우발적인 촬영 phytohormone 치료 없이 ipecac의 internodal 세그먼트에 유도 될 수 있다. 우발적인 촬영 형성 동안 phytohormone 역학을 평가 하기 위해 내 생 auxin 및 LC-MS/MS에 의해 internodal 세그먼트에서 시 토 키 닌을 측정 했습니다.
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이 논문에서
요약
초록
우발적인 촬영 형성 유전자 변형 식물의 재생 및 경제적으로 중요 한 작물의 전파에 대 한 중요 한 기술입니다. Phytohormone 치료는 대부분의 종에서 우발적인 촬영의 유도 필요 합니다. Auxin과 시 토 키 닌 (CK) 사이의 균형에 의해 결정 됩니다 여부 우발적인 촬영 유도 될 수 있는 수준. 많은 노력 결정 최적 농도 및 explants로 사용 하는 각 조직에 각 식물 종에 phytohormones의 조합으로 간다. 그러나 Ipecac에서, 우발적인 촬영 수 유도 될 phytohormone 치료 없이 문화 매체에서 internodal 세그먼트에. 평가할 셀 차별화 ipecac의 고유한 소성 수 있습니다. Ipecac 우발적인 촬영 유도, 우리 phytohormone 무료 B5 중간 5 주 동안 0.2 %gellan 껌으로 고형화에 14 h 빛/10-h 어두운 주기에 internodal 세그먼트 15 µmol m−2의 − 1 의 빛에서 24 ° C에서 경작. 우발적인 촬영 형성 동안 phytohormone 역학 조사, 우리 생 indole-3-아세트산 및 CKs 세그먼트에 의해 측정 액체 크로마토그래피 탠덤 질량 분석 LC-MS/MS. 이 메서드는 간단한 방식으로 생 indole-3-아세트산 및 CKs 레벨의 분석을 수 있습니다. 그것은 다른 식물 종에 organogenesis 동안 내 생 auxin과 CK의 역학 조사에 적용할 수 있습니다.
서론
고트 Haberlandt (1854-1945 년) "totipotency", 어떤 식물에 의해 세포 수, 차별화, 분열과 성숙한 식물1에서 특정 세포 유형으로 차별화 그들의 이전 후에 전체 식물을 재생성의 개념을 제안 했다. 조직 문화에서 조합 및 성장 매체에 적용 된 것 phytohormones의 농도 의해 결정 됩니다 여부 식물 재생 여부 유도 될 수 있다. Skoog와 밀러 우발적인 뿌리 매체 포함 된 낮은 비율2에 유도 될 수 있는 반면 우발적인 촬영에 auxins, CKs의 높은 비율을 포함 하는 문화 매체에 굳은 살 담배에서에서 유도 될 수 있는 발견. 그 발견 이후 조직 문화는 널리 이용 된다 경제적으로 중요 한 작물의 전파 및 유전자 변형 식물3의 재생. 우발적인 촬영 촬영 정점 분열 조직, 잎, 뿌리, internodes 등 다른 조직에서 유도 될 수 있다. Phytohormone 치료는 대부분의 식물 종에서 우발적인 촬영의 유도 필요 합니다. 그러나, 최적 농도 조합 다 종에 의해 및 explants로 사용 하는 조직 중. 따라서, 많은 노력 결정 최적 농도 실험에 대 한 phytohormones의 조합으로 간다.
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프로토콜
참고: Ipecac (C. ipecacuanha)에 사용 되었다이 연구 생 phytohormones의 분석을 용이 하 게 하기 때문에.
1. 성장 조건 Ipecac의 우발적인 촬영 유도
- PH 5.710, 조정 phytohormone 무료 B5 매체를 준비 하 고 0.2 %gellan 껌을 추가. 압력가 마로 소독 하 여 소독.
- 멸 균 페 트리 접시 (90 m m × 20 m m)에 압력가 하는 매체의 25 mL를 붓으십시오.
- Ipecac plantlets 수술 메스를 사용 하 여 살 균 아크릴 플레이트에 블레이드 번호 22의 8 밀리미터 internodal 세그먼트를 잘라내어 매체 (그림 1)에 배치.
- 24 ° C 15 µmol m−2의 − 1 5 주 동안 14 h 빛/10-h 어두운 주기에서 빛의 아래에 B5 매체 phytohormone 무료에 문화.
- 지역 식별 난 (꼭대기) 4 (기저) 각 세그먼트 (그림 1B). 일주....
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결과
1세인트 주에서 아니 우발적인 촬영 형성 했다. 2노스다코타 주에 작은 쏘고 나타났다. 3rd , 4번째 주에 수 꼭대기 지역 (I 및 II)에서 주로 증가 쏘고 (그림 2A). 5일 주에 수 촬영의 되었고 약 7 시내 지역 나 지역 II (그림 2B) 5. 대조적으로, 단지 몇 가지 촬영 영역 III 및 IV에에서 형성 되었다.
문화, 전에 IAA 수준 높았다 약간 지역에서 난 (4.1 pg/mg, 신선한 무게 (FW)) 보다 지역 II-4 (~ 2.5 pg/mg FW;
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토론
Phytohormones의 분포를 식별 하기 위해 organogenesis에 관련 된 그것은 적용 될 때 phytohormones는 것 유도 위한 explants 때문에 있는 organogenesis phytohormone 무료 매체에 관찰 될 수 있다 식물 재료를 사용 하는 것이 중요 촬영 또는 뿌리, 그들은 전체 explant을, 세포 분화 및 organogenesis에 있는 식물의 고유한가 소성을 평가 하 고 어려운 영향을 미칩니다. 우발적인 촬영 phytohormone 무료 문화 미디어 Dianthus caryophyllus L.11, Aegle marmelos (L.) 코레아12, Bacopa monnieri (L.) Pennell13, 다른 식물 종에서에 유도 될 수 있다 노박 paniculatus Willd.
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공개 사항
저자 들은 관심 없음 충돌 선언 합니다.
감사의 글
우리는 그들의 기술 지원에 대 한 응용된 생물 과학 부, 도요 대학, 군마 농업 기술 센터의 씨 Koudai 타 니 구치의 씨 아키라 무라카미에 감사. 우리는 또한 그들의 제안에 대 한 교수 Shosaku Kashiwada 박사 우 Maheswari Rajagopalan, 도요 대학에 감사입니다. 이 연구는 생명 및 환경 과학, 도요 대학에 대 한 연구 센터에 의해 부분에서 지원 되었다.
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재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| [2H5]인돌-3-아세트산 | Olchemlm Ltd | 031 1531 | LC-MS/MS에 대한 내부 표준 |
| [2H5]trans-zeatin | Olchemlm Ltd | 030 0301 | LC-MS/MS에 대한 내부 표준 |
| [2H5]trans-zeatin riboside | Olchemlm Ltd | 030 0311 | LC-MS/MS에 대한 내부 표준 |
| [2H6]N6-isopentenyl adenine | Olchemlm Ltd | 030 0161 | 내부 표준 LC-MS/MS |
| [2H6]N6-이소펜테닐 아데노신 | Olchemlm Ltd | 030 0171 | LC-MS/ |
| MS 인돌-3-아세트산 | Wako | 098 00181 | LC-MS/ |
| MS 트랜스-제틴 | 표준 SIGMA-ALDRICH | Z0876 5MG | 표준 LC-MS/ |
| MS 트랜스-제틴 리보사이드 | Wako | 262 01081 | 표준 LC-MS/MS |
| N6-이소펜테닐 아데닌 | SIGMA-ALDRICH | D7674 1G | 표준, LC-MS/MS |
| N6-이소펜테닐 아데노신 | ACROS ORGANICS | 22648 1000 | LC-MS/MS |
| 용 표준, LC-MS용 아세토니트릴 하이퍼그레이드, LiChrosolv | MERCK | 1.00029.1000 | LC-MS/MS용 용매 |
| 크로마토그래피용 물, LiChrosolv | MERCK | 1.15333.1000 | LC-MS/MS HPLC |
| 용 용매SHIMADZU | Prominence | ||
| MS | Sciex | 3200QTRAP | |
| Oasis HLB 30 mg/1 cc | Waters | WAT094225 | 카트리지 컬럼 |
| Oasis MCX 30 mg/1 cc | Waters | 186000252 | 카트리지 컬럼 |
| 스크류 넥 총 회수 바이알 | Waters | 186002805 | |
| 블루, 12 x 32mm 스크류 넥 캡 및 PTFE/실리콘 격막 | Waters | ||
| Acquity UPLC BEH C18, 2.1x100mm | Waters | 186002350 | UPLC 컬럼 |
| Proshell 120 EC-C18, 2.1x50mm | Agilent | 699775-902 | UPLC 컬럼 |
| 디지털 현미경 | Leica | DHS1000 | |
| TissueLyser II | QIAGEN | 85300 | |
| 수술용 블레이드 | Feather | No. 22 | |
| 메스 손잡이 | Feather | No. 4 | |
| Savant SpeedVac/Refregerated vapor trap | Thermo Fisher Scientific | SPD111/RVT4104 | 진공 농축 |
| 일회용 유리 tobe (13x100 mm) | IWAKI | 9832-1310 | |
| 멸균 페트리 접시 | INA OPTICA | I-90-20 |
참고문헌
- Haberlandt, G. Kulturversuche mit isolierten Pflanzenzellen. Sitzungsber. Math.-Naturwiss. Kl. Akad. Wiss. Wien. 111, 69-92 (1902).
- Skoog, F., Miller, C. O. Chemical regulation of growth and organ formation in plant tissues cultured in vitro. Symp Soc Exp Biol. 11, 118-130 (1957).
- Ganeshan, S., Caswell, K. L., Kartha, K. K., Chibbar, R. N. Transgenic plants and crops
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재인쇄 및 허가
