방법 논문

심장 마비 후 기능 메모리 결과 평가 하기 위해 수정 된 T-Maze를 활용 하 여

DOI:

10.3791/56694

⸱

2018년 1월 5일

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Neurology, Louisiana State University Health Science Center, 2Center for Brain Health, Louisiana State University Health Science Center, 3Department of Cellular Biology and Anatomy, Louisiana State University Health Science Center, 4Department of Neurology, Cerebral Vascular Disease Research Laboratories, University of Miami Miller School of Medicine, 5Department of Biomedical Sciences, West Virginia School of Osteopathic Medicine

이 논문에서

요약

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

이 프로토콜 기능 학습/메모리 환기가 심장 마비 유발 뇌 허 혈에 평가 하는 수정 된 T-maze의 사용을 설명 합니다.

초록

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배경: 글로벌 대뇌 국 소 빈 혈 (즉, 심장 마비) 모델에 적당 한 인지 장애에 약한 평가 어려울 수 있습니다 불 쌍 한 운동으로 인해 수술 후. 예를 들어 쥐가 수술을 받아야 하 고 모리스 물 미로에 복종 하지 수 수영, 따라서 실험을 무효화.

새로운 방법: 수정 된 행동 자발적 교체 T-maze 테스트를 설립 했습니다. 수정된 T-maze 프로토콜의 주요 장점은 충분히 강력한 국 소 빈 혈 후 기능 학습/메모리를 평가 하는 그것의 상대적으로 간단한 디자인. 또한, 데이터 분석은 단순 하 고 간단. 우리는 쥐의 학습/메모리 적자 (6 분) asphyxial 심장 마비 (ACA) 중간에 가벼운의 유무에서 결정 하는 T-maze를 사용 합니다. 쥐 탐험을 위한 자연적인 경향이 있고 반면 hippocampal lesioned 쥐 hippocampal 관련 공개 감소 자발적인 교체 비율에 사이드-기본 설정 결과 채택 하는 경향이, T-maze에서 다른 무기를 모색할 것입니다. 기능 학습/메모리 ACA의 유무입니다.

결과: ACA 그룹 높은 쪽 기본 비율 및 제어에 비해 낮은 교대에 있다.

기존 방법을 가진 비교:는 모리스 물, 반 즈 미로 학습/메모리 기능을 평가 하기 위한 더 저명한 있습니다. 그러나, 모리스 물 미로 다른 미로 보다 더 스트레스. 반 즈 미로 널리 ACA 유도 neurocognitive 적자는 더 밀접 한 관련이 (단기) 메모리 작업 하는 동안 참조 (장기) 메모리를 측정 하는 데 사용 됩니다.

결론: 우리는 우리의 글로벌 뇌 허 혈 모델 (ACA)에서 일 하는 (단기) 메모리는 T-maze 통해 윤곽을 그리 다 하는 간단 하면서도 효과적인 전략을 개발 했습니다.

서론

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미국 심장 협회 (2017), 심장 마비 (CA)-유도 사망률 4 분 마다 발생 합니다 및 미국1에 있는 년 당 이상의 400000 사람들에 영향을 줍니다. 그것은 잘 문서화 된 CA 부족 한 혈액 관류2,,34결과로 신경 뇌 손상 발생할 수 있습니다. 해 마5,6,7, 학습 및 메모리8,9, 중요 한 신경에 영향을 미치는 허 혈-민감한 CA1 지역에서 캘리포니아 유도 뇌 손상 발생 10,,1112. 또한, 모 수석 등뼈 밀도, 해 마 (즉 CA1 신경), 허 혈 성 조건에서의 손실 공간 메모리 손상13,,1415에 중요 한 역할을 하고있다. CA 후 이러한 병 적인 변화, 행동 장애 등: 불안, 우울증, 외상 후 스트레스 장애, 및 기억 상실 되어 있습니다. 향상 된 CA 생존 율 연관 의료 기술 (즉, 효율적인 외래 서비스) 발전 되어, 대부분 (저체온증)를 제외 하 고 신경 치료의 CA16 후 기능적인 결과 개선 하기 위해 실패 ,17. 일반적으로 CA 생존자는 가난한 삶의 질, 있고16지출 증분 의료 부담.

행동 검사를 통해 뇌 허 혈에 대 한 인지 상태 평가 두 약물 효능을 확인 하 고 궁극적으로 성공적인 임상 시험을 개발 하는 것이 중요입니다. 1940 년, 에드워드 썬 마 기반 공간 메모리18공부 첫 동작 시험 설계. 그 후, 다른 미로 (즉 모리스 물 미로, 방사형 미로, T-또는 Y-미로, 그리고 반 즈 미로) hippocampal 기반 공간 학습 및 메모리 쥐19,20,21,22에에서 개발 되었다 ,23. 모리스 물 미로 공간 학습 검사는 더 널리 행동 테스트 중 이며 쥐에 메모리 모델24. 그러나, 모리스 물 미로 쥐를 수영 하 고 전체 모터 기능과 제어를 발휘 해야 합니다. Asphyxial 심장 마비 (ACA, CA의 쥐 모델) 모델과 같은 허 혈 실험, 대 퇴 동맥/정 맥 cannulation 중요 한 혈압, 혈액 가스 및 다양 한 약물의 도입 가져오는 데 필요 합니다. 대 퇴 동맥/정 맥 cannulation 다리 이동성 렌더링 제대로 수영 하는 쥐의 기능을 억제 하실 수 있습니다, 이후 모리스 물 미로 ACA에서 인지 장애 테스트에 가장 적합 한 않을 수 있습니다.

반 즈 미로 공간 학습 및 설치류 모델에서 메모리 검사를 다른 널리 사용 되 행동 테스트입니다. 반 즈 미로 전체 모터 기능과 제어의 분 발을 요구 하지 않는다 따라서 모리스 물 미로 보다 스트레스를 덜 하 고. 과거에는, 우리 반 즈 미로 기능 학습/메모리 차이 사이 발생을 사용 하 여 실험을 수행 제어 또는 ACA 유발 쥐 대 가짜. 데이터 동안 얻은 반 즈 미로 해상도 반 즈 미로 널리 참조 (장기) 메모리25,26을 측정 하는데 사용 되는 사실 때문에 적당 한 ACA에 약한 다음 인지 장애 테스트를 하지 않은 대 한, ACA 유도 neurocognitive 적자 더 밀접 하 게 일 (단기) 메모리27,,2829,30 반 즈 미로 덜 우리의 ACA에 메모리 기능을 평가 하기 위한 실용적 제안 관련 모델입니다.

우리는 따라서 ACA 후 (단기) 메모리 작업 평가를 자발적 교체 테스트를 사용 하 여 수정 된 T-maze를 개발 했다. 수정 된 T-maze 자발적인 교체 테스트의 주요 장점은 단순 하 고 행동 하는 다른 검사에 비해 쥐에 최소한의 스트레스 수정된 T-maze로 무거운 잘 계산으로 이전 동물 훈련을 요구 하지 않는다는 사실 때문 분석 또는 모리스 물 미로 반 즈 미로 의해 필요에 따라 하위 루틴 (예: 쥐의 비디오 영상). 여기 우리가 표시 수정된 T-maze 자발적인 교체 테스트는 간단 하 고 아직 매우 효율적인 행동 평가 패러다임 충분 한 해상도를 정확 하 게 감지 하 고 단기 기억 상실을 일으키는 원인이 되는 질병에서 hippocampal 기능 평가 제공할 수 있는 (즉, ACA)입니다.

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프로토콜

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모든 실험 절차 했다 건강의 국가 학회의 지침에 따라 실시 하 고 기관 동물 관리 및 사용 위원회 (LSU 건강 과학 센터-위조) 남성 Sprague Dawley 쥐 (의 사용에 대 한 승인 300-350 g, 9 10 주 오래 된). 쥐는 ACA 수술 전에 하룻밤 금식 했다.

1. T-maze 장치 설계 및 설정

주: 자료는 집사와 롤 린스 2006 모델31에 T-maze 디자인.

  1. SketchUp32를 이용 하 여 미로의 3D 구조 디자인. T-maze의 3 차원 구조를 만들려면 시작 팔은 외부의 길이 200 m m, 3D 프린터의 인쇄 크기에 맞게 148 mm의 165 m m의 너비와 높이 생성 합니다. 5.5 m m의 벽 두께 바닥 두께 8 m m를 사용 합니다.
  2. 3 차원 프린터를 사용 하 여 미로 인쇄 (재료의 표 참조)32. 실험실에서 3D 프린터를 사용할 수 없는 경우 나무, 중간 밀도 섬유판, 플라스틱 (즉, 폴 리 염화 비닐), 주택 개선 상점에서 구입할 수 있는 등 다른 재료를 사용 합니다.
    1. 인쇄 영역에서 높이 제한으로 인해 두 개의 별도 3D 인쇄에 미로의 벽을 생성 하 고 미로 어셈블리에 함께 참여 (두 번째 벽 높이 280 m m의 총 벽 높이 140 mm, 높이 증가 미로 섹션에 추가 되었습니다는 즉,). 각 별도 3D 인쇄 자료 "T" 모양의 잠금 메커니즘, 한 섹션 다음에 연결 되어 있는 포함.
    2. 목표 팔 시작 팔의 접합에 가입 목표 팔의 시작 팔의 폭 165 m m 다양 한 섹션을 만듭니다. 목표 팔 시작 팔;으로 비슷한 디자인 메서드를 사용 하 여 구성 그러나, 집사와 롤 린스의 디자인 당 100 mm 팔의 폭을 줄일 수 있습니다.
    3. 자세한 회로도/치수는 T-maze의 그림 1 을 참조 하십시오.
    4. 시작 팔과 목표 팔의 접합에 있는 디자인에 중앙 파티션 포함. 목표 팔 분할 시작 팔에는 T-maze의 그리고 200 m m 뒤쪽 벽에서이 파티션을 확장 합니다. 이 파티션에 또한 미로 (그림 1)의 높이 확장합니다.

2. asphyxial 심장 마비 (ACA)

  1. 압력솥 수술 도구 (15 분 동안 121 ° C) 수술의 개시 전에. 수술의 사이트에 동물 머리 15 분 면도 대 한 70% 에탄올에 의해 수술 테이블을 소독. 피부 외과 수술에 대 한 표면에 betadine 솔루션을 적용 합니다.
  2. Anesthetization
    1. 4 %isoflurane과의 혼합물으로 O2 와 N2O (300 mL/min O2 와 700 mL/min N2O) 마스크를 통해 쥐 anesthetize
    2. 게 쥐 기계 환기를 위한 endotracheal 삽 관 법 (삽 관 법, 후 쥐에 연결 된 호흡).
    3. 낮출 isoflurane 4%에서 2%의 O2 와 N2오 마 취의 깊이 결정 하는 핀치-응답 메서드를 사용과 혼합 하 여 마 취를 유지 합니다.
    4. 마 취에서 건조를 방지 하기 위해 눈에 연 고를 적용 합니다. Regulae 온도 기준으로 항문 프로브 패드를가 열 하는 설치류에 의해 체온.
  3. Endotracheal 삽 관 법
    1. 유도 실에서 쥐를 놓습니다. O2 와 N2o.의 4 %isoflurane 및과 혼합물으로 쥐를 anesthetize
    2. 유도 실에서 쥐를 제거 합니다. 장소에 있는 마 취 동물 마 취 마스크 쪽으로 쥐의 얼굴로 부정사 위치.
    3. 왼쪽 또는 오른쪽 왼쪽 엄지와 검지 손가락으로 동물의 혀는 부드럽게 이동합니다.
    4. 14 게이지 유연 정 맥 카 테 터 (49 m m 긴) 17 게이지 무딘 팁 pipetting 바늘 (93 m m-긴 바늘의 팁에서 10도 각도)를 통해 활강. 기도에 17 게이지 무딘 팁 pipetting 바늘을 삽입 합니다.
    5. 기관에서 17 게이지 pipetting 바늘에 밖으로 부드럽게 당겨. 호흡기에 14 게이지 카 테 터 허브를 연결 합니다. 0.67 mL/100 g을 60 호흡/분의 호흡 속도 환기 선 볼륨을 조정 합니다.
    6. 온도 기준으로 항문 프로브 패드를가 열 하는 설치류에 의해 전체 절차 동안 37 ° C에서 머리와 몸 온도 유지 합니다.
  4. 대 퇴 동맥 및 정 맥 도관 법
    1. 사 타 구니 지역 (양쪽)에 머리를 면도 하 고 수술에 대 한 표면 피부에 betadine를 적용.
    2. 부정사 위치에 쥐를 배치. 수술가 위로 사 타 구니 지역에서 절 개 (10 m m)를 확인 합니다.
    3. 사 타 구니 인 대 노출 때까지 결합 조직 무딘 팁 겸 구분 합니다. 사 타 구니 인 대를 파악 하는 hemostat를 사용 합니다. 대 퇴 동맥 및 정 맥 인 대 사 타 구니 아래 있습니다.
    4. 무딘 팁 집게를 사용 하 여 대 퇴 동맥 및 정 맥 노출까지 결합 조직 분리.
    5. 부드럽게 좋은 팁 겸 통해 대 퇴 동맥을 따라 실행 되는 대 퇴 신경을 분리 합니다. 신중 하 게 대 퇴 동맥을 분리 하 고 좋은 팁 겸 통해 단위로 정 맥.
    6. 좋은 팁 집게를 사용 하 여 대 퇴 동맥 정 맥에서 분리.
    7. 5-0 비단 봉합 (다리와는 몸으로 다른 하나) 정 맥에서의 2 조각을 놓으십시오.
    8. 시체 근처에 느슨한 매듭을 묶어. hemostat를 사용 하 여 개최 하 고 신체의 반대편 쪽으로 최대한 봉합을 당겨.
    9. 다리 근처에 느슨한 매듭을 묶어. 보유 하 고 정 맥 피를 채울 수 있도록 hemostat 통해 다리 쪽으로 봉합을 당겨.
    10. 마이크로 해 부가 위 (45 ° 각도)에 의해 정 맥 (약 0.1 m m)에 작은 절 개를 확인 합니다. 멸 균된 거 즈와 어떤 피를 담근 다.
    11. PE-50 카 테 터를 무딘 팁 바늘 주사기 (20 U/mL 헤 파 린과 염 분 가득한)를 연결 합니다. 20 U/mL 헤 파 린과 염 분에 PE 50 테를 채우십시오. 포인트를 만들거나 날카로운 끝을 45 ° 각도로 해 부가 위 PE 50 테를 잘라. 무딘 팁 집게를 사용 하 여 PE 50 카 테 터의 끝을 잡고. 부드럽게 대 퇴 정 맥에 PE 50 카 테 터를 삽입 합니다.
    12. 카 테 터 삽입 완전히 후 천천히 아무 누출을 덤플링을/염 분의 0.1 mL을 관리할 수 있습니다. 타이 PE 50 카 테 터를 안정 회사 봉합 매듭 (단일-매듭). 다양 한 약물의 지속적인 정 맥 (IV) 주입을 위해 PE 50 카 테 테 르를 유지 합니다.
    13. 1 mL 주사기는 23 연결 사용 절차에 걸쳐 쥐를 무력화에 대 퇴 정 맥을 통해 Luer 스텁 어댑터 vecuronium 브 로마 이드 (0.67 밀리 그램/kg, 모든 10 분 관리) 관리를 게이지.
    14. 5-0 비단 봉합 (다리와는 몸으로 다른 하나) 동맥에서의 2 조각을 놓으십시오.
    15. 다리 근처에 느슨한 매듭을 묶어. hemostat를 사용 하 여 개최 하 고 다리 쪽으로 최대한 봉합을 당겨.
    16. 시체 근처에 느슨한 매듭을 묶어. 누른 키를 누른 채 당겨 동맥 피를 채울 수 있도록 hemostat 통해 몸으로 봉합 합니다.
    17. 마이크로 해 부가 위 (45 ° 각도)에 의해 동맥 (약 0.1 m m)에 작은 절 개를 확인 합니다.
    18. PE-50 카 테 터를 무딘 팁 바늘 주사기 (20 U/mL 헤 파 린과 염 분 가득한)를 연결 합니다. 20 U/mL 헤 파 린과 염 분에 PE 50 테를 채우십시오. 만들 포인트 또는 날카로운 끝을 45도 각도로 해 부가 위 PE 50 테를 잘라. 무딘 팁 집게를 사용 하 여 PE 50 카 테 터의 끝을 잡고. 무딘 팁 집게를 사용 하 여 PE 50 카 테 터의 끝을 잡고. 부드럽게 대 퇴 동맥에 PE 50 카 테 터를 삽입 합니다.
    19. 카 테 터 삽입 완전히 후 천천히 다시 그 카 테 터는 작동 되도록 주사기에 그립니다. 타이 PE 50 카 테 터를 안정 회사 봉합 매듭 (단일-매듭). 동맥 압력 및 혈액 가스의 연속 녹음에 대 한 PE 50 카 테 테 르를 유지 합니다.
  5. Asphyxial 심장 마비 (ACA) 절차
    1. 뇌졸중 볼륨, O2 또는 N2O 레벨을 변조 하 여 필요에 따라 생리 적 매개 변수 (예: 포2, pCO2, 혈압, 및 pH 값)을 조정 합니다. 정상적인 생리 적 범위의 이러한 매개 변수를 사용 하 여: 포2: 100 mmHg, pCO2: 35-40 mmHg, 혈압: 100 mmHg, 그리고 pH: 7.4.
    2. Vecuronium 브 로마 이드 (0.67 밀리 그램/kg, I.V.) 대 퇴 정 맥을 통해 관리 하 고 2 분 기다리는 23 게이지 Luer 스텁 어댑터와 연결 된 1 mL 주사기 혈압에 있는지 확인 하는 사용 하거나 약 100 mmHg ACA를 수행 하기 전에.
    3. 호흡기에서 endotracheal 튜브 (카 테 터 허브 14 게이지)를 분리 하 여 가사 (6 분)를 유도. 더 완전 한 가사를 되도록 1 mL 주사기에 의해 endotracheal 튜브를 차단 합니다.
      참고: 6 민 환기가 시간 호흡 단절 및 소생의 시작 사이의 기간으로 정의 됩니다. 완전 한 심장 마비는 10 mmHg 보다 낮은 평균 동맥 압력으로 정의 된다.
    4. 면 무 호흡 증의 마지막 분 동안 80 호흡/분, 호흡의 호흡 속도 조정 하 고 0% N2오 2 L/분 O2 증가 이 작업은 모든 나머지 isoflurane 또는 N2O 호흡기에 남아 날 려.
    5. 가사, 다음 분 endotracheal 튜브에서 1 mL 주사기를 제거 합니다. 호흡기에 endotracheal 튜브를 다시 연결 합니다.
    6. 1 mL 주사기는 23 연결 사용 게이지 Luer 스텁 어댑터에 피 네 프 린 (0.005 mg/kg, I.V.) 대 퇴 정 맥을 통해 관리 하 고, 인덱스, 엄지와 중간 손가락 x 빛 원형 운동에 있는 동물의 가슴에 의해 수동 가슴 압축을 관리 하 고 z 축 (200/분) 자연 순환 (평균 동맥 압력 ≥ 50 mmHg)33,,3435의 반환까지.
    7. 또 다른 1 mL 주사기는 23 연결 사용 게이지 Luer 스텁 어댑터 자연 순환에 반환 후 즉시 대 퇴 정 맥을 통해 나트륨 중 탄산염 (1 meq/kg, I.V.) 관리를 (50 mmHg 이상)33,34, 호흡 증 완화에 35 .
    8. 측정 혈액의 산-염기 상태 (pH ACA 주위 7.35 7.40 있어야 후)을 결정 하는 소생 후 10 분을 다시 가스
    9. hemostat를 사용 하 여 대 퇴 동맥과 정 맥을 클램프. 천천히 그리고 부드럽게 동맥 및 정 맥 카 테 터 무딘 팁 집게를 사용 하 여 제거 합니다. 대 퇴 동맥/정 맥 출혈을 방지 하기 위해 5-0 비단 봉합 사로 선 3-0 비단 봉합 사를 사용 하 여 외과 사이트 overlying 피부를 닫습니다. 상처 재개의 가능성을 최소화 하기 위해 중단된 suturing 기술을 사용 합니다.
    10. 쥐 통풍 자체 (보통 30 분 소생술 후 60 분) 때까지 기다립니다, 그리고 통풍 기에서 쥐를 분리 하 고 부드럽게 endotracheal 튜브를 제거.
    11. 장소 (27 ° C, 50% 습도) 아기가 인큐베이터에 쥐 하룻밤. (물에서 그들을 몸을 담글 하 여 만든) 부드럽게 음식을 놓고 밤새 아기 인큐베이터에 물.
    12. 개별 케이지를 쥐를 전송 하 고 일반 차 우와 물 동물 시설에 쥐를 반환 합니다. T-maze 테스트 ACA 후 3 일을 시작합니다.

3입니다. T-maze

  1. 동물 준비
    1. 가짜 (ACA), 수술 전 하루 5 분 동안 각 쥐를 처리 합니다. 결코 상승 쥐가 그들의 새 장 (250 m m x 200 m m, 플라스틱 투명 한 케이지 x 480)에서 때 처리 (그림 2).
    2. 쥐를 처리 후 부드럽게 쥐 여 선택 한 손으로 다른 손을 지원으로 그것의 꼬리는 ' 다리. 그들은 새 장 (100 m m 높이)를 5 번 손에서 점프 하자. 그들은 음식 또는 싸움에 대 한 지배 하지 것입니다 그래서 개인 연습장으로 각 쥐를 구분 합니다.
    3. 3 일 가짜 또는 ACA 수술 (그림 2), 후 첫 번째 실행의 시작 전에 조용 하 고 어두운 방으로 케이지로 쥐를 전송 합니다. 만 낮은 전력 책상 램프 켜고 최소 조도 유지 하기 위해 테스트 룸의 모서리에 놓습니다. 10 분 동안 어둠에 적응 하는 쥐를 수 있습니다.
    4. 쥐 성능에 일주 변화의 어떤 효과 피하기 위해 오후에 모든 실험을 수행 합니다. 연산자는 쥐 받은 가짜 또는 ACA 수술에 조언을 하지 않습니다.
  2. 자발적인 교체
    1. 미로의 전체 바닥을 커버 (~ 10 밀리미터 두꺼운) 침구의 얇은 층을 확산. 다음 장소 각의 시작 지점입니다 시작 팔 ("T"의 하단)에 쥐를 실행 하도록 쥐를 오른쪽 또는 왼쪽 목표 팔 탐험 3 분.
    2. 쥐 (쥐의 모든 4 개의 발 목표 팔 입력) 특정 목표 팔을 저지른, 일단 시작 팔과 반대 목표 팔 쥐 반대 목표 팔을 입력 하지 못하도록 하려면 (그림 1) 사이 "T" 연결을 차단 합니다. 30 초 동안 미로에서 쥐를 두고 쥐를 선택 하 고 최소한의 시간 (~ 30 초)에 대 한 그것의 감 금에 다시 배치. "T" 연결 제거는 T-maze에서 (125 mm X 230 X 65 mm 3D 프린터에 의해)를 차단.
    3. 시작 팔에 쥐를 놓고 3.2.2 반복 합니다. 교체로 정의 됩니다: 쥐에 비해36실행 이전 반대 팔을 입력 하면. 다음과 같이 하루 4 실행을 수행 하는 쥐가 있다:
      1세인트 실행
      2노스다코타 실행
      10 분 휴식
      3rd 실행
      4번째 실행
    4. 10 분 휴식 기간 동안과 향기 바이어스를 제거 하기 위해 동물 사이 침구 변경. 75% 에탄올 증류수 실험 매일의 끝에 뒤에 T-maze를 청소.
    5. 3.2.1 단계를 반복 합니다. -3.2.4. 2 개의 더 일 (총에서 12 실행) 그림2.
  3. 교체 속도 사이드 기본 설정 속도 계산
    1. 계산 % 교체 및 % 측면 기본 설정, 어디
      L: 쥐 선택 왼쪽된 팔
      R: 쥐 선택 오른쪽 팔
      선택 수정: 실행 2nd (각 세트 포함 두 실행) 주어진된 세트에서 1세인트 와 다르다
      잘못 된 선택: 쥐 같은 팔 비슷합니다 이전 실행 선택
      figure-protocol-1
      figure-protocol-2
      예:
      주 1: L L / L L
      주 2: L L / L R
      제 3 일: R L / L L
      교체: 2 (올바른 선택) /6 (총 세트 수행) * 100 = 33.33%
      사이드 특혜: 10 (L, 선호 쪽) /12 (총 실행 수행) * 100 = 83.33%
  4. 수술 치료:
    1. 주고 수술 후 2 일에 대 한 모든 12 h buprenorphine (0.01 mg/kg IP) 쥐. 심장 마비 후 최대 1 시간에 대 한 쥐를 관찰 합니다.
    2. Sternal recumbency를 유지 하기 위해 충분 한 의식 회복 될 때까지 환기와 난방 패드에 쥐를 연결 합니다. 수술 후 동물 들의 체온을 유지 하기 위해 아기 인큐베이터 (27 ° C, 50% 습도에서 설정)에 쥐를 놓습니다.
    3. 수술 후 첫 24 시간에 대 한 동물을 부드럽게 차 (물에 몸을 담글 하 여 만든) 제공 합니다. 쥐 식 수 없었다면, bacteriostatic 염 분 관리 (100 mL/kg/일, I.P.) 동물 복구 고 식 수 자유롭게 될 때까지.
    4. 모든 상처에 통증 (bacitracin 및 lidocaine 연 고) 쥐 국 소 항생제를 줄. 쥐가 다시 이동 동물 시설 후 그들은 완벽 하 게 복구 합니다.
  5. 안락사 메서드
    1. 5 %isoflurane 및 100% N2O 실험의 끝에 동물을 안락사를 사용 합니다.

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결과

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ACA (글로벌 대뇌 국 소 빈 혈)은 주로 (단기) 메모리 적자28,29일 발생 합니다. ACA 후 학습 및 메모리의 기능을 평가, 우리 사용 수정된 자발적 교체 테스트 (단기) 메모리30일. 자발적인 교체 테스트에서 결과 ACA 그룹 (26.19 ± 4.96%)에서 3 일에서 교대 율은 컨트롤 그룹 (62.96 ± 6.07%)에 비해 크게 낮은 것이 좋습니다. (* p0.05) ACA에 쥐 컨트롤에 비해 측면 바이어스 개발 사실 35 (82.14 ± 4.57%, 62.89 ± 2.86% 대 * p0.05) (그림 3a 와 3b)35<...

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토론

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

집사와 롤 린스의 프로토콜31에 비해 현재 연구에서 수정 되었다. 3D 프린터는 T-maze 구축에 사용 되었다. 3D 인쇄 상용화 T-maze 저렴 하 고 비용 효율적인 대안을 제공합니다. 테스트 기간 동안 쥐 불안을 줄이기 위해, T-maze는 최소 조명 어두운 방에서 수행 되었다. 일단 쥐 목표 무기 중 하나를 입력, 우리는 부드럽게 반대 팔을 차단. 이 단두대 문을 낮추고 있는 동안 쥐의 꼬리에 가능한 손상을 뿐만 아니라 테스트, 가능한 스트레스를 피 한다. 불필요 한 스트레스 후속 실행에 쥐의 성능을 억제 됩니다. 따라서, 우리 모든 연 삭 소음 테스트 동안 플라스틱 단두대 문을 슬라이딩에서 현재 연구에 게이트 "T" 접합 블록 활용. 이 단계는 T-maze 실험 기간 동안 크게 쥐 불안을 줄일 수 있습니다.

습관 들 임은 이후 불안 쥐가 미로에 실행 하도록 동기 부여 성공적인 T-maze 연구에 대 한 중요 한 단계 이다. 따...

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공개 사항

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저자는 공개 없다.

감사의 글

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이 작품으로는 국립 연구소의 건강/국립 연구소의 신경 장애 지원 선 1R01NS096225-01A1 부여, 미국 심 혼 협회 보조금 AHA-13SDG1395001413, 17GRNT33660336 AHA, AHA-17POST33660174는 루이지애나 주립 대학 그랜트 원조 연구 위원회, 말 콤 Feist 심장 혈관 연구 원정대, 고 블 린 F. 일행 두뇌 연구소에서.

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재료

이 논문에 사용된 재료 목록
이름회사카탈로그 번호댓글
3D 프린터MakerBotReplicator5 세대
3D 프린터 필라멘트해치 박스PLA, 1.75mm 필라멘트 직경
200 증명 순수 에탄올Koptec V1005SG
Sani-ChipsPJ Murphy-Forest Products크기 : 8-20 mesh; 2.2 입방 피트 / 패키지; 오토 클레이브 백
RatCharles River LaboratoriesSprague-Dawley
Vecuronium bromideSun Pharmaceutical47335-931-4010 mg
에피네프린Par Pharmaceutical42023-103-01아드레날린 염화물 용액 1 mg/mL, 1:1000
부프레노르핀 염산염 주사Pfizer00409-2012-320.3mg/mL
SketchUpTrimble Inc.3D 모델링 소프트웨어
VentElite Small Animal VentilatorHarvard Apparatus55-7040쥐에서 기니피그까지 다양한 크기의 동물 (10g에서 1kg까지)
PowerLab 8/35AdinstrumentsPL35088 아날로그 입력 채널 – 그 중 4개는 차동 모드에서 사용할 수 있습니다.
바이오 앰프AdinstrumentsFE132Bio Amp는 ECG, EMG 및 EEG 기록과 같은 다양한 생물학적 신호의 측정에 최적화된 갈바닉 절연 고성능 차동 바이오 증폭기입니다.
쿼드 브리지 앰프Adinstruments FE224PowerLab을 대부분의 DC 브리지 트랜스듀서에 연결할 수 있도록 설계된 4채널 비절연 브리지 증폭기입니다.
LabChart 8Adinstruments
ABL80 FLEX CO-OX 혈액 가스 분석기복사계pH / p CO2 / p O2
SURFLO 테플론 I.V. 카테터Terumosc-361556유연한 얇은 벽 카테터(49mm 길이)
피펫/주입 바늘Hamilton7748-03만 사용17 게이지; 길이 93mm; 10도 각도
Classic T3 기화기SurgiVetVCT302Classic T3 Isoflurane 깔때기 채우기
ENVIRO-PURE 숯 캐니스터SurgiVet32373B10폐 마취 가스
O2 단일 유량계SurgiVet32375B10-1000 mL
N2O 유량계VetEquip4017210-4LPM
Clay Adams Intramedic Luer-Stub 어댑터 (멸균)Becton Dickinson427565 23 게이지
마이크로 펜치블랙 및 블랙 수술B3FRC-18 RM-87 1/4" (18 cm), 8mm RH, 카운터웨이트 w/ 가이드 핀 2mm, 플랫폼 6 x .3 mm, 곡선.
Halstead 모기 집게RobozRS-7111곡선형; 5" 길이, 1.3mm 팁 직경, 2.1mm 턱 너비
Mixter ForcepsRobozRS-72915.25" 곡선형 매우 섬세한, 1.1mm 팁
Castroviejo Micro 해부 스프링 가위RobozRS-5650직선, 날카로운 점; 9mm 절단 가장자리; 0.15mm 팁 너비; 3 1/2" 전체 길이
Mayo-Stille 가위RobozRS-68915.5" 라운드 곡선
Dumont #5 집게RobozRS-505845도 Dumoxel 팁 크기 .10 x .06 mm
Olsen-Hegar 조합 가위 및 바늘 홀더RobozRS-7884크로스 톱니 팁; 5.5" 길이
Moloney 집게RobozRS-8254톱니; 약간의 곡선; 4.5" 길이
를 흡수하도록 설계됨 용

참고문헌

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