방법 논문

포 격하 보 리 Aleurone 레이어 증가 처리량에서 유전자 발현을 측정

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DOI:

10.3791/56728

⸱

2018년 3월 30일

 ,  ,  ,  , 
1Department of Biology, Colby College

이 논문에서

요약

향상 된 프로토콜은 입자 사격 후 보 리 aleurone 세포에서 기자 구문에서 일시적인 유전자 발현의 측정에 대 한 제공 됩니다. 96 잘 접시 효소 분석 실험 연 삭 자동화 된 곡물의 조합을 절차에 대 한 높은 처리량을 제공 합니다.

초록

보 리 곡물의 aleurone 레이어 식물에서 호르몬 통제 유전자 발현에 대 한 중요 한 모델 시스템입니다. Aleurone 세포에서 유전자 발 아에 필요한 또는 스트레스 응답 연관 유전자 abscisic 산 (ABA)에 의해 활성화 되는 동안 초기 종묘 개발 지 베 렐 린 (GA)에 의해 활성화 됩니다. GA와 ABA 신호 메커니즘은 효소 분석 실험을 사용 하 여 측정 결과 과도 식으로 입자 사격을 통해 aleurone 세포로 리포터 유전자 구조를 도입 하 여 심문 수 있습니다. 향상 된 프로토콜을 부분적으로 자동화 하 고 간소화 곡물 균질 단계 및 효소 분석 실험 보고는 기존의 방법 보다 훨씬 더 많은 처리량을 허용. 균질 곡물 샘플 자동된 조직 균질 화기를 사용 하 여 밖으로 실행 되 고 거 스 (β-glucuronidase) 분석 실험 96 잘 접시 시스템을 사용 하 여 실시 됩니다. 프로토콜을 사용 하 여 대표 결과 phospholipase D 활동 ABA, 녹음 방송 요인 TaABF1 통해 HVA1 유전자 식의 활성화에 중요 한 역할을 재생할 수 있습니다 것이 좋습니다.

서론

보 리 aleurone 레이어 식물1호르몬 통제 유전자 발현의 학문을 위한 기초가 튼튼한 모델 시스템입니다. 특히, 스트레스 응답 연관 유전자 abscisic 산 (ABA)에 의해 활성화 되는 동안 발 아 또는 초기 종묘 개발에 필요한 유전자의 수 지 베 렐 린 (GA)에 의해 활성화 됩니다. GA와 ABA 신호 경로 고리로 연결 되었다는, 일부가 활성화 유전자의 표정을 ABA와 반대로1저해로.

조지아/ABA 신호에 특정 배우의 역할 입자 사격, 기자 구문에 효과 허용 하는 과도 식으로 다음을 통해 이펙터 유전자 구조 도입 되었습니다 이해를 위한 중요 한 전략 다운스트림 유전자 식 결정 됩니다. 거 스 (β-glucuronidase) 등 Luciferase 리포터 유전자를 사용 하 여 특별히 이펙터 구조 받은 셀 내에서 유전자 발현의 과민 하 고 양적 측정을 수 있습니다. 예를 들어 녹음 방송 요인 TaABF15,6 인코딩 이펙터 구문의 도입 HVA1 같은 ABA 유발 유전자는 Amy32b 같은 유전자가 유도 하는 동안 TaABF1에 의해 유도 된 설립 억 누른 다. 입자 사격 실험 전략으로 조지아/ABA 신호의 다양 한 측면을 조사 하기 위해 여러 실험실에 의해 사용 되었습니다. 같은 일이 유도2 및 ABA 유도 유전자3, 활성화에 대 한 중요 한 발기인 요소의 식별 하 고 단백질 kinases4 의 발견을 주도하 고 있다 및 녹음 방송 요인5 규제는 이 유전자의 표현입니다.

기존 프로토콜2,3,,45,입자 사격 및 일시적인 유전자 발현의 후속 측정에 대 한6 는 아주 노동 집약, 각 세트의 포 격으로 간신히 곡물은 박격포 및 방 앗 공이에서 손으로 무 균 그리고 효소 분석 실험 개별적으로 수행 됩니다. 이 원고를 보고 부분적으로 자동화 하 고 균질 단계를 능률화 하는 향상 된 프로토콜 및 동일한 실험에서 테스트 하는 치료의 많은 수를 허용 훨씬 더 많은 처리량을 허용 하도록 분석 실험은 거 스는 또는 더 많은 통계적으로 강력한 결과를 얻을 각 치료에 대 한 더 많은 복제의 포함. 대표 결과 GA, ABA, 및 다른 규제 분자 뿐만 아니라 녹음 방송 요인 TaABF1에 의해 통제 하는 HVA1 및 Amy32b 기자 구문, 표현에 대 한 표시 됩니다.

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프로토콜

1. 준비 이펙터와 취재 원 유전자의 구성

  1. 원하는 열려있는 독서 프레임에서 드라이브 식 제정 발기인 (예: 옥수수 유비퀴틴, UBI)를 사용 하는 이펙터 구조를 빌드하십시오. 예를 들어 드라이브 TaABF15의 강한 제정 식 UBI::TaABF1 를 포함 하는 플라스 미드를 생성 합니다.
  2. 거 스같은 열려있는 독서 프레임의 업스트림 배치 기자 구조 측정, 그 활동은 발기인을 포함 하는 빌드. 예를 들어 HVA1::GUS HVA1 발기인2,5에서 측정을 포함 하는 플라스 미드를 생성 합니다.
  3. 내부 제어 구조를 구축 (예: UBI::luciferase).
  4. 실리 카 바인딩 열을 사용 하 여 프로토콜 ( 재료의 표참조), 각 필요한 유전자 구조에 대 한 높은-품질 플라스 미드를 준비. 자외선 분광학을 사용 하 여 참조 테이블의 재료, 신중 하 게 각 플라스 미드 준비의 농도 측정.

2입니다. 보 리 곡물의 준비 사격에 대 한

  1. 스프레드시트를 설정 (예를 들어 그림 1 참조) 포 격 될 것 이다 플라스 미드, 적절 한 호르몬 치료 및 실험의 일부가 될 것입니다 각 치료에 대 한 기타 관련 정보를 나타내는.
  2. 히말라야 보 리는 (실험에 포함 하는 각 치료에 대 한 40)의 곡물에서 배아를 잘라 절단 보드를 사용 하 여 살 균 면도날. 변색 또는 실질적으로 평균 보다 작은 알갱이 제외 합니다.
  3. 50 mL 튜브에 모든 embryoless 곡물을 놓습니다. 10 분 동안 물과 바위의 40 mL를 추가 합니다.
  4. 신중 하 게 ()을 피하기 위해 곡물을 잃고 물에 밖으로 부 어과 10% 표 백제의 40 mL를 추가. 20 분 동안 바위입니다.
  5. 표 백제에 밖으로 부 어과 메 마른 물 40 mL를 추가. 5 분 동안 바위입니다. 이 메 마른 물 세척 4 번 더 반복 합니다.
  6. 40 mL Imbibing 솔루션 (20 m m 나트륨 호박, 20 m m 칼슘 염화 물, pH 5.0)의 추가 페니 재고 솔루션 (10 mg/mL)의 40 μ.
  7. 질 석 접시에 튜브에서 Imbibing 솔루션 (페니)의 대부분을 전송 ( 재료의 표참조). 그런 다음 전송 Vermiculite 접시에 젖은 필터 종이의 표면에 곡물. 곡물에 밖으로 균등 하 게 퍼졌다. 충분 한 imbibing 솔루션을 부분적으로 (하지만 완전히)는 곡물을 계속 부 어 침수. 질 석 판 위에 뚜껑을 놓습니다.
  8. 형광 조명에 대해 48 h 24 ° C에서 embryoless 곡물을 품 어. 필요에 따라 추가 Imbibing 솔루션을 추가 합니다.
  9. 90 m m 플라스틱 페 트리 접시를 열고 거꾸로 뚜껑으로 자체와 20 mL 접시에 Imbibing 솔루션의 20 mL를 붓는 다. 각 페니 (10 mg/mL)의 20 μ를 추가 합니다. 알코올에 그들을 담거 서 좋은 포인트 집게의 두 쌍을 소독.
  10. 페 트리 접시의 뚜껑으로 embryoless 곡물의 몇 가지를 놓습니다. 부드럽게는 집게를 사용 하 여 각 곡물에서 (투명) 씨 외 투를 제거 합니다. 곡 식의 부드러운 측면에서 씨 외 투를 제거 하는 동안 기본 (aleurone) 세포를 손상 하지 마십시오. 벗 겨 곡물 Imbibing 솔루션을 포함 하는 배양 접시에 전송.
  11. 모든 곡물의 씨앗 외 투, 필 링 후 Vermiculite 접시에 그들을 반환 합니다. 16-20 시간 24 ° C에서 벗 겨 embryoless 곡물을 품 어.
  12. 그냥 사용 하기 전에 곡물 폭격에 대 한, 페 트리 접시에 필터 논문 사이 그들을 흔들어 표면 수 분을 제거 합니다.

3입니다. 사격에 대 한 플라스 미드 DNA의 준비

  1. 1.5 mL 튜브 사격 실험에 포함 될 각 치료에 대 한 레이블을 지정 합니다. 각 튜브를 유비의 2.5 µ g 추가::luciferase 내부 제어 플라스 미드, 거 스 기자 플라스 미드와 이펙터 플라스 미드의 원하는 금액 (2.5 µ g 일반적으로 0.025 µ g) 2.5 µ g. 총 볼륨 5 µ L을가지고 물을 추가 합니다.
  2. 1.6 µ m 금 microcarriers ( 재료의 표참조)를 준비 다음 게시 프로토콜6.
  3. 각 치료에 대 한 플라스 미드 DNA를 포함 하는 1.5 mL 튜브에 일시 중단 된 microcarriers의 50 µ L를 추가 합니다. 제조 업체의 프로토콜6에 플라스 미드 DNA와 microcarriers를 코트.
  4. 마지막 단계에서 플라스 미드 코팅 microcarriers 48 µ L 100% 에탄올, 5 macrocarriers의 각각에 정지 microcarriers의 피펫으로 8 μ에에서 일시 중단 되 고 공기에 그들을 허용 하는 때 건조.

4. Embryoless 보 리 곡물의 입자 사격

  1. ( 재료의 표참조) 입자 사격 장치 설정6.
  2. 1550 psi 파열 디스크를 고정 캡에 놓고 악기에 마운트 합니다.
  3. (정지 화면) 함께 원하는 플라스 미드 조합을 포함 하는 macrocarrier microcarrier 실행 어셈블리에 놓습니다. 어셈블리 사격 챔버의 상단 슬롯에 삽입 합니다. 모자 및 표준 거리 (6 m m)에서 macrocarrier 커버 뚜껑 파열 디스크 사이의 거리를 설정 하 고 수 있도록 11 밀리미터 (그림 2A)의 macrocarrier 여행 거리 (표준) 중간 위치에서 정지 화면 지원 장소.
  4. 정렬 꽉 방사형 패턴에서 8 embryoless 곡물 (얇은 끝 안쪽으로 가리키는) 평면 90 mm 페 트리 접시의 뚜껑을 아래로 녹화 필터 종이 동그라미에 ( 그림 2B참조).
  5. 중지 화면에서 6 cm의 거리에서 사격 챔버로 곡물을 가진 접시를 놓습니다.
  6. 95 인민군을 폭격 챔버를 철수 하 고 샘플을도 배.
  7. 진공을 해제 한 후 포 격하 곡물 Imbibing 솔루션 페니의 1 mg/ml를 포함 4 mL를 포함 레이블이 60 m m 페 트리 접시에 전송.
  8. 사격의 모두 완료 될 때까지 반복 합니다. 24 시간 동안 24 ° c (100 rpm에서 떨고 플랫폼)에서 품 어.

5. 포 격하 곡물에서 수용 성 단백질의 추출

  1. 집게를 사용 하 여, 60 mm 페 트리 접시에서 8 포 격하 곡물을 제거 하 고 그들을 종이 타월에 건조 되 리. 나눌 알갱이 두 레이블이 2.0 mL 튜브 (튜브 당 4 곡물) 각 800 μ 연 삭 버퍼 (100 m m 나 인산 염 pH 7.2, 5mm DTT, 10 µ g/mL leupeptin, 20% 글리세롤)와 5 m m 스테인리스 구슬. 포 격하 곡물의 모든에 대해이 프로세스를 반복 합니다.
  2. (최대 48) 2.0 mL 튜브 비드 균질 화기의 두 개의 선반에 배치 ( 재료의 표참조). 랙에 균질 화기에 탑재 합니다.
  3. 3 분 30 Hz에서 샘플을 흔들어.
  4. 균질 화기에서 균질 화기 선반을 제거 하 고 샘플을 다시 얼음 (5 분)에 그들을 배치.
  5. 균질 화기-반대 방향에서에서 다시 랙에 탑재 합니다. 흔들어 샘플 다시 30 Hz에서 3 분.
  6. 그런 다음 얼음, 랙 냉각 5.5 단계 5.3를 반복. 이 떨고의 12 분의 총에 추가 됩니다.
  7. 10 분간 4 ° C에서 16000 x g에서 곡물 추출 물 원심
  8. 즉시 후에 원심 분리, microcentrifuge 튜브의 두 번째 세트에 분명 supernatants를 가만히 따르다. 빠른 소용돌이 각 튜브를 제공 합니다. 얼음에 튜브를 저장 합니다.
  9. 세척 하 고 다시 사용할 수 있도록는 상쾌한 전송 후 펠 릿에서 강철 구슬을 복구 합니다.

6. 곡물 추출 물에서 Luciferase 활동의 측정

  1. 분석 수로 곡물 추출의 각 관에 대 한 준비 Luciferase 분석 결과 혼합물의 200 μ를 포함 12 m m x 75 m m 유리 테스트 튜브 (45 m m Tris 황산 pH 7.7, 15 m m MgCl2, 20 mM DTT, 1.5 m m EDTA, 소 1 m m, 1mm ATP).
  2. 첫 번째 분석 결과 튜브를 첫 번째 곡물 추출 물 100 μ를 추가 합니다. 잘 혼합을 신속 하 게 소용돌이. 즉시 는 루미 노의 튜브 홀더 튜브를 삽입 하 고 문을 닫습니다. 측정 완료 되 면 다음 튜브의 배치를 위해 문을 열어두고-루미 노에서 튜브를 제거 합니다.
  3. 이 프로세스를 반복 하 여 모든 샘플 측정 되었습니다.

7. 곡물 추출 물에서 GUS 활동의 측정

  1. 96 잘 접시의 각 음에 거 스 분석 결과 버퍼 (50 m m 나 인산 염 pH 7.2, 2.5 m m 4-methylumbelliferyl-D glucuronide 10mm DTT, 2 mM EDTA, 10 µ g/mL leupeptin, 20% 메탄올, 0.02% 나트륨 아 지 드)의 200 μ를 추가 합니다.
  2. 각 곡물의 장소 50 μ 잘 해당 추출 합니다. 추가 팁과 혼합. 씰링 필름으로 최고 봉인.
  3. 20 시간 동안 어둠 속에서 37 ° C에 96 잘 접시를 품 어.
  4. 96 잘 접시 4 ° C에서 4000 x g에서 10 분간 원심 하 고 얼음에 그것을 배치.
  5. 블랙 96 잘 접시의 각 음에 0.2 M 나2CO3 의 250 μ를 추가 합니다.
  6. 해당 각 centrifuged 거 스 분석 결과 혼합물의 6.25 μ 추가 잘 (포함 0.2 M 나2CO3) 블랙 96 잘 접시. 추가 팁과 혼합. 기준으로 10 μ M, 40 μ M, 그리고 100 μ M 4-methylumbelliferone의 6.25 μ와 웰 스를 포함 한다.
  7. 플레이트 fluorometer에 검은 접시를 놓고 methylumbelliferone의 형광을 읽고. 360의 여기 파장에서 수치를가지고 nm 그리고 460의 방출 파장 nm. 40 μ M 4-methylumbelliferone의 잘 포함 6.25 μ와 0.2 M 나2CO3 의 250 μ 제공 1000 형광 단위의 읽기 같은 악기의 이득을 설정 합니다.

8. 데이터 분석

  1. 스프레드시트에 luciferase 및 거 스 분석 실험에 대 한 값을 입력 합니다. 이 유전자 구조 aleurone 셀에 성공적으로 배달 되지 않은 나타냅니다 모든 샘플의 20000 상대 발광 단위의-1보다 낮은 luciferase 읽기와 고려 대상에서 제외 합니다.
  2. 각 성공적으로 포 격하 곡물 추출 (4 embryoless 곡물의 그룹 대표), 다음과 같이 원시 거 스와 luciferase 데이터에서 정규화 된 거 스 식 계산: 거 스 정규화 = [(거 스 식-거 스 빈) (2000000) x] / (luciferase 식-빈 luciferase)입니다.
    참고:이 무슨 2000000의 luciferase 독서를 준 사격에서 관찰 되어 거 스 활동의 금액을 정규화 합니다.
  3. 이펙터 구문 또는 호르몬 치료 이펙터 또는 호르몬의 부재에 식의 수준에 비교 하 여 테스트 되 고 있을 때 특정 기자 구문 식의 상대적 수준을 보고 합니다.

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결과

여기에 설명 된 기술은 보 리 곡물의 aleurone 세포로 어떤 테스트 유전자 구조를 소개 사용할 수 있습니다. 테스트 유전자 발현의 수준 다음 있을 수 있습니다 (그림 2)를 편리 하 게 측정. 높은 처리량 프로토콜 크게 여기에 설명 된 연 삭 씨앗과 효소 분석 실험 단계의 효율성을 증가 합니다. 이 방법은 HVA17ABA 유도 유전자 표현의 활성화 녹음 방송 요인 TaABF15,6 의 능력을 평가 하기 위해 사용 되었습니다. 여기에 제시 하는 대표적인 결과 HVA1::GUS 기자 구문 UBI::TaABF1 이펙터 구조 (그림 3A)와 aleurone 세포에 도입 되었...

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토론

이펙터 유전자의 도입 구성 입자 사격을 통해, 해 부 결과 호르몬 조절 유전자와 조지아/ABA 신호에 특정 배우의 역할에 대 한 귀중 한 전략은 과도 식 기자 구문 뒤 식입니다.
그러나, 보 리 aleurone 셀2,3,,45,6 에서 같은 실험 수행에 대 한 기존 프로토콜은 매우 노동 집약 이다. 각 그룹의 폭격 겨우 곡물 손 박격포와 유 봉, 무 균 이어야 하며 결과 추출 거 스와 luciferase 활동에 대 한 개별적으로 분석 됩니다. 현재 프로토콜은 따라서 같은 실험에 포함 될 수 있으며 합리적으로 각 치료에 대 한 포함 될 수 있는 생물 복제의 수를 제한 하는 별도 처리의 수를 제한 합니다. 이러한 제한은 어려워질 더 포괄적...

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공개 사항

저자는 공개 없다.

감사의 글

저자는 실험, 곡물 균질에 대 한 조언 주 디 돌 및 fluorometry에 대 한 조언 린 Hannum 수행에 대 한 도움 Greyson 버틀러와 마가렛 배 럿을 감사 합니다. 이 작품은 기관 개발 수상 (IDeA는) 국립 과학 연구소에서의 일반 의료 보조금 번호 P20GM0103423, 건강의 국가 학회에 의해 그리고에서 교부 금에 의해 국립 과학 재단 (IOB 0443676)에 의해 지원 되었다 Colby 대학 자연 과학의 사단입니다.

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재료

이 논문에 사용된 재료 목록
이름회사카탈로그 번호댓글
GeneElute HP 플라스미드 Maxiprep 키트SigmaNA0310-1KT
UV-vis 분광 광도계NanodropND-1000
히말라야 보리 곡물/다양한 껍질 없는 보리(4°C에서 어둠 속에 보관; C)
숙신산 나트륨SigmaS2378흡수 용액 용 시약
염화칼슘 (이수화물)FisherC79-500흡수
용액수용 용액 가정용20 mM 숙신산 나트륨, 20 mM 염화칼슘, pH 5.0. 사용하기 전에 오토클레이브로 살균하십시오.
클로람페니콜시그마C037870% 에탄올에 10mg/mL 원액을 준비합니다.
질석FisherNC0430369질석 플레이트에 사용됩니다.
여과지 서클 (90mm)Whatman1001 090질석 및 포격 전 곡물 준비에 사용
질석 플레이트집에서 만든/유리 페트리 접시에 질석 50mL를 추가합니다. 질석 위에 90mm 종이 원을 놓습니다. 오토 클레이 브.
집게(뾰족한)Fisher13-812-42보리 곡물에서 종피를 제거하는 데 사용됩니다.
겸자(초미세점)Fisher12-000-122보리알에서 종피를 제거하는 데 사용됩니다.
금 마이크로캐리어(1.6 μ m)BioRad1652264
macrocarriersBioRad1652335
염화칼슘(이수화물)FisherC79-5002.5 M 원액을 준비하고 -20°C에서 1 mL 분취액을 보관합니다.
spermidineSigmaS0266100mM 원료 용액을 준비하고 500μ를 저장합니다. L 분취량은 -20° C (2 개월 이내 사용).
Rupture Discs (1550 psi)BioRad
정지 스크린BioRad1652336
macrocarrier 홀더BioRad1652322
Biolistic 입자 전달 시스템BioRadPDS-1000/He
인산나트륨 일염기성 일수화물SigmaS96381M 인산나트륨 pH 7.2
인산나트륨 이염기성시그마S97631M 인산나트륨 pH 7.2
1M 인산나트륨 pH 7.2가정용시약/인산나트륨 일염기성 일수화물 6.9g과 인산나트륨 이염기성 7.1g을 결합합니다. 100mL에 물을 넣으십시오. NaOH를 첨가하여 pH 7.2를 얻습니다.
디티오트리에톨 (DTT)시그마438191 M의 물에 녹여 -20°C;에서 1 mL의 분취액에 보관합니다.
leupeptinSigmaL288410mg/mL까지 물에 녹입니다. -20°C에 저장하십시오. C.
글리세롤시그마G5516물에 50% 용액을 준비합니다.
분쇄 버퍼홈 메이드/1 M 소듐 포스페이트 pH 7.2, 500 10 mL 결합; 1M DTT의 L, 100 μ L 10mg/mL 류펩틴 및 40mL의 50% 글리세롤. 100mL에 물을 넣으십시오.
스테인리스 스틸 비드 (5 mm)Qiagen69989
2.0 mL 튜브Eppendorf22363352이 특정 튜브 모델은 균질화기와 함께 사용하는 것이 좋습니다.
비드 균질화기 (TissueLyser)Qiagen85210
12mm x 75mm 유리 시험관Fisher
luciferinGoldbioLUCK-10025mM 원액을 준비하고 -20°C에서 1mL 분취액을 보관합니다.
ATP시그마A7699100 mM 재고 용액을 준비하고 250 μm를 저장하고; L 분취량은 -20°  C입니다.
트리스 베이스시그마T15031M 트리스 설페이트 pH 7.7용 시약.
황산시그마2581051M 트리스 황산염 pH 7.7 용 시약.
1M 트리스 설페이트 pH 7.7홈 메이드/12.1g 트리스 염기를 물 100mL에 용해시킵니다. 황산으로 pH를 7.7로 조정합니다.
염화마그네슘Sigma M93972m까지 물에 용해시킵니다.
Luciferase 분석 버퍼 (LAB)집에서 만든/1 M Tris sulfate pH 7.7, 500 &mu 3 mL 결합; L 2M 염화마그네슘, 1M DTT 1mL 및 200μ; 0.5M EDTA의 L. 50 에 물을 추가하십시오. 밀리리터.
Luciferase Assay Mixture집에서 만든/LAB 15mL, 800 &mu 결합; 25 mM 루시페린의 L, 200 μ L 100mM ATP 및 물 4mL. 이것은 충분한 분석 혼합물을 만듭니다(20  mL)를 사용하여 100개의 루시퍼라제 분석을 수행할 수 있습니다.
광도계 (Sirius)Berthold/
4-methylumbelliferyl-β -D-glucuronide (MUG)GoldbioMUG1DMSO에서 100mM까지 용해
아지드화나트륨시그마S8032물에 2% 원액을 준비하고 -20°C에서 1mL 분취액을 보관합니다.
96 웰 플레이트 (표준)Fisher12565501
GUS 분석 버퍼집에서 만든/MUG 2.5 mL, 1 M sodium phosphate pH 7.2, 400 &mu 5 mL 결합; L 0.5 M EDTA, 1 mL 1 M DTT, 100 μ L의 10mg/ml 류펩틴, 20mL의 메탄올 및 1mL의 2% 아지드화나트륨. 100mL에 물을 넣으십시오.
TempPlate 밀봉 필름USA Scientific2921-1000
96웰 플레이트(검정색)Costar3916
탄산나트륨SigmaS7795물에 200mM 용액을 준비합니다.
4-methylumbelliferone시그마M1381100 &mu를 준비하십시오; 물에 M 용액. -20°C에서 1mL 부분 표본을 동결합니다.  C입니다.
마이크로플레이트 형광 리더Bio-TekFLX-800
/ / 1652331 용 시약.

참고문헌

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  2. Lanahan, M. B., Ho, T. H. D., Rogers, S. W., Rogers, J. C. A gibberellin response complex in cereal alpha-amylase gene promoters. Plant Cell. 4, 203-211 (1992).
  3. Shen, Q., Zhang, P., Ho, T. H. D. Modular nature of abscisic acid (ABA) response complexes; composite promoter units that are necessary and sufficient for ABA induction of gene expression. Plant Cell. 8, 1107-1119 (1996).
  4. Gómez-Cadenas, A., Zentella, R., Walker-Simmons, M. K., Ho, T. H. D. Gibberellin/abscisic acid antagonism in barley aleurone cells: site of action of the protein kinase PKABA1 in relation to gibberellin signaling molecules. Plant Cell. 13, 667-679 (2001).
  5. Johnson, R. R., Shin, M., Shen, J. Q. The wheat PKABA1-interacting factor TaABF1 mediates both abscisic acid-suppressed and abscisic acid-induced gene expression in bombarded aleurone cells. Plant Mol. Biol. 68, 93-103 (2008).
  6. Harris, L. J., Martinez, S. A., Keyser, B. R., Dyer, W. E., Johnson, R. R. Functional analysis of TaABF1 during abscisic acid and gibberellin signaling in aleurone cells of cereal grains. Seed Science Res. 23, 89-98 (2013).
  7. Shen, Q., Casaretto, J., Zhang, P., Ho, T. H. D. Functional definition of ABA-response complexes: the promoter units necessary and sufficient for ABA induction of gene expression in barley (Hordeum vulgare). Plant Mol. Biol. 54, 111-124 (2004).
  8. Ritchie, S., Gilroy, S. Abscisic acid signal transduction in the barley aleurone is mediated by phospholipase D activity. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 95, 2697-2702 (1998).
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