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방법 논문

Orthotopic의 쥐 모델 간 이식 Suprahepatic 베 나 정 맥 재건에 대 한 새로운 자석 문 합 기술을 사용 하 여

10K 조회수

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DOI:

10.3791/56933

⸱

2018년 3월 19일

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1Shaanxi Provincial Center for Regenerative Medicine and Surgical Engineering, First Affiliated Hospital, Xi'an Jiaotong University, 2Institute of Advanced Surgical Technology and Engineering, First Affiliated Hospital, Xi'an Jiaotong University, 3Department of Hepatobiliary Surgery, First Affiliated Hospital, Xi'an Jiaotong University, 4Organ Transplantation Center, Tianjin First Center Hospital

* These authors contributed equally

이 논문에서

요약

Suprahepatic 베 나 정 맥 (SHVC)의 재건 쥐 orthotopic 간 이식에 어려운 단계에 남아 있다. 이 문서에서 우리는 소설 자석 문 합 기술을 사용 하 여 쥐에서 SHVC 재건에 대 한 단계별 프로토콜을 보여줍니다.

초록

Orthotopic 간 이식 (OLT)의 쥐 모델 이식 연구를 위해 필수적 이다. 그것은 매우 정교한 동물 모델 하 고 가파른 학습 곡선을 필요로 합니다. 문맥 (PV) 및 infrahepatic 베 나 정 맥 (IHVC)의 문 합에 대 한 갑 기술 도입 방식이 크게 쥐에 이식 절차 간소화. 그러나, 받는 사람의 suprahepatic 베 나 정 맥 (SHVC)의 짧은 앞쪽 벽으로 인해 갑 기술은 매우 어렵습니다는 SHVC의 재건을 위해 사용 하. 이 분야에서 대부분 연구에서는 여전히 손을 봉합 기술을 사용 하 여 SHVC 재건, 그것에 게 쥐 orthotopic 간 이식에서 병목 단계에 대 한. 마그네틱 문 합 기술 (즉, magnamosis) 두 배 두 자석 사이 매력적인 힘을 사용 하 여 연결 하는 방법 이다. 우리의 최근 연구 자석 문 합 기술은 이다 우수한 쥐에 SHVC 재건에 대 한 손 봉합 기술을 보이고 있다. 이 문서에서 우리는 소설 자석 문 합 기술을 사용 하 여 쥐에서 SHVC 재건에 대 한 단계별 프로토콜을 보여줍니다. 이 모델에 PV와 IHVC의 개조는 담 즙 덕트 (BD)의 재건 텐트 기술에 의해 수행 하는 동안 표준 팔목 기술에 의해 수행 되었다. 간장 재 arterialization은 수행 되지 않습니다. 마그네틱 문 합 기술 SHVC 재건 훨씬 쉽게 하 고 anphepatic 단계를 크게 단축. 합리적인 학습 곡선 후 고급 microsurgical 기술 없이 연구자는 OLT의이 쥐 모델을 사용 하 여 안정적이 고 재현 가능한 결과 생성할 수 있습니다.

서론

Orthotopic 간 이식 (OLT)의 쥐 모델 이식 연구1,2에 대 한 필수적입니다. 첫 번째 쥐 OLT 리 외. 19733에 의해 설명 되었다. 그 모델에 모든 선박 손 봉합 기술에 의해 재건 되었다. 손 봉합 기술을는 크게 그것의 이용을 제한 하는 고급 microsurgical 기술을 필요로 한다. 그 이후, 쥐 OLT의 원래 프로토콜에 대 한 다양 한 수정 보고 되었습니다. 그것은 크게4 재건축 절차 간소화 그들 가운데, 포털 정 맥 (PV) 및 infrahepatic 베 나 정 맥 (IHVC) 지금도 외. 1979 년에 보고의 문 합에 대 한 갑 기술이이 모델에 대 한 개선 간주 됩니다. . 그러나, 받는 사람의 suprahepatic 베 나 정 맥 (SHVC)의 짧은 앞쪽 벽으로 인해 갑 기술은 매우 어렵습니다는 SHVC의 재건을 위해 사용 하. 이 분야에서 대부분 연구에서는 여전히 손 봉합 기술을 사용 하 여 병목 단계 게 쥐 OLT5,6,7에서 SHVC 재건에 대 한.

마그네틱 문 합 기술 (즉, magnamosis) 두 배 또는 2 개의 자석8,9,,1011사이 매력적인 힘을 사용 하 여 다른 관 구조를 연결 하는 방법 이다. 자기 힘은 점차적으로 압축 하 고 강한, sutureless 문 합12,13으로 개장 하는 조직. 이 압축 문 합 인간14,15에 효과가 입증 되었습니다. 우리는 한 쌍의 쥐에서 SHVC의 문 합에 맞게 자기 반지 디자인. 우리의 최근 연구 자석 문 합 기술은 이다 우수한 쥐 OLT16SHVC 재건에 대 한 손 봉합 기술을 보이고 있다. 이 문서의 목적은 소설 자석 문 합 기술을 사용 하 여 쥐에서 SHVC 재건에 대 한 상세한 단계별 프로토콜을 제공 하는 것입니다.

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프로토콜

프로토콜 관리 및 실험 동물의 사용에 대 한 지침에 따라 실시 하 고 윤리의 동물 실험의 서 안 교통 대학, 서 안, 산시 성, 중국에 위원회에 의해 승인 되었다.

참고:이 프로토콜의 절차의 수술 현미경 아래에서 수행 되었다.

1. 수술 전 준비

  1. 디자인과 모양 자석 링 (그림 1)의
    1. 네오디뮴-철-붕 소 자석 링의 쌍을 일치 하 여 자기 문 합 장치를 조립.
    2. 주요 축 직경와 부 축 직경, 두께 8 m m, 5.5 m m, 1 mm, 0.5 g의 무게 쥐 SHVC의 매개 변수에 따라 반지를 각각 디자인 합니다.
    3. 와이어 전극 가공 기술에 의해 원하는 모양에 고리를 곡선 다음 티타늄 산화물 에어브러쉬와 얻은 반지 코트 하 고 6 h 55-60 ° C에서 500 mg/L 에틸렌 산화물과 소독.
  2. (그림 2) 수 갑
    1. 팔목을 폴 리 에틸렌 튜브를 절단 하 여 IHVC와 PV의 문 합에 대비 합니다. 팔목 바디 5 m m 인지 확인 2 mm 갑 확장명이 오래.
      참고: 태양광 팔목의 내부 및 외부 직경은 1.8 및 2.1 m m, 그 동안 IHVC 팔목의 2.6 및 2.8 m m, 각각.
  3. 텐트 (그림 2)
    1. 양쪽 끝에 경사를 생산 하는 BD의 문 합 5 mm의 길이 절단 24 G 정 맥 정 맥에 의해는 텐트 준비.
  4. 실험 동물
    1. 기증자로 250과 280 g와 수신자 사이 무게 남성 Sprague Dawley 쥐를 사용 합니다. 기증자 보다 받는 사람이 동일한 무게 또는 약간 무거운 (< 10 g) 인지를 확인 합니다.
    2. 음식과 수술 전에 물에 기후 제어 객실에서 쥐를 유지.

2. 기증자 작업

  1. 주입 buprenorphine (0.05 mg/kg) 피하는 진통제로 작업 하기 전에 1 시간 있습니다.
  2. Isoflurane 흡입에 의해 기증자 쥐를 anesthetize. 마 취 및 유량 0.6-0.8에서 2 vol %isoflurane 유도 유리 상자에 1.5 L/분의 유량에 사용 5 vol % isoflurane L/원뿔에 분 마 취의 유지 관리를 위해 마스크. 발가락 핀치와 피부 핀치를 수행 하 여 마 취의 깊이 확인 합니다.
  3. 청소기 노출에 대 한 허용 하는 전기 면도기를 사용 하 여 쥐의 전체 복 부 피부를 면도. Povidone-요오드 솔루션 해당 피부 소독.
  4. 따라 xiphisternum 위에 1 ㎝를 확장 하는 성 기의 뿌리에서 수술가 위를 사용 하 여 십자형 절 개를 통해 복 부 구멍을 열고 교육 알바, midaxillary 라인 세로 절 개의 중간점에서 연장. Exteriorize 왼쪽에 위장 하 고 젖은 거 즈로 그것을 커버.
  5. 클램프 및 xiphisternum hemostatic 집게를 사용 하 여 머리 쪽으로 당겨. Falciform 인 대와 간 주위 결합 조직 해 부. 분리 하 고 6-0 비단 봉합으로 왼쪽된 열 등 한 인할지 정 맥 선.
  6. 담 관에는 스 텐트를 삽입 합니다.
    1. Gastroduodenal 정 맥은 문맥을 조인 지점 바로 위에 BD 클램프 하 고는 microforceps를 사용 하 여 약간 긴장을 유지 하기 위해 그것을 당겨. 다음 마이크로 위 여 약 5mm 담 즙 합류에 인접 앞쪽 벽에 길이 1 m m의 절 개를 "V"를 수행 합니다.
    2. 곡선된 microforceps를 사용 하 여 담 즙 덕트의 루멘으로는 스 텐트를 삽입 합니다. 담 즙 덕트 외부 텐트 거짓말의 반 이상 있는지 확인 합니다.
    3. 6-0 비단 봉합으로 텐트를 보호 합니다. 봉합의 한쪽 끝을 잘라. 나중에 문 합 중 다른 하나를 유지. 텐트 아래 담 즙 덕트 transect 고 담 즙은 텐트에서 올 수 있는지 확인 하십시오.
  7. 왼쪽된 신장 정 맥 수준 IHVC를 격리 합니다. IHVC skeletonized 때까지 면 뇌 해 부에 의해 전방 및 측면 주위 조직에서 IHVC를 무료. 바로 suprarenal 정 맥 및 6-0 비단 봉합으로 오른쪽 신장 정 맥 선 고 합니다.
  8. 헤 파 린 음 경의 등 쪽 정 맥을 통해 정상적인 염 분 해결책의 2 mL에 희석의 주입 50 U 쥐를 heparinize.
  9. 간 perfuse
    1. 왼쪽된 신장 정 맥 아래 복 부 대동맥을 격리 합니다. 대동맥에 22-G 카 테 터를 삽입 합니다.
    2. thoracotomy 수행, 클램프는 microforceps를 사용 하 여 흉부 대동맥.
    3. 3 mL/min의 속도로 주입 펌프와 헤 파 린 (4 ° C)의 U 25를 포함 하는 정상적인 염 분 솔루션의 20 mL와 대동맥에서 카 테 터를 통해 기증자 간을 perfuse. 한편, 관류 솔루션 간에서 흐름 수 있도록 오른쪽 신장 정 맥 아래 베 나 정 맥을 잘라.
    4. Transect 횡 경 막의 일부와 함께 SHVC 및 IHVC 왼쪽된 신장 정 맥의 수준에서 기증자 간 되었다 pallid.
  10. 두 개의 마이크로 포 셉으로 PV를 둘러싼 결합 조직 해 부. 선 고는 8-0 prolene 봉합으로 pyloric 혈관을 나눕니다. 비장 정 맥의 수준에서 PV transect 기증자 간 소비 세 고 차가운 정상적인 염 분 해결책으로 그것을 씻어. 차가운 식 염 수에 4 ° c.를 목욕 하는 곳

3. 이식 준비

참고: 4 ° c.에 차가운 식 염 수 목욕에서 간 이식 준비를 위한 모든 절차 수행

  1. 기증자의 IHVC (그림 3)에 팔목을 연결 합니다.
    1. 간 쪽으로 향하고 팔목 확장명이 팔목에는 IHVC를 삽입 합니다. IHVC의 후부 벽에 팔목 확장을 배치 합니다. 팔목 확장과 IHVC 곡선된 microforceps 목욕 컨테이너 파일 클립을 사용 하 여 연결 자체를 해결할.
    2. 두 개의 마이크로 집게를 사용 하 여 팔목 몸에 IHVC의 선단부를 evert.
    3. 6-0 비단 봉합으로 가장자리를 보호 합니다. IHVC 과정에서 왜곡 하지는 다는 것을 확인 하십시오.
  2. 기증자의 PV에는 팔목을 연결할 PV에 3.1 단계를 반복 합니다.
  3. 마그네틱 링 기증자의 SHVC (그림 4)에 연결 합니다.
    1. 4 개의 집게를 통해 횡 경 막을 당겨 하 고 트림은 SHVC.
    2. 티타늄 합금 마이크로 집게를 사용 하 여 자기 반지를 통해 SHVC를 전달 합니다.
    3. 반지에는 SHVC의 선단부를 evert.
    4. 6-0 비단 봉합으로 반지를 보안 합니다. SHVC 과정에서 왜곡 하지는 다는 것을 확인 하십시오.
    5. 간 주위 초과 다이어 프 램을 제거 합니다.
  4. 감기 정상적인 염 분 목욕에 기증자 간 담가 그리고 4 ° c.에 저장

4. 받는 사람 작업

참고: 받는 사람 쥐에 이식 이식의 스키마는 그림 5에 표시 됩니다.

  1. 주입 buprenorphine (0.05 mg/kg) 피하는 진통제로 작업 하기 전에 1 시간 있습니다. Isoflurane 흡입에 의해 기증자 쥐를 anesthetize. 마 취 및 유량 0.6-0.8에서 2 vol %isoflurane 유도 유리 상자에 1.5 L/분의 유량에 사용 5 vol % isoflurane L/원뿔에 분 마 취의 유지 관리를 위해 마스크.
  2. 쥐의 전체 복 부 피부를 면도. Povidone-요오드 솔루션 해당 피부 소독.
  3. 4 cm 중간 절 개를 통해 복 부 구멍을 엽니다. 복 부 견인 기를 놓습니다. 갈비는 중간에서 가능한 멀리 떨어져 당겨.
  4. 클램프 및 xiphisternum hemostatic 집게를 사용 하 여 머리 쪽으로 당겨. 결합 조직 그리고 간 주위 인 대 해 부. 선 하 고 간을 식도 인 대를 나눕니다. 선 고는 8-0 prolene 봉합으로 간 동맥을 나눕니다.
  5. 첫 번째 간 포털에서 일반적인 담 관을 격리 합니다. 그것의 부분 바로 아래 일반적인 담 관 주위 6-0 비단 봉합 사 놓고 선 일반적인 담 관.
  6. 오른쪽 신장 정 맥으로 IHVC 해 부. 선 고 바로 부 신 정 맥을 나눕니다. 장소 간 SHVC에 스트랩.
  7. Microvessel 클립 오른쪽 신장 정 맥 바로 위에 IHVC 클램프. Microvessel 클립 pyloric 정 맥의 수준에서 태양광을 클램프.
    1. 간에서 피를, PV 통해 정상적인 염 분의 2 개 mL를 주사 천천히. 이전 배치 끈을 잡아 당겨 간 아래로 끕니다. Satinsky 클램프와 SHVC와 횡 경 막의 일부를 클램프.
    2. 실질 가까운 IHVC와 porta hepatis에 PV transect. 간 바로 위에 SHVC transecting에 의해 간 소비 세. 받는 사람 간에 신속 하 게 제거 합니다.
  8. 마그네틱 링 받는 사람의 SHVC에 연결 합니다.
    1. 자기 반지에 받는 사람의 나머지 SHVC를 삽입 합니다.
    2. 자기 매력에 의해 Satinsky 클램프에 자기 반지를 수정.
    3. 그릇의 가장자리를 커버까지 자석 반지에는 SHVC evert.
  9. 기증자 간 이식 orthotopically 놓고 차가운 젖은 거 즈로 그것을 커버 합니다.
  10. 정상적인 염 분 해결책에는 기증자와 받는 사람의 SHVCs의 루멘을 채우십시오. 공기 색 전 증을 방지 하기 위해 철저 하 게 공기 방울을 제거 합니다. 자기 힘을 통해 함께 기증자의와 받는 사람의 SHVC에 포함 된 자석 반지 커플링 여 SHVC 재건을 마무리.
  11. PV를 재구성 합니다.
    1. 요로 PV의 긴장을 유지 하는 8-0 prolene 봉합을 당겨 받는 사람의 PV의 오른쪽과 왼쪽 지점.
    2. 정 맥을 완전히 노출 하려면 pylorus 정 맥 비장 정 맥을 내려 받는 사람의 PV의 클램프를 이동 합니다.
    3. 받는 사람의 앞쪽 벽 incise 정상적인 염 분 해결책으로 PV의 루멘을 채우십시오.
    4. 기증자의 PV의 팔목 확장을 곡선된 집게로 잡으십시오.
    5. 일반적인 염 분으로 PV 루멘 홍 조 유지 하면서 받는 사람의 PV에 기증자의 PV의 팔목 본문을 삽입 합니다.
    6. 안전한 그것을 완곡으로 6-0 실크 합자. PV와 SHVC에 클램프를 발표 함으로써 이식 간 혈액 흐름을 다시 설정 합니다.
  12. 4.11 재구성은 IHVC IHVC에 단계를 반복 합니다.
  13. 텐트 기술에 의해 담 즙 덕트를 재구성 합니다.
    1. 받는 사람 일반적인 담 관의 앞쪽 벽에 "V" incise
    2. 받는 사람 BD의 루멘으로 기증자 텐트를 삽입 하 고 6-0 실크 원주 봉합으로 해결. 함께 두 개의 담 즙 덕트에는 봉합을 당겨 하 고 넥타이를 서로 가까이 BD 봉합.
    3. 담 즙 누출을 방지 하기 위해 anastomotic 사이트 omentum 조직 포장.
  14. 따뜻한 정상적인 염 분 해결책으로 복 강의 관개 복 부 절 개를 연속으로 2 층에서 3-0 비 흡수 되기 쉬운 외과 봉합을 닫습니다.
  15. 관리 16 mg/kg 세 (항생제)와 0.05 mg/kg buprenorphine (진통제) 작업 후 피하 주입에 의해 즉시.
  16. 쥐 깨끗 한 장에 음식 허용 놓고 광고 libitum물.
  17. 주사 세 (16 mg/kg) 및 buprenorphine (0.05 mg/kg) 복 부 구멍으로 3 일 동안 매일 12 시간.

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결과

약 10 번의 시도 후 SHVC 재건을 위한 마그네틱 문 합 기술은 성공적으로 이전 microsurgical 훈련 했다 연구원에 의해 마스터 했다. SHVC의 개조는 2 분 미만 했다. 받는 사람 쥐에 대 한 anhepatic 단계는 약 10 분 했다. 아니 혈전 증, 출혈 또는 angiostegnosis SHVC anastomotic 사이트에서 reperfusion 후 1, 5, 30 일에 관찰 되었다. 열 등 한 베 나 cavography는 이식 후 2 주에 수행 되었다. 그림 6에서 같이, 자석 반지 그대로, 그리고 혈액의 흐름은 SHVC 문 합을 통해 특허. 포스트 이식 생존 율은 95% 하루 1, 3, 일에서 90%에서 85% 일 7 ~ 30 (그림 7).

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토론

많은 임상 진행 간 이식 동물 연구를 지정할 수 있습니다. 쥐 OLT 장기 보존, 이식 면역학, 생리학과 병리학의 연구에서 널리 사용 되 고 잘 허용 모델 이다. 그러나, 그것은 또한 매우 복잡 한 절차 이며 고급 microsurgical 기술. 쥐 OLT의 절차에 많은 개선에도 불구 하 고 SHVC 문 합 도전 단계에 남아 있었다. 이 문서에서 우리는 쥐 OLT에서에서 SHVC 재건을 위한 새로운 자석 문 합 기술을 설명합니다. 이 기술의 응용 프로그램 SHVC 재건 2 분 미만 그리고 약 10 분을 쥐 OLT의 anhepatic 단계를 위한 시간 감소. 우리는이 기술을 이식 연구에 큰 의미를가지고 믿습니다.

SHVC의 재건을 위해이 자기 문 합 기법을 사용 하 여 중요 한 단계는 기증자와 받는 사람의 SHVC 자석 링 연결할 것입니다. 모든 주의 SHVC 왜곡을 피하기 위해 사용 되어야 한다. 또한, 두 개의 자석 링을 연결할 때 기포는 SHVC에서 제거 되어야 합니다 철저 ...

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공개 사항

저자는 공개 없다.

감사의 글

이 작품은 교육부의 교육 혁신 팀 개발 프로그램의 중국 (번호에서에서 교부 금에 의해 지원 되었다 IRT16R57), 중국 (No. 81470896), 그리고 연구의 국립 자연 과학 재단 기금에 대 한 젊은 인재 모집 계획의 서 안 교통 대학 (RW).

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재료

이 논문에 사용된 재료 목록
이름회사카탈로그 번호댓글
마취 기계Harvard  탁상용동물 마취
PLX7000B HF 모바일 디지털 C-arm 시스템Perlong MedicalPLX7000B주로
주사기 펌프민드레이BeneFusion SP5정맥 주입
IsofluraneRWD, 생명 과학 Co.마취제: 마취 유도 및 유지 보수를 위해
오헥솔상하이 종합 제약 회사  혈관 내 조영제   
헤파린 나트륨 주사SPH No.1 생화학 & 제약 Co., LTD   혈전증의 형성을 예방합니다 
세푸록시메 글락소 오퍼레이션 영국 리미티드 항생제
부프레노르핀 TIPR 제약 책임 유한 공사진통제
곡선 마이크로 집게상하이 의료 기기 (그룹) 주식 회사, 주식 회사W40350수술 도구
지혈 겸자 (스트레이트)Shanghai Medical Instruments (Group) Ltd., Corp.J31010수술 도구
지혈 겸자 (곡선)Shanghai Medical Instruments (Group) Ltd., Corp.J31020수술 도구
Satinsky 클램프상하이 의료 기기 (그룹) 주식 회사XEC050수술 도구
바늘 홀더Shanghai Medical Instruments (Group) Ltd., Corp.J32010외과 공구
microneedle 홀더Shanghai Medical Instruments (Group) Ltd., Corp.WBA040수술 도구
노치 겸자Shanghai Medical Instruments (Group) Ltd., Corp.J42010외과 공구
조직 겸자 (걸이 포함)Shanghai Medical Instruments (Group) Ltd., Corp.J41010수술 도구
조직 가위Shanghai Medical Instruments (Group) Ltd., Corp.Y00040외과 도구
외과용 가위Shanghai Medical Instruments (Group) Ltd., Corp.Y00030수술 도구
마이크로 가위Shanghai Medical Instruments (Group) Ltd., Corp.MR-S121T수술 도구
마이크로 혈관 클립Shanghai Medical Instruments (Group) Ltd., Corp.XEC240수술 도구
스트레이트 마이크로 콤펜시(티타늄 합금)Shanghai Medical Instruments (Group) Ltd., Corp.WCC010수술 도구
곡선형 마이크로펜치  (티타늄 합금)Shanghai Medical Instruments (Group) Ltd., 주식 회사WCC020수술 도구
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참고문헌

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