성 및 작은 직경 감각 뉴런, 작은 섬유 신경으로의 부상으로 인해 감각 장애를 개발할 수 있습니다. 작은 섬유 신경 병의 현재 동물 모델 모두 큰 및 작은-직경 감각 섬유에 영향을 하 고 따라서는 neuropathology 제대로 부상된 작은 직경 감각 섬유의 효과 평가 하기 위해 너무 복잡 한 만듭니다. 따라서, 그것은 순수한 작은 섬유 신경 적절 하 게 이러한 문제를 조사 하는 실험 모델을 개발 하는 데 필요한입니다. 이 프로토콜에 설명 합니다 특히 작은-직경 resiniferatoxin (RTX) 유형의 일시적인 수용 체 잠재력 vanilloid 1 (TRPV1) 단일 투여를 통해 ultrapotent 주 작동 근과 감각 신경에 영향을 미치는 작은 섬유 신경 병의 실험 모델을 RTX 신경의 복 주입이 하 라고. 병 적인 발현 및 intraepidermal 신경 섬유 (IENF) 변성, 특히에 상해를 포함 하 여 작은 섬유 신경 병을 가진 환자의 임상 특성을 모방 행동 이상이이 RTX 신경 병 작은 직경 뉴런, 그리고 열 hypoalgesia 및 기계적 용어인 유도. 이 프로토콜 테스트 RTX의 3 개의 복용량 (200, 50, 및 10 µ g/k g, 각각)와 결론을 RTX의 중요 한 복용량 (50 µ g/k g)는 전형적인 작은 섬유 신경 병 발현의 개발에 필요한 고 수정된 immunostaining 절차를 준비 IENF 변성 및 신경 소마 상해 조사. 수정된 절차는 빠르고, 체계적, 경제. Neuropathic 고통의 행동 평가 작은-직경 감각 신경의 기능을 중요 합니다. 실험적인 설치류에 기계적 임계값의 평가 특히 도전 그리고 설치류에 평가의이 유형에 적합 한 사용자 지정된 금속 메쉬가이 프로토콜에 설명 합니다. 요약 하자면, RTX 신경 분자와 개입 neuropathic 통증 치료제의 개발에 대 한 기본 평가를 쉽게 설립 하 고 새로운 실험 모델입니다.

서론

Neuropathic 고통, IENFs의 변성에 의해 분명 하다를 포함 하는 작은 섬유 신경 병은 다양 한 화학요법 에이전트^1,2,^{의 neurotoxic 효력 결과로 및 DM, 같은 조건에서에서 일반적 이다 3,,45}. IENFs 지 루트 신경 절 (DRG)에 있는 작은 직경의 주변 단말기 이며 IENF 변성⁶의 경우에 동시에 영향을 받습니다. 예를 들어 신경 somata의 변경 된 업스트림 유전자 녹음 방송은 활성화 녹음 방송 요인 3 (ATF3)^6,7의 upregulation에 의해 증명 되었습니다. 또한, 피부 생 검으로 IENFs 신경 분포의 평가 작은 섬유 신경^5,,89의 진단에 유....

프로토콜

설명 하는 모든 절차는 실험실 동물³⁰에 대 한 윤리 지침에 따라 그리고 프로토콜 동물 위원회의 가오슝 의학 대학, 가오슝, 대만 의해 승인 되었습니다.

1입니다. 설립 RTX 신경의

주의: RTX은 신경 하 고 위험한. 접촉, 그것은 상부 호흡기, 점 막, 눈 자극 역할. 흡입을 방지 하 고 RTX 준비 하는 동안 실험실 안경, 코트를 착용. 충분 한 피부 접촉 또는 처리 후 물으로 씻어.

1. 트윈 80 및 절대 에탄올 (각 용 매에 대 한 100 µ L)의 동등한 양의 혼합물의 200 µ L를 RTX 분말의 1 밀리 그램을 추가 합니다.
2. 약 수 RTX 솔루션 (12 µ L/유리병) 최대 3 개월 동안-20 ° C에서 저장. 이 구성 RTX 주식; 만료에 나머지 RTX 솔루션을 삭제 합니다.
3. RTX 주식 600 µ L의 최종 볼륨을 일반적인 염 분을 희석. RTX 솔루션의 최종 농도 0.01%, 10 µ L 차량 솔루션에서 1 µ g RTX와 같은 이어야 한다.
4. 8 주 오래 된 성인 남성 ICR 마우스 (35-40 g)를 사용 하 여 실험 동물로 RTX....

결과

이 프로토콜 RTX 신경 장 해, 특히 IENF 변성, 감각 장애 (그림 2)와 관련 된 포함 하는 작은-직경 신경에 영향을 미치는의 소설 마우스 모델을 설명 합니다. 여기에 설명 된 프로토콜에 따라 동물 전시 열 hypoalgesia와 D7 게시물 RTX 주사 기계 용어인. 이 작은 섬유 신경 모델, RTX의 3 개의 복용량을 설정 하려면: 200, 50, 및 10 µ g/k g i.p. 경로 의해 관리 되었다. RTX 복용량 (50 µ g/k g)이 중요 한 것으로 간주 됐다 고 예비 연구는 높은 복용량 RTX (200 µ g/k g) 발생 높은 마우스 치 사 율 (그림 3).

토론

병원에서 작은 섬유 신경 병의 효과적 치료는 기능 복구 및 환자의 삶의 질 증진을 위한 필요 합니다. 현재, 거기에 작은 직경 신경 상해 기본 분자 메커니즘의 포괄적인 이해의 부족으로 인해 작은 섬유 신경와 관련 된 감각 장애를 대상으로 치료 가이드의 부족이 이다. 신경의 이전 모델 일반적으로 영향을 모두 큰 및 작은-직경 감각 신경; 예를 들어, 화학요법 유도 신경^12,,3233 및 기계 유도 신경^34,35의 모델. 따라서, 모터 약점 및 큰 직경 감각 신경 손상의 기여 수 제외할 수 없습니다 완전히 이러한 신경 모델의 행동 테스트. 현재 프로토콜 IENFs 변성의 병 적인 기능 증거를 제공 하 여 작은 직경 감각 신경에만 영향을 마우스에 작은 섬유 신경의 .......

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
Chemical reagent
Resiniferatoxin	Sigma	R8756
Tween 80	Sigma	P1754
3,3'-diaminobenzidine	Sigma	D8001
avidin-biotin complex	Vector	Vector PK-6100
Name	Company	카탈로그 번호	코멘트
>Primary Antisera
Peripherin	Chemicon	MAB-1527
ATF3	Santa Cruz	SC-188
PGP9.5	UltraClone	RA95101
< strong>Name	Company	카탈로그 번호	Comments
Secondary Antisera
Biotinylated goat anti-rabbit IgG	Vector	BA-1000
Texas Red-conjugated goat anti-mouse	Jackson ImmunoResearch	115-075-146
이소티오시아네이트(FITC)-활용 당나귀 항토끼	잭슨 면역연구	711-095-152
Name	Company	카탈로그 번호	Comments
Equipment
Hot plate	IITC	모델 39
폰 프레이 필라멘트	Somedic Sales AB	10-600-0001
Name	Company	카탈로그 번호	Comments
Material
Shandon 커버 플레이트	Thermo 과학	72110017
슬라이드 랙	Thermo scientific	73310017