제작 절차 및 복굴절 측정 자석으로 응답 란타넘족 이온 킬레이트 화 인지질 어셈블리 설계에 대 한

요약

자석으로 높은 반응 란타넘족 이온 킬레이트 화 polymolecular 어셈블리에 대 한 제작 절차 되 게 됩니다. 마그네틱 응답 nanopore 세포 막을 통해 밀어 남에 의해 맞게 어셈블리 크기에 의해 결정 됩니다. 어셈블리의 마그네틱 alignability 및 구조적인 변화 온도 유도 된 복굴절 측정, 핵 자기 공명 및 작은 각 중성자 뿌리기 무료 기법에 의해 감시 된다.

초록

Bicelles는 조정 디스크 같은 polymolecular 어셈블리 지질 혼합물의 큰 다양성에서 형성. 응용 프로그램 범위에서 핵 자기 공명 (NMR)에 의해 막 단백질 구조 연구 nanotechnological 개발 광학 활성 및 자석으로 전환 젤의 형성을 포함 하 여. 이러한 기술 어셈블리 크기, 자석 응답 및 열저항의 높은 관리가 필요합니다. 1, 2의 혼합물-dimyristoyl-sn-glycero-3-phosphocholine (DMPC)와 인지질 공액, 1, 2를 킬레이트 화는 란타넘족 이온 (Ln^{3 +})-dimyristoyl-sn-glycero-3-인-방법-신 triaminepentaacetate ( DMPE-DTPA), DMPC/DMPE-DTPA/Ln^{3 +} 같은 높은 자석으로 응답 어셈블리에 조립 (어 금 니 비율 4:1:1) bicelles. 콜레스테롤 (철-오)과 독특한 physico-화학 특성을 제공 하는 어셈블리의 다른 세트에서 bilayer 결과에 스테로이드 파생 상품의 소개. 주어진된 지질 구성에 대 한 자석 alignability bicelle 크기에 비례 이다. Ln^{3 +} 의 complexation 크기 및 정렬 방향 측면에서 전례 없는 자석 응답에 있는 결과. 난방 시 소포에 디스크와 같은 구조의 온도 가역 붕괴 정의 된 기 공 크기와 멤브레인 필터를 통해 압출 하 여 어셈블리의 치수의 조정 수 있습니다. 자석으로 alignable bicelles 기 선구자에 의해 정의 하는 어셈블리 차원에서 발생 하는 5 ° C에 냉각 하 여 다시 생성 됩니다. 여기, 그리고 어셈블리의 자석 alignability 5.5 T 자기장에서 복굴절 측정 하 여 정량이 제작 절차 설명 했다. 인지질 bilayer에서 발생 한 복굴절 신호는 더는 bilayer에서 발생 하는 polymolecular 변경 모니터링 수 있습니다. 이 간단한 기술은 이다 bicelles 하 고용 일반적으로 NMR 실험을 보완.

서론

Bicelles는 수많은 지질 혼합물에서 얻은 디스크 모양의 polymolecular 어셈블리. ^{1 , 2 , 3 , 4 , 5} 그들은 널리 NMR 분광학에 의해 생체 막의 구조 특성에 대 한 사용 됩니다. ^{6 , 그러나 7} , 최근 노력 하고자 가능한 응용 프로그램의 필드를 확장 합니다. ^{5 , 8 , 9} 가장 공부 bicelle 시스템은 1, 2의 혼합물의 구성 되어-dimyristoyl-sn-glycero-3-phosphocholine (DMPC), 구성 어셈블리 및 1, 2의 평면 부분-dihexanoyl-sn-glycero-3-phosphocholine (DHPC) 가장자리를 포함 하는 인지질.....

프로토콜

1. DMPC/DMPE-DTPA/Tm^{3 +} 제작 절차 (어 금 니 비율 4:1:1) 및 어셈블리 DMPC/철-오/DMPE-DTPA/Tm^{3 +} (어 금 니 비율 16:4:5:5) polymolecular

1. 사전 준비
   1. 에탄올으로 워시 홍 조에 의해 모든 유리 한번는 클로 프롬을 안정화 (> 99% 클로 프롬) 압축 공기 건조.
   2. 2 가지 10 mg/mL 재고 솔루션 DMPC와 DMPE-DTPA의 에탄올 안정 클로 프롬에 생산 (> 99% 클로 프롬), 에탄올 안정 클로 프롬에 철 오의 10 m m 재고 솔루션 (> 99% 클로 프롬)와 TmCl₃ 10 m m 재고 솔루션 메탄올입니다.
   3. 나트륨 디 인산이 수화물의 0.121 g 및 무수 디 나트륨의 0.599 g 초순 H₂o.의 100 mL에 수소 인산 염을 혼합 하 여 7.4의 pH 값에 50 m m 인산 염 버퍼를 준비
2. 건조 지질 필름의 준비
   1. 2.5 mL 유리 주사기 amphiphiles (DMPC, DMPE-DTPA, 그리고 선택적으로 철 오)와 Ln^{3 +} 재고 솔루션의 필요한 금액을 별도 3 mL 유리 스냅-컵....

결과

압출 비 DMPC/DMPE-DTPA/Tm^{3 +} 의 복굴절 신호 (어 금 니 비율 4:1:1) 샘플 난방 및 냉각 주기 5에서 ~ 40 ° C 및 1 ° C/min (그림 6)의 속도로 다시 동안 5.5 T 자기장에서 모니터링 했습니다. 복굴절 결과 1.5 x 10^-5, 배나 강한 보고 압출 시스템의 값이 있는 5 ° C에서 높은 자기 정렬 확인. ^{6 , 7 , 23} 24 ° C에서 DMPC의 T_m 위에 복굴절 신호 제로 비 alignable vesicles의 형성에 의해 발생 했다. 액체 무질서 단계의 운동 모양을 polymolecular 어셈블리에서 주요 재배열 트리거됩니다. 이 재배열은 온도.......

토론

복굴절 측정 했다 SAN과 함께에서 사용 하는 방법의 세부 계정을 생성 높은 자석으로 응답 Ln^{3 +} 어셈블리 Isabettini 외 에 인지질 킬레이트 화 하기 위한 방법을 평가 하 실험 ²³ 제안 된 제조 프로토콜은 또한 더 긴 DPPC와 DPPE DTPA 인지질으로 구성 하는 어셈블리에 대 한 또는 그들의 bilayer에 화학적 조작된 스테로이드 유도체를 포함에 대 한 적용 됩니다. ^{11 , 12 , 17 , 18 , 19} 하기만 하면 되는 샘플은 충분히 높은 온도에 열에 단계 1.3.2, 1.3.3, 1.3.4 1.4.2. 온도 건조 지질 필름 또는 샘플 .......

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
1,2-dimyristoyl-sn-glycero-3-phosphocholine (DMPC)	Avanti Polar Lipids	850345P	>99%
1,2-dimyristoyl-sn-glycero-3-phospho-ethanolamine-diethylene triaminepentaacetate acid hexammonium salt (DMPE-DTPA)Avanti	Polar Lipids	790535P	>99%
Thulium(III) chloride	Sigma-Aldrich	439649	anhydrous, 분말, 99.9 % 미량 금속 기초
디스프로슘 (III) 염화물	시그마 - 알드리치	325546	무수, 분말, 99.9 % 미량 금속 기초
이테르븀 (III) 염화물	시그마 - 알드리치	439614	무수, 분말, 99.9 % 미량 금속 기초
클로로포름	시그마 - 알드리치	319988	안정제로 에탄올, ACS 시약, ≥ 99.8%
메탄올	시그마-알드리치	34860	≥ 99.9%
콜레스테롤	Amresco	433	초순수 등급
D2O	ARMAR 화학 물질	1410	99.8 원자 % D
초순수	Millipore		Synergy pak2 (SYPK0SIX2), Millipack GP (MPGP02001)
전자 pH 측정기	Metrohm	17440010
Whatmann Nuclepore 25 mm 100nm 멤브레인 필터	VWR	515-2028
Whatmann Nuclepore 25mm 200nm 멤브레인 필터	VWR	515-2029
Whatmann Nuclepore 25mm 400nm 멤브레인 필터	VWR	515-2030
Whatmann Nuclepore 25mm 800nm 멤브레인 필터	VWR	515-2032
Whatmann 여과지	VWR	230600
25ml 둥근 바닥 플라스크	VWR	201-1352	14/23 NS
3ml 유리 스냅 컵	VWR	548-0554	ND18, 18x30mm
2.5ml 유리 주사기	Hamilton
나트륨 인산이 수소 이수화물	Merk	1.06342	인산염 완충액을 만드는 데 사용되는 소금
인산수소 이	Merk	1.06586	인산염 완충액을 만드는 데 사용되는 소금
액체 질소	Carbagas	-
가압 질소 가스	Carbagas-200		bar bottle
지질 압출기 10 ml	Lipex-thermobarrel
High-pressure PVC tube	NETUM-must	4 MPa
Serto adaptors	Sertot-Nitrile
gloves	VWR-2
ml glass pipettes	VWR	612-1702	230mm 길이의
다이오드 레이저	Newport	LPM635-25C
DSP 이중 위상 잠금 증폭기	SRS	SR830
포토다이오드 검출기	Silonex Inc.	SLSD-71N5	5mm2, 실리콘, 광전도
5.5 T 극저온 자기	극저온/Oerlikon AG-12		bar He-냉각. RW4000/6000 압축기, RGD 5/100 TA 극저온 헤드
2차 저역 통과 필터	가정용		선형 전원 공급 장치 24V DC, 2차 주문, Sallen Key, 차단 주파수 360Hz, +/- 12V, 최대 10mA
광탄성 변조기	Hinds 기기	PEM-90
Glan-Thompson 방해석 편광자	Newport	10GT04	25.4mm 직경
석영 샘플 큐벳	Hellma	165-10-40	온도 제어 셀, 0.8 ml, 10mm 경로 길이
온도 프로브	Thermocontrol-Type		K, 0.5mm 직경, Thermocoax
Non-polarizing mirrors	Newport	50326-1002	25.4mm
RS 232 케이블	National Instruments	189284-02	Compact FieldPoint 컨트롤러 BNC 50 &Omega 전면의 RS-232 포트에 연결
용; 케이블 및 커넥터	National Instruments	763389-01
cFP-AI-110	내쇼날인스트루먼트	777318-110	Compact FieldPoint용 8개 채널 아날로그 전압 및 전류 입력 모듈
cFP-CB-1	내쇼날인스트루먼트	778618-01	Compact FieldPoint I/O
cFP-CB-3	내쇼날인스트루먼트	778618-03	cFP-TC-120 모듈에 열전대를 배선하기 위한 통합 등온 커넥터 블록
cFP-TC-120	National Instruments	777318-120	Compact FieldPoint용 8채널 열전대 입력 모듈
cFP-1804	NI		Compact용 이더넷/시리얼 인터페이스
LabView 2010	National Instruments-Industrial
power 공급	Traco Power	TCL 060-124	100-240V AC
수조	Julabo	FP40-HE	냉장/난방 순환기

나트륨 GR resistant with 성 와이어링용 통합 커넥터 블록 , , , , , , ,