방법 논문

고해상도 Respirometry 천연 화합물 존재 그대로 베타 세포의 미토 콘 드리 아 기능을 측정 하

DOI:

10.3791/57053

⸱

2018년 1월 23일

 ,  ,  , 
1Nutrition, Dietetics and Food Science Department, Brigham Young University

이 논문에서

요약

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

이 프로토콜의 목표 고해상도 respirometry를 사용 하 여 그대로 832/13 베타 세포에 천연 화합물의 미토 콘 드리 아 호흡을 중재 하는 포도 당 변경의 효과 측정 하는 것입니다.

초록

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고해상도 respirometry 고립 된 미토 콘 드리 아, 세포와 조직에의 산소 소비량의 측정에 대 한 수 있습니다. 베타 세포는 높은 포도 당 농도에 대 한 응답에서 인슐린 분 비를 통해 통제 혈액 포도 당 수준에 의해 신체에 중요 한 역할을 한다. 인슐린 분 비는 포도 당 대사 및 미토 콘 드리 아 호흡에 의해 제어 됩니다. 따라서, 본래 베타 세포 호흡 측정 당뇨병을 위한 치료로 베타 세포 기능을 향상 시킬 수 있을 필수적 이다. 그대로 832/13 기능-1을 사용 하 여 우리 세포 호흡에 포도 당 농도 증가의 효과 측정할 수 있는 베타 세포 파생. 이 프로토콜의 효과 결정 하는 하나를 수 있도록 다양 한 화합물의 유무에서 베타 세포 호흡 측정 수 있습니다 화합물 그대로 세포 호흡에 주어진. 여기 우리가 (2.5 m m) 낮은 또는 높은 혈당 (16.7 m m) 존재에서 베타 세포 호흡에 두 개의 자연적 사건 화합물, 단위체 epicatechin curcumin의 효과 보여줍니다. 이 기술은 다른 포도 당 농도 면 전에 서 그대로 베타 세포 호흡에 다양 한 화합물의 효과 결정 하기 위해 사용할 수 있습니다.

서론

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췌 장 베타 세포의 주된 목적은 포도 당 자극 인슐린 분 비를 통해 시스템 normoglycemia를 유지 하는 것입니다. 베타 세포 느낄 회람 포도 당 크게 낮은 선호도, 고용량 포도 당 운송업 자 GLUT2 때문에 생리 적 변화 (포도 당 운송업 자 2, Km 16.7 m m)1. 순환 포도 당 수준을 증가,이 높은-용량 낮은 선호도 전송 셀 내에 베타 세포내 포도 당에 있는 비례 증가 촉진 합니다. 포도 당 분해, TCA 사이클 (tricarboxylic 산 주기) 및 높은 세포질 ATP (아데노신 3 인산 염) 수준에서 발생 하는 미토 콘 드리 아 호흡 대사입니다. 높은 ATP 농도 ATP 민감한 K+ 채널, 막 도발은 결과 차단 합니다. 막 도발은 전압 Ca2 + 채널 개방 원인과 기의 후속 릴리스 바인딩된 인슐린과 립2. 베타 세포 기능 장애 제 2 형 당뇨병 (T2D), 각 인 이며, 감소 하 고 가난 하 게 통제 하는 인슐린 분 비 및 궁극적으로 베타 세포 죽음3. 유지 하거나 베타 세포 기능을 개선 하는 메커니즘 T2D에 대 한 치료로 사용 될 수 있습니다.

학문은 자연스럽 게 발생의 유익한 효과 설명 했다 췌 장 beta 세포4공장 기반 화합물. 이 화합물은 증가 베타 세포 증식, 생존, 또는 포도 당 자극 인슐린 분 비를 통해 그들의 효과 할 수 있습니다. 예를 들어, 최근 연구는 단위체 epicatechin 미토 콘 드리 아 호흡 증가 통해 포도 당 자극 인슐린 분 비를 강화 하 고5레벨 셀룰러 ATP를 증가 증명 하고있다. 따라서, 이러한 화합물 기능 베타 셀을 어떻게 증가할 수 있는지 이해 질량 잠재적인 치료로 이러한 화합물을 활용 하는 것이 중요 하다.

세포 호흡은 여러 가지 도구를 통해 측정할 수 있습니다. 고해상도 respirometer의 사용 permeabilized 또는 그대로 셀 인구6화학 변조기의 적정에 대 한 수 있습니다. 이 도구에 따라서 다양 한 정보를 제공 하는 다양 한 농도, 다양 한 화합물의 추가 허용 합니다.

포도 당 대사 및 베타 세포 기능 사이 친밀 한 연결을 감안할 때, 세포 호흡의 측정은 중요 합니다. 세포 호흡의 측정을 수행할 수 있습니다 갖는 각 고유한 장점과 단점7,8permeabilized 또는 그대로 베타 세포를 사용 하 여. 베타 세포의 permeabilization 전자 전송 체인의 다양 한 측면을 측정 한 수, 하는 동안 그것은 beta 세포 포도 당 통풍 관, 신진 대사 호흡을 유도 하는 메커니즘에 관계 없이 이렇게 한다. 따라서, unpermeabilized 베타 세포 호흡의 사용 다양 한 포도 당 수준, 판독으로 산소 소비를 사용 하 여 베타 세포 응답을 결정 하는 매우 유용한 기술입니다.

이 기법의 목적은 그대로 기능-1에서 산소 소비량을 측정 하 832/13 베타 세포 파생입니다. 이 기술은 수 있습니다 unstimulatory 포도 당 조건 (2.5 m m 포도 당)에 대 한 베타 세포의 응답 결정 물질로 포도 당 조건 (16.7 m m 포도 당) 뿐만 아니라. Unpermeabilized 셀 개별적으로 복잡 한 테스트를 허용 하지 않는 하는 동안 I, II 또는 III의 전자 수송 체인, 기술을 다루는 복잡 한 IV 억제 (Oligomycin A) 상태로 호흡 (FCCP 카보닐기 시안-측정 허용 않는다 4-(trifluoromethoxy) phenylhydrazone), 호흡 (Antimycin A) 완전히 저해. 이 연구에서는 베타 세포 호흡에 두 개의 자연적 사건 화합물, 단위체 epicatechin curcumin의 효과 뿐 아니라 그대로 unpermeabilized 췌 장 베타 세포, 호흡 측정의 효능을 보여 줍니다.

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프로토콜

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. 세포 배양

  1. 문화 기능-1 파생 832/13 베타 세포와 10% 태아 둔감 한 혈 청 (FBS), 1% 페니실린-스, 10 mM HEPES, 2mm 글루타민, 1 mM 나트륨 Pyruvate, 0.05 m m 2-mercaptoethanol9,10,11 보충 RPMI 1640 ,,1213.
  2. 완전 한 RPMI 1640 미디어의 8 mL을 추가 하 여 10 분 중화 트립 신에 대 한 37 ° C에서 배양 하는 0.25 %trypsin 2 개 mL를 사용 하 여 T75 플라스 크에서 832/13 셀을 제거 합니다.
  3. hemocytometer를 사용 하 여 셀을 계산 하 고 PBS의 단계 1.2에서 900 µ L에서 셀 볼륨의 100 µ L를 희석.
  4. 2 x 106 6에서 셀/mL의 조밀도에 접시 832/13 셀 잘 요리.
  5. 호흡 실험을 시작 하기 전에 셀에서 37 ° C, 5% CO2 습도 인큐베이터에서 48 h에 대 한 문화.

2입니다. 고해상도 Respirometry에 대 한 셀의 준비

  1. 코코아 파생된 epicatechin 단위체와 832/13 세포 치료.
    1. 37 ° C, 5% CO2습도 인큐베이터에서 도금 후 24 h에 대 한 832/13 셀 문화.
    2. 도금, 후 미디어 24 h 변경 하 고 차량 통제 (3 정) 또는 100 nM 코코아 단위체 (3 정), 37 ° C, 5% CO2습도 인큐베이터에는 추가적인 24 h (총 48 h)에 대 한 문화 뒤 832/13 세포 치료.
    3. 낮은 포도 당 분 비 분석 결과 버퍼 (SAB) 5 분 Aspirate 버퍼에 대 한 x 1에 832/13 세포를 세척 하 고 832/13 셀 3 h, 낮은 혈당 SAB x 1 매 시간 변경에 대 한 낮은 포도 SAB x 1에 품 어.
      1. 게 10 x SAB 33.32 g의 NaCl, KCl, KH2포4, MgSO4 의 0.7 g의 0.82 g 1.73 g H2O 500 mL의 최종 볼륨을 추가 하 고. 살 균 필터 마지막 해결책입니다.
      2. 만들기 1 낮은 포도 SAB SAB, 100 µ L의 45% 포도 당, 1 M HEPES, 1 mL의 2 mL x 10의 10 mL와 함께 x 0.25 M CaCl2, 35 %BSA 솔루션, NaHCO3 의 0.21 g의 0.57 mL의 H2O 100 mL의 최종 볼륨을 추가 하 고. 살 균 필터 마지막 해결책입니다.
  2. Curcumin와 832/13 세포 치료.
    1. 37 ° C, 5% CO2습도 인큐베이터에서 도금 후 48 h에 대 한 832/13 셀 문화.
    2. 832/13 5 분 Aspirate 버퍼에 대 한 낮은 포도 SAB x 1에 있는 셀을 세척 하 고 832/13 셀 3 h, 낮은 혈당 SAB x 1 매 시간 변경에 대 한 낮은 포도 SAB x 1에 품 어.
    3. 낮은 포도 SAB x 1에서 3 h 외피의 2.5 h, 후 버퍼를 발음 하 고 낮은 포도 당 SAB 차량 제어 또는 30 분 동안 40 µ M curcumin x 1에 있는 셀을 품 어. 부 화, 다음 버퍼 발음.
  3. 수확 하는 고해상도 respirometry에 대 한 트립 신 셀
    1. 낮은 포도 SAB x 1에서 3 h 부 화 후 잘 당 0.25 %trypsin 250 µ L로 접시에서 셀을 제거 합니다.
    2. 차량 제어 또는 15 mL 원뿔 튜브에 SAB의 4 mL와의 복합 치료 3 우물에서 트립 신에 셀 결합.
    3. hemocytometer를 사용 하 여 셀을 계산 하 고 PBS의 단계 2.3.2에서 900 µ L에서 셀 볼륨의 100 µ L를 희석.
    4. 낮은 포도 SAB 각 챔버에 대 한 적절 한 농도에서 3 mL을 x 1에 있는 셀의 적절 한 수를 희석. 데이터 1 x 106 셀/mL의 농도 가장 효과적인 방법을 보여 줍니다.
  4. 고해상도 respirometry에 대 한 기계적 분리 된 세포를 수확
    1. 1 x에서 3 h 부 화 후 낮은 포도 SAB, 1 x 각 낮은 포도 당 SAB 잘하고 부드럽게 1000 µ L 피 펫 팁 pipetting으로 기계적 분리와 접시에서 셀 타격의 1 mL를 추가 합니다.
    2. 차량 통제로 또는 호흡에 대 한 15 mL 원뿔 튜브 3 mL SAB의 총에 대 한 관심의 복합 치료 3 우물에서 세포를 결합 한다.

3. 고해상도 Respirometry

  1. 고해상도 respirometer의 준비입니다.
    1. 켜고 고해상도 respirometer respirometer 분석 프로그램을 실행 하 여 바탕 화면에 연결.
    2. 두 약 실 전부에서 70% 에탄올 발음 이 약 실은 45 분의 최소 70% 에탄올에 담근 다.
    3. 각 단계 후 발음 70% 에탄올으로 두 번 챔버 세척.
    4. DdH2O, 각 단계 후 발음과 세 번 챔버 세척.
    5. DdH2오 챔버 plungers 린스 이 plungers와 티타늄 포트에서 잔여 에탄올을 정리합니다.
  2. Polarographic 산소 센서의 구경 측정입니다.
    1. 지속적으로 사용 하 여 자기 볶음 바 데이터 기록 간격 750 rpm 고 37 ° C에서 약 실에 있는 2.0에서 버퍼를 교 반 각 oxygraph 챔버에 낮은 포도 당 SAB 버퍼 x 1의 2.4 mL을 추가 F7 버튼을 탭 열기 s 분류 "시스템". Plungers를 밀어 모든 방법에서 후 렌치 폭 설정에 철회 하 고. 안정적인 산소 유량을 얻을 때까지 1 시간 최소 equilibrate 기계를 하자.
    2. 37 ° C에 실험의 기간에 대 한 기계를 설정 합니다. 800 분극 전압 설정 F7 버튼을 "산소, O2"탭을 열고 2의 이득을 mV. 산소 농도 변화는 안정 되어 있는 하는 동안 적어도 30 분 동안 SAB 버퍼의 산소 농도 equilibrate (2 pmol/(s*mL)).
    3. 산소 농도 안정화에 따라 산소 농도의 변화는 안정 산소 농도 변화의 배경 측정을 설정 하는 영역을 선택 합니다.
      1. Shift 키를 누른 다, 왼쪽 마우스를 클릭 하 고 선택된 영역에서 마우스를 드래그 하 여 영역을 선택 합니다. 두 챔버의 각각에 해당 하는 각 추적에 대 한 선택한 지역 및 변경 "r1"와 관련 된 문자를 클릭 하십시오.
      2. 왼쪽 하단에 있는 "O2 교정" 상자를 두 번 클릭 하 고 스크린의 모서리를 마우스 오른쪽, r 1으로 "공기 교정"에 대 한 "선택 표시" 버튼을 클릭 고 두 약 실 전부에 대 한 "보정 하 고 클립보드에 복사"를 선택 합니다.
  3. 2.1.5 또는 2.2.5 832/13 베타 세포의 호흡의 평가 단계에서 준비.
    1. 1 x 낮은 포도 당 SAB.에 각 약 실 (한 실 제어 차량 취급 셀, 복합 치료 세포 한 챔버)에 샘플의 2.4 mL 로드 기계적 분리 방식 (-20 ° C에서 측정 후 동결)를 사용 하 여 경우 BCA (Bicinchoninic 산) 분석 결과 의해 단백질 정량에 대 한 셀 샘플의 0.5 mL를 유지 합니다.
      1. 모든 방법으로 플런저를 밀어 하 고 잔류 볼륨 발음. 750 rpm 및 모든 후속 단계에 대 한 37 ° C에서 실험을 통해 지속적으로 세포를 저 어. F 4를 클릭 하 여 샘플 로드 되 면 "세포"로 라벨 표시를 확인 합니다.
      2. 30 분에 대 한 샘플을 측정 합니다. 신호 안정화 후 3.2.3에 설명 된 대로 낮은 포도 당 조건 (2.5 m m 포도 당)에 해당 하는 산소 농도 변화의 영역을 선택 합니다.
    2. 신호 안정화에 도달 하면 주사기를 사용 하 여 포트 로드 티타늄 통해 각 챔버에 45% 살 균 포도 당 솔루션 (16.7 m m 최종 농도)의 12.5 µ L를 추가 합니다. 확인 표시 측정 치료 추가 3.3.1에 설명 된 대로 "포도". 하자 신호 안정화 및 안정 되어 있는 산소 플럭스 달성 될 때까지 세포 호흡을 기록. 3.2.3에 설명 된 대로 산소 농도 변화는이 영역을 선택 합니다. 이것은 16.7 m m 포도 당 독서 하 고 물질로 조건7해당 합니다.
    3. 신호 안정화에 도달 하면 5mm oligomycin (2.5 최종 농도) 각 챔버로 로딩 포트를 통해의 1 µ L를 추가 합니다. 확인 표시 측정 처리 추가 3.3.1에 설명 된 대로 "OligoA". 하자 신호 안정화 및 안정 되어 있는 산소 플럭스 달성 될 때까지 세포 호흡을 기록. 3.2.3에 설명 된 대로 곡선의이 영역을 선택 합니다. Oligomycin A 억제 ATP synthase 이며 따라서 발생 하는 유일한 산소 유량 전자와 아닌 산화 인 산화7의 누설을 통해.
    4. 신호 안정화에 도달 하면 최대 호흡 율 설정 될 때까지 1 µ L 단위로 1mm FCCP 추가 합니다. 이 최대한 uncoupled 호흡을 나타냅니다. 3-4 µ L 사이 FCCP 충분 한 (1.5-2.0 µ M 최종 농도) 기능-1 832/13 셀의 최대 uncoupled 호흡을 유도 하는 것 이다. 처리 추가 3.3.1에 설명 된 대로 "FCCP" 표시 마크를 확인 합니다. 하자 신호 안정화 및 안정 되어 있는 산소 플럭스 달성 될 때까지 세포 호흡을 기록. 3.2.3에 설명 된 대로 곡선의이 영역을 선택 합니다. FCCP 연결을 푸는 에이전트입니다. 이 uncoupled 호흡7을 측정할 수 있습니다.
    5. 신호 안정화에 도달 하면 로드 포트를 통해 각 실에 1 µ L 5mm Antimycin A (2.5 최종 농도)를 추가 합니다. 처리 추가 3.3.1에 설명 된 대로 "AntiA" 표시 마크를 확인 합니다. 하자 신호 안정화 및 안정 되어 있는 산소 플럭스 달성 될 때까지 세포 호흡을 기록. 3.2.3에 설명 된 대로 곡선의이 영역을 선택 합니다.
      참고: Antimycin A 시 토 크롬 C 환 원 효소, ubiquinone 산화를 억제 한다 모든 호흡을 차단. 호흡7을 완전히 막을 수 있습니다.
  4. 832/13 베타 세포 단백질 농도 호흡 정규화에 대 한 측정.
    1. 샘플 측정 단백질 샘플13BCA 메서드 사용 하 여 로드 시 유지의 0.5 mL를 사용 하 여.
    2. 제조업체의 지침에 따라 희석 하지 않고 3 중에서 각 샘플을 실행 합니다.
  5. trypsinized 셀에서 832/13 베타 세포 호흡 계산.
    1. Respirometer 분석 프로그램의 f 3 버튼을 누르면 분석 결과에 mL 사용 당 셀의 수를 입력 합니다. 단위 셀/mL를 변경 세포 농도 입력 하 고 SAB. 매체 변경
    2. 선택 하 고 O2 3.2.3에 설명 된 대로 보정 양식으로 입력 하 여 데이터를 정규화 배경 읽기를 선택 합니다.
    3. 2.5 m m 포도 당, 16.7 m m 포도 당, Oligomycin A, FCCP, 3.3.1에 설명 된 대로 Antimycin A에서에서 읽기의 선택을 확인 합니다.
    4. Respirometer 분석 프로그램 내에서 단백질 농도 입력 하 고 각 치료 호흡 측정 동안에 대 한 적절 한 평균 값을 선택 후 각 챔버에 대 한 판독을 내보냅니다. 이것은 f 2를 클릭 하 고 다음 클립보드 기능을 "복사"를 추진 하 여 이루어집니다. 이 다른 분석 프로그램에 사용 하기 위해 데이터를 내보냅니다. "O2 슬로프 부정적" 값을 사용 하 여 계산에 대 한.
    5. 자동차의 3-5 독립 실행 처리 컨트롤 및 자연 화합물 기능-1 832/13 베타 세포의 손상 세포 호흡에 미치는 영향을 확인 하기 위해 치료 셀 데이터를 컴파일하십시오.
  6. 832/13 베타 세포 호흡 계산에서 기계적으로 해리 셀.
    1. Respirometer 분석 프로그램의 f 3 버튼을 누르면 BCA 분석 결과에서 단백질 계산을 입력 합니다. 밀리 그램 단위 변경, BCA 농도 입력 하 고 SAB. 매체 변경
    2. 선택 하 고 O2 3.2.3에 설명 된 대로 보정 양식으로 입력 하 여 데이터를 정규화 배경 읽기를 선택 합니다.
    3. 2.5 m m 포도 당, 16.7 m m 포도 당, Oligomycin A, FCCP, 3.3.1에 설명 된 대로 Antimycin A에서에서 읽기의 선택을 확인 합니다.
    4. Respirometer 분석 프로그램 내에서 단백질 농도 입력 하 고 각 치료 호흡 측정 동안에 대 한 적절 한 평균 값을 선택 후 각 챔버에 대 한 판독을 내보냅니다. 이것은 f 2를 클릭 하 고 다음 클립보드 기능을 "복사"를 추진 하 여 이루어집니다. 이 다른 분석 프로그램에 사용 하기 위해 데이터를 내보냅니다. "O2 슬로프 부정적" 값을 사용 하 여 계산에 대 한.
    5. 자동차의 3-5 독립 실행 처리 컨트롤 및 자연 화합물 기능-1 832/13 베타 세포의 손상 세포 호흡에 미치는 영향을 확인 하기 위해 치료 셀 데이터를 컴파일하십시오.

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결과

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

기능 1 832/13 베타 세포 준비 프로토콜에 설명 된 대로 수확을 다양 한 화학 개입 (그림 1A)에 따라 산소 소비에 변조를 시연할 예정 이다. 호흡 증가 16.7 mM 포도 (그림 1B)에 포도 당 농도 증가 때 관찰 됩니다. 호흡은 그대로 셀 Oligomycin a 치료는 줄어 이 호흡은 기저, nonphosphorylating 호흡기 상태로 정의 되는 누설으로 알려져 있다. 최대한 호흡 때 베타 세포 FCCP, ETS 호흡, 또는 전자 전송 시스템 호흡으로 정의 되는 연결을 푸는 에이전트와 함께 처리 됩니다 달성 될 것입니다. 마지막으로, 호흡은 Antimycin a를 이용한 (잔여 산소 소비) 비 호흡기 세포 산소 소비를 참조로 대우 될 때 0으로 떨어질 것 이다.

핸드폰 번호에 차이 크게이 기술에서 얻은 데이터의 품질을 변경 됩니다. 포도 당 유도 호흡은 0....

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토론

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

이 프로토콜의 목적은 그대로 췌 장 베타 세포에서 호흡 속도 측정에 고해상도 respirometry를 사용 하는 것입니다. 이 메서드는 증가 된 포도 당 수준으로 베타 세포 반응의 측정을 수 있습니다. 이 프로토콜은 자연스럽 게 발생 단위체 epicatechin 또는 curcumin4,5에서 같이 프로토콜 또한 다양 한 화합물과 전처리에 대 한 수 있습니다. 다른 다양 한 화합물과 치료는이 프로토콜을 전처리 (다음과 같이)를 사용 하거나 기본 프로토콜에 대 한 최소한의 수정으로 호흡기 챔버 내에서 치료에 사용 될 수 있습니다.

다양 한 방법으로이 메서드는 수정할 수 있다. 다른 베타 세포 라인을 사용할 수; 그러나, 세포 수와 SAB 세척 시간 실험적으로 결정...

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공개 사항

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저자는 공개 없다.

감사의 글

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

저자 조 및 과학적인 토론을 위한 Tessem 및 핸 콕 연구소의 구성원에 게 감사 하 고 싶습니다. 저자 코코아 파생된 epicatechin 단위체 분수를 제공 하는 앤드류 Neilson, 박사 (버지니아 공대) 감사 합니다. 이 연구는 JST에 당뇨병 액션 연구 및 교육 재단에서 교부 금에 의해 지원 되었다.

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재료

이 논문에 사용된 재료 목록
이름회사카탈로그 번호댓글
O2k 코어: Oxygraph-2kOroboros Instruments10000-02고해상도 호흡량 측정을 위한 기기
DatLab 6 프로그램Oroboros Instruments27141-01고해상도 호흡량 측정
INS-1 832/13 세포주Duke University Medical CenterNONE베타 세포주, Christopher Newgard
Curcumin박사의 선물SigmaC7727베타 세포 전처리
코코아 에피카테킨 단량체Virginia Polytechnic Institute and State UniversityNONE베타 세포 전처리, Andrew Neilson 박사의 선물
TrypsinSigmaT4049세포 배양용
RPMI-1640SigmaR8758832/13 베타 세포 배지
소 태아 혈청HycloneSH30071.03832/13 베타 세포 배지 구성
페니실린-스트렙토마이신시그마P4458832/13 베타 세포 배지 구성
요소 HEPES시그마H3662832/13 베타 세포 배지 구성 요소/ 1x SAB 버퍼
글루타민케이슨GLL01832/13 베타 세포 배지 구성
요소 피루브산 나트륨시그마S8636832/13 베타 세포 배지 구성
2-메르캅토에탄올SigmaM3148832/13 베타 세포 매체 구성 요소
NaClFisherS27110x SAB 버퍼의 구성
KClSigmaP954110x SAB 버퍼의 구성 요소
KH2PO4SigmaP565510x SAB 버퍼 구성
MgSO4SigmaM264310x SAB 완충액
D-(+)-포도당 용액요소 SigmaG87691x SAB 완충액의 구성 요소, 호흡 분석용 화학 물질
CaCl2SigmaC56701x SAB 완충액의 구성
요소 35% BSA 용액SigmaA79791x SAB 완충액의 성분
NaHCO3SigmaS57611x SAB 버퍼
구성 요소 200 프루프 에탄올시그마459844세척 산소 그래프 O2k 챔버
올리고마이신 A시그마O4876호흡 분석 용 화학 물질
FCCP시그마C2920호흡 분석 용 화학 물질
Anitmycin ASigmaA8674호흡 분석 용 화학 물질
BCA 단백질 키트Thermo Fisher23225단백질 농도 측정용
분석을 위한 컴퓨터 프로그램 요소 요소 요소 요소 의 구성

참고문헌

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Mueckler, M., Thorens, B. The SLC2 (GLUT) family of membrane transporters. Mol Aspects Med. 34 (2-3), 121-138 (2013).
  2. Kahn, S. E., Hull, R. L., Utzschneider, K. M. Mechanisms linking obesity to insulin resistance and type 2 diabetes. Nature. 444 (7121), 840-846 (2006).
  3. Weir, G. C., Bonner-Weir, S. Five stages of evolving beta-cell dysfunction during progression to diabetes. Diabetes. 53 Suppl 3, S16-S21 (2004).
  4. Strat, K. M., et al. Mechanisms by which cocoa flavanols improve metabolic syndrome and related disorders. J Nutr Biochem. 35, 1-21 (2016).
  5. Rowley, T. J. T., et al. Monomeric cocoa catechins enhance β-cell function by increasing mitochondrial respiration. J Nutr Biochem. 49, 30-41 (2017).
  6. Djafarzadeh, S., Jakob, S. M. High-resolution Respirometry to Assess Mitochondrial Function in Permeabilized and Intact Cells. J Vis Exp. (120), (2017).
  7. Reynolds, M. S., et al. beta-Cell deletion of Nr4a1 and Nr4a3 nuclear receptors impedes mitochondrial respiration and insulin secretion. Am J Physiol Endocrinol Metab. 311 (1), E186-E201 (2016).
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