이 콘텐츠를 보려면 JoVE 구독이 필요합니다. 로그인하거나 오늘 무료 평가판을 시작하세요.

방법 논문

성인 남성 마우스 transurethral 주입 절차

17.6K 조회수

⸱

DOI:

10.3791/56663

⸱

2017년 11월 2일

 ,  ,  , 
1Division of Urology, Department of Surgery, University of Colorado School of Medicine, 2Pediatric Urology, Children's Hospital Colorado

* These authors contributed equally

이 논문에서

요약

Transurethral 점 도전 절차 이며 문학에서 잘 설명 되어 있다. 이 원고의 목적은 transurethral 방광 및/또는 성인 남성 생쥐에서 전립선으로 활성 물질과 액체의 intravesical 전달 카 테 터 삽입에 대 한 기술을 설명 하는 것입니다.

초록

Transurethral 점 방광 pathologies의 동물 모델을 유도 하거나 평가 방광에 로컬 활성 성분 (예를 들어, 약물, 화학 물질, 박테리아 및 바이러스)와 다른 솔루션을 제공 하 고 사용할 수 있는 intravesical 치료의 효과입니다. 더 낮은 요로 (LUT) pathologies의 설치류 모델 가장 여성 요도 통해 물질의 intravesical 기지의 용이성을 인해 여성 쥐에 유도 됩니다. 그러나, 여성 및 남성 LUT 사이 해 부 차이 남성 마우스에서 transurethral 점 간주 되었습니다 매우 어려운 절차 그리고 그것 이전 설명 하지는. 이 원고는 남성 마우스의 요도에 후속 삽입을 위한 폴 리 에틸렌 (PE) 관을 준비 하는 방법에 대 한 자세한 설명을 제공 합니다. 또한, 우리 PE 튜브 접종의 원하는 위치에 따라 사용할 수 이상적인 유형의 토론. 또한, 우리 포인트 포인트 요도에 부상을 방지 하 고 원하는 위치에는 솔루션의 제공을 보장 하는 성공적인 transurethral 문제에 대 한 동물을 준비 하는 방법을 설명 합니다. 절차는 축소는 포 피와 귀 두 요도 도관의 개통을 표시 하 여 시작 됩니다. 다음, 귀 두는 음와 PE 튜브 안정 무딘 분쇄 비 집게에 의해 파악 된다. PE 튜브 처음 동물의 시체를 병렬 요도 도관 삽입 후 각도 요도의 자연 곡률을 따라 그것을 책략을 카 테 터를 기울이기에 의해 조정 됩니다. 이 기술은 방광 pathologies의 유도 murine 모델 하는 데 사용 될 수 있습니다 또는 남성 쥐에서 intravesical 치료의 효과 평가.

서론

Transurethral 문제 접근은 이전 연구에서로 사용 방법 중 하나 방광 병 리1,2,,34 의 설치류 모델을 만들 고 평가 하는 데 사용 될 수는 마우스에 로컬로 배달 된 치료의 효과입니다. 동물 모델은 인간의 병 리 정리 완전 수 없습니다, 비록 동물 연구에서 기본 메커니즘의 간 질 성 방광염/방광 통증 증후군, neurogenic 등 인간의 LUT 장애의 더 나은 이해 제공 방광염, 자가 면역 질환 방광염 및 전립선 염증5.

성인 남성 마우스에 수행 transurethral 주입 절차는 성인 여성 마우스6intravesical 점 보다 더 기술적으로 도전 합니다. 그것의 작은 직경 함께 남성 요도의 자연스럽 게 곡선된 해부학 어렵게 기술적으로 카 테 터의 transurethral 삽입을 수행 하. 따라서, 자세한 마우스 요로 감염6 및 LUT 염증7,,89,10,11 transurethral 유도 대 한 지침 , 12 , 13 , 14 , 방광에 삽입 된 카 테 터를 통해 15 만 여성 쥐에 대 한 이전 설명 했다. 이 원고는 비디오 클립, 이미지, 일러스트 등 남성 쥐에서 물질의 transurethral 문제에 대 한 기술에 대 한 단계별 설명을 제공을 목표로 한다. 변수는 성인 남성 마우스에 절차를 수행할 수 있습니다 transurethral 점 접종 이전 여성 마우스7 에서 설명 하 고 치십시오 녹음 같은 추가 기술을 병합 비슷합니다. visceromotor 응답 (VMR)16.

액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.

프로토콜

동물, 방법 및 마 취, 수술 후 치료의 기간을 포함 하 여 모든 절차는 수 의사와 함께 논의 되었고 기관 동물 관리 및 사용 위원회 (IACUC)에 의해 승인 된 제휴 기관입니다. 이 원고에서 모든 절차 15 주 된 C57BL/6 남성 쥐 8 수행한 및 프로토콜 승인 콜로라도의 대학에 IACUC에 의해 동물 보호 지침을 따릅니다.

1. 튜브 준비

참고:는 inoculum을 주입 하는 바늘 폴 리 에틸렌 (PE) 관 ( 그림 1A) 또는 작은 계기에 연결 된 (< 24 G) angiocatheter 사용된 (수 있습니다 그림 1G)입니다. angiocatheter 사용 하 여 70% 에탄올 (EtOH) 살 균 이외의 아무런 준비가 필요합니다. inoculum 얻은/주입/입금 요로는 물질 이다.입니다. 이 박테리아, 바이러스, 또는 화학 물질을 포함 하는 솔루션을 수 있습니다. 이것은 연구 프로토콜 및 미리 준비. 예를 들어 연구 더 낮은 요로 대장균 감염의 효과 평가 하는 것을 목표로, 경우 연구원 준비 해야 합니다 inoculum 포함 하는 더 낮은 요로 주사/주입 될 수 있는 박테리아.

  1. PE 튜브에 부착 된 바늘의 준비 간단 하 고 다음의 구성: 대상 기관 및 동물의 나이에 따라 PE 배관의 크기를 선택 하십시오. 12 주 미만 동물에 대 한 PE 10 튜브를 사용 하 여 (외부 직경 0.024 인치 이며 안쪽 직경 0.011 인치). PE 10 튜브는 inoculum 앞쪽 전립선 (AP) 및 정액 소포 (SV)의 (1) 기본 시드 또는 inoculum 젊은 나이의 12 주 보다 동물의 방광에서의 기본 (2)는 시드 적용할 수 있도록 제안 했다. 더 큰 직경의 크기 (외경 0.038 인치 및 0.023 인치 최대 내경) PE 50 사용할 수 있습니다 오래 된 동물의 방광에 inoculum의 기본 시드 PE 튜브.
  2. PE 튜브의 약 2.5 인치 컷.
  3. 바늘을 사용할 수 선택한 PE 직경에 맞는 것을 선택 합니다. 27 G 바늘 PE 10 튜브의 루멘으로 들어갈 수 있는 그리고 22 G 바늘 맞는 PE-50 튜브의 루멘.
  4. 준비 상용 기름 돌에 바늘의 날카로운 가장자리를 문 지르고 하 여 PE 튜브에 삽입 전에 바늘
      ( 그림 1A -B), 또는 상업적으로 사용할 수 있는 둔 기를 사용 하 여 바늘.
  5. PE 튜브의 루멘으로 무딘 바늘 ( 그림 1C)을 소개. 루멘의 중심에서 바늘 남아 함으로써 루멘 또는 틀린 루멘을 손상을 하지 마십시오. ( 그림 1D -E). PE 튜브 무딘 바늘의 삽입 하는 동안 손상 되 면 손상 된 끝 자르고 프로세스를 다시 시작.
  6. 장소 바늘 연결 된 PE 튜브 70 %EtOH 절차에 대 한 그것의 사용까지 살 균. 플러시 70 %EtOH 바늘-PE 튜브를 통해 루멘을 소독 하 고 거기에서 PE 튜브에서 누설은 바늘 삽입의 과정에서 손상. 누설이 있는 경우에, 삭제 바늘-PE 튜브.
    참고: PE 튜브의 팁 catheterization 이전 될 필요가 있다. 요도에 PE 튜브를 소개와 함께 문제를 방지 하려면 ( 그림 1 층) catheterization 직전 PE 튜브의 끝을 잘라 하는 것이 좋습니다. PE 튜브의 제안된 최소 길이 1.5 인치 바늘을 둘러싼 부분을 포함 하.

2. 도관 법 절차

  1. 마 취의 유도, 이전 마우스의 방광 비.
    1. 부드러운 압력을 적용 하 고 마우스의 더 낮은 복 부를 마사지. 이러한 훈련은 일반적으로 자발적인 voiding 이어질. 방광이 어떤 instilled inoculum 희석 또는 즉시 누설에 발생할 수 있습니다.
      참고: 추가 옵션 마우스에 빈 방광을 transurethral 주입 절차의 시작 전에 적어도 1 시간 정도 물의 동물을 박탈 하는. 물 부족 동물 프로토콜의 일환으로 교육 기관에 의해 승인을 받아야 한다.
  2. Isoflurane 흐름 (2%)와 마 취 기계를 사용 하 여 마 취를 유도 하는 것.
    1. 일단 동물 마 취는 따뜻한 난방 담요에 배치 하 고 연속 마 취의 유지 보수에 대 한 nosecone 안에 그것의 코를 가진 블루 패드와 함께 커버.
    2. 확인 동물 마 취 페달 반사 (발가락 핀치)을 선택 하 여.
  3. 페달 반사 결 석 되는 포 피 제거에 의해 진행.
    1. 보도 엄지 및 집게 손가락 한 손으로의 음모 지역 ( 그림 2A 및 2B), 엄지와 다른 손 (검지 손가락을 사용 하 여 땀 샘 성 기를 꺼내 그림 2C)입니다. 때이 올바르게, 포 피, 귀 두 남 근, 음 경 몸 노출 남아 있습니다. ( 그림 2D 그리고 그림 2F). 이 조직에 손상에서 발생 땀 샘 성 기를 꺼내 집게를 사용 하지 마십시오.
  4. 기름칠을 하는 카 테 터와 카 테 터의 삽입 전에 메 마른 외과 윤활제와 귀 두의 끝. 이 PE 튜브의 삽입을 용이 하 게 합니다.
    참고: 개별적으로 포장 된 사각형 하나의 큰 튜브 대신 외과 윤활제의 멸 균 상태를 유지 하기 위해 각 사용에 대 한 권장.
  5. 부드럽게 둔 집게를 사용 하 여 성 기의 끝을 잡고 고 부드럽게 여 요도 도관을 귀 두를 짠 다.
  6. 주사기 바늘 연결 된 PE 튜브 또는 PE 튜브 자체와 함께 누른 요도 도관을 통해 PE 튜브 삽입.
    참고: 삼각대 그립 주사기 바늘 연결 된 PE-튜브 또는 PE 튜브, 인덱스, 엄지와 중간 손가락을 사용 하 여 자체의 안정성에 대 한 좋습니다.
    참고: 도관 법의 경로 그림 3A와 그림 3B와 같이 성인 남성 마우스에 관해 선 몸과 귀 두 남 근에 의해 포위 하는 요도의 자연 곡률으로 인해 곡선 해야 합니다. Catheterized PE 튜브 도관 법 동안 저항을 만날 수 있습니다, 그리고 따라서, 대상 기관 더 PE 튜브 튜브 또는 도움말 사전 아래로 기울이기로 각도 조정 하 것이 좋습니다. 필요한 경우, PE 튜브 요도의 다양 한 예리한 회전을 통해 책략 수 있도록 약간 회전할 수 있습니다. 너무 많은 저항 때 튜브 철수 해야 하 고 최소한의 압력으로 다시 전진. PE 튜브를 당겨 완전히 밖으로 및 더 많은 윤 활을 사용 하 여 도움이 될 수 있습니다.
  7. PE 튜브 inoculum (5-200 µ L 볼륨 제안)의 원하는 볼륨을 주입 하 바늘 플런저를 밀어 원하는 기관에 도달 했습니다 일단은 inoculum의 기지를 수행.
    1. 오 줌 방광에는 inoculum의 기지 사전 PE 튜브의 약 0.75 인치까지 PE 튜브에 삽입 됩니다 ( 그림 3A).
      AP와 SV, 일반적으로, 일에 inoculum의 기지에 대 한 참고:전자 삽입 튜브 앞쪽 전립선으로 개통의 지점에 도달 하면 저항을 만난다. 위로 또는 아래로 튜브를 기울이기로 각도 조정 하 여 PE 튜브 미리 추가 PE 튜브의 약 1 인치까지 ( 그림 3B) 삽입.

3. Vivo에서 더 낮은 요로 신장 이미징

참고: vivo에서 화상 진 찰이이 원고에의 목적은: (1) inoculum;의 공간 지역화를 확인 하 고 (2) 하 inoculum의 역류 성 식도 염의 발병 률을 평가 하는 신장입니다. 이 마 취 또는 안락사 마우스 사용할 수 있습니다.

  1. 시각화 성인 남성 마우스의 더 낮은 요로, 방광, 전립선, 정액 소포 노출에 더 낮은 복 부 중간 개복 술 수행.
    1. 음모 뼈 바로 아래가 위를 사용 하 여 칼 과정에서에서 중간에 피부 incise.
    2. 피하 조직에서 피부 상승.
    3. Avascular 교육 알바는 중간에 위치를 식별 하 고 모든 장기 있는 복 막 구멍 입력이 incise.
    4. 파란 염료 또는 다른 적합 한 추적 에이전트의 시각화 하 여 공간 지역화를 확인.

액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.

결과

PE 50 튜브를 통해 파란 염료의 transurethral 점 각각 (그림 4A), 오 줌 방광 그리고 PE 10 SV와 AP (그림 4B)의 색에 튜브를 통해 염료의 주입 결과. 수행된 transurethral 주입 하면 신장에 inoculum의 인스턴트 역류 또는 하지 여부를 평가 하 고 신장 ureter 관찰 되었다 파란 염료 및 형광 염료 (그림 4A-B) 100 µ L의 주입에 의해 따라. PE 튜브와 두 개의 서로 다른 염료의 2 개의 다른 크기를 사용 하 여 주입 절차의 결과 ureters 또는 신장의 색.

액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.

토론

이 원고는 성인 남성 마우스 transurethral 주입 하는 방법을 자세하게에서 설명합니다. 차동 주 시드 지역 다른 직경의 PE 튜브를 사용 하 여 도달할 수 있습니다. PE-50 성공적으로 PE 10 AP와 SV (그림 3A-B)를 도달 하는 더 큰 직경 동안 방광 루멘을 도달 하기 위한 것이 좋습니다. PE 튜브 및 접종에 대 한 대상 장기의 크기의 선택, 이외에 얻은 inoculum의 볼륨 등 다른 요인 또한 역할 끝 위치와 솔루션의 배포에. 우리의 실험 입증 블루의 100 µ L의 그 transurethral 점 중 PE-10를 사용 하 여 염색 또는 PE 50 신장에 염료의 인스턴트 퇴조를 트리거하지 않습니다. 그러나, 신장에 소변의 역류 주입 후 기간 동안 발생할 수 있습니다 및 이전 성인 여성 쥐8에 표시 된 것 처럼 신장 감염 될 수 있습니다. 따라서, 신장의 조직학 평가 좋습니다 t...

액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.

공개 사항

저자는 공개 없다.

감사의 글

저자는 어떤 승인 필요가 없습니다.

액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.

재료

이 논문에 사용된 재료 목록
이름회사카탈로그 번호댓글
BD INTRAMEDIC 폴리에틸렌 튜빙 / PE 10BD Medical63019-004
BD INTRAMEDIC 폴리에틸렌 튜빙 / PE 50BD Medical63019-048
BD Insyte-N Autoguard / AngiocathBD Medical311411
에탄올 (EtOH)Fisher ScientificBP2818500
BD 바늘 전용 22 게이지 (G) 1 인치Becton Dickson
BD 바늘만 27 게이지 (G) 1/2 인치Becton Dickson305129
루어 스터브, 22 G X 0.5 인치 / 블런트 니들InstechLS22
루어 스텁, 27 G X 0.5 인치 / 블런트 니들인스텍LS27
6" 길이 x 2" 너비 x 1" 두께, 알루미늄 산화물 숫돌 / 오일 스톤Norton40204034
수술용 윤활제 멸균 정균 FolilpacSurgilube281020543
IsofluraneFluriso13985-528-60
SomnoSuite 저유량 마취 시스템Kent ScientificSS-01
해부 겸자, 곡선vwr82027-392
BD 1ml 주사기BD 의료309626
인도 잉크 솔루션., PBS 완충액 0.2%Alfa AesarJ61007
8~12주 된 수컷 C57B/6 MiceJackson Lab#000664
205155형

참고문헌

  1. Lee, S., Yang, G., Bushman, W. Prostatic inflammation induces urinary frequency in adult mice. PLoS One. 10 (2), e0116827(2015).
  2. Wong, L., Hutson, P. R., Bushman, W. Prostatic inflammation induces fibrosis in a mouse model of chronic bacterial infection. PLoS One. 9 (6), e100770(2014).
  3. Elkahwaji, J. E., Zhong, W., Hopkins, W. J., Bushman, W. Chronic bacterial infection and inflammation incite reactive hyperplasia in a mouse model of chronic prostatitis. Prostate. 67 (1), 14-21 (2007).
  4. Boehm, B. J., Colopy, S. A., Jerde, T. J., Loftus, C. J., Bushman, W. Acute bacterial inflammation of the mouse prostate. Prostate. 72 (3), 307-317 (2012).
  5. Bjorling, D. E., Wang, Z. Y., Bushman, W. Models of inflammation of the lower urinary tract. Neurourol Urodyn. 30 (5), 673-682 (2011).
  6. Thai, K. H., Thathireddy, A., Hsieh, M. H. Transurethral induction of mouse urinary tract infection. J Vis Exp. (42), (2010).
  7. Bjorling, D. E., Wang, Z. Y., Boldon, K., Bushman, W. Bacterial cystitis is accompanied by increased peripheral thermal sensitivity in mice. J Urol. 179 (2), 759-763 (2008).
  8. Hopkins, W. J., Gendron-Fitzpatrick, A., Balish, E., Uehling, D. T. Time course and host responses to Escherichia coli urinary tract infection in genetically distinct mouse strains. Infect Immun. 66 (6), 2798-2802 (1998).
  9. Dinis, P., Charrua, A., Avelino, A., Cruz, F. Intravesical resiniferatoxin decreases spinal c-fos expression and increases bladder volume to reflex micturition in rats with chronic inflamed urinary bladders. BJU Int. 94 (1), 153-157 (2004).
  10. Cayan, S., et al. Botulinum toxin type A may improve bladder function in a rat chemical cystitis model. Urol Res. 30 (6), 399-404 (2003).
  11. Jerde, T. J., Bjorling, D. E., Steinberg, H., Warner, T., Saban, R. Determination of mouse bladder inflammatory response to E. coli lipopolysaccharide. Urol Res. 28 (4), 269-273 (2000).
  12. Saban, M. R., et al. LPS-sensory peptide communication in experimental cystitis. Am J Physiol Renal Physiol. 282 (2), F202-F210 (2002).
  13. Schilling, J. D., Mulvey, M. A., Vincent, C. D., Lorenz, R. G., Hultgren, S. J. Bacterial invasion augments epithelial cytokine responses to Escherichia coli through a lipopolysaccharide-dependent mechanism. J Immunol. 166 (2), 1148-1155 (2001).
  14. Saban, M. R., et al. Discriminators of mouse bladder response to intravesical Bacillus Calmette-Guerin (BCG). BMC Immunol. 8, 6(2007).
  15. Bjorling, D. E., et al. Acute acrolein-induced cystitis in mice. BJU Int. 99 (6), 1523-1529 (2007).
  16. Sadler, K. E., Stratton, J. M., Kolber, B. J. Urinary bladder distention evoked visceromotor responses as a model for bladder pain in mice. J Vis Exp. (86), (2014).

액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.

재인쇄 및 허가

더 많은 논문 탐색

PE 튜빙요도 카테터 삽입방광 병리방광 내 투여전립선 타겟팅마취 동물멸균 윤활제조직학적 평가
성인 남성 마우스 transurethral 주입 절차
문의하기
도서관에 추천하기

개인정보 처리방침

이용 약관

정책

저작권 © 2026 MyJoVE Corporation. 모든 권리 보유.