해 다중 단백질 신호 복합물 분자 보완성 친 화력 정화 (BiCAP)에 의해

Jordan F. Hastings; Jeremy Z.R. Han; Robert F. Shearer; Sean P. Kennedy; Mary Iconomou; Darren N. Saunders; David R. Croucher

doi:10.3791/57109

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방법 논문

해 다중 단백질 신호 복합물 분자 보완성 친 화력 정화 (BiCAP)에 의해

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DOI:

10.3791/57109

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2018년 6월 15일

Jordan F. Hastings¹ , Jeremy Z.R. Han¹ , Robert F. Shearer¹^,² , Sean P. Kennedy¹^,³ , Mary Iconomou¹^,⁴ , Darren N. Saunders⁵ , David R. Croucher¹^,⁶^,⁷

¹The Kinghorn Cancer Centre, Garvan Institute of Medical Research, ²Ubiquitin Signaling Group, Protein Signaling Program, The Novo Nordisk Foundation Center for Protein Research, Faculty of Health and Medical Sciences, University of Copenhagen, ³RCSI Molecular Medicine, Royal College of Surgeons in Ireland, ⁴Department of Epigenetics, Max Planck Institute of Immunobiology and Epigenetics, ⁵School of Medical Sciences, University of New South Wales, ⁶St Vincent's Hospital Clinical School, University of New South Wales, ⁷School of Medicine and Medical Science, University College Dublin

이 논문에서

요약

이 원고는 분자 보완성 친 화력 정화 (BiCAP)에 대 한 프로토콜을 설명합니다. 이 새로운 방법은 경쟁 바인딩 파트너와 함께 형성 된 복합물 뿐만 아니라 유엔 complexed 개별 단백질을 제외 하는 동안 특정 격리 및 어떤 두 상호 작용 단백질의 다운스트림 proteomic 특성화를 촉진 한다.

초록

단백질 복합물의 조립은 많은 세포 신호 통로의 규칙을 기본 중앙 메커니즘입니다. 어떻게 이러한 동적 단백질 복합물 특정 생물학 응답을 직접 하기 위해 여러 소스 로부터 신호를 통합 하 고 어떻게이 많은 질병 설정에서 폐지 된다 생물 의학 연구의 주요 초점 해독 됩니다. 이 주요 생 화 학적 메커니즘의 중요성에도 불구 하 고이 다 분자 신호 복합물의 구체적이 고 민감한 deconvolution을 촉진할 수 있다 실험적인 기술의 부족이 이다.

여기이 단점 분자 보완성 친 화력 정화 (BiCAP) 불리는 우리 나 란 특정 nanobody는 단백질 보완성 분석 결과의 조합을 통해 해결 됩니다. 이 새로운 기술은 특정 격리 및 유엔 complexed 개별 단백질과 경쟁 바인딩 파트너와 함께 형성 하는 복합물의 배타에 상호 작용 단백질의 어떤 쌍 든 지의 다운스트림 proteomic 특성화를 촉진 한다.

BiCAP 기술은 다양 한 다운스트림 실험적인 분석 실험에 이며이 기술에서 제공 하는 특이성의 고차 수 더 nuanced 조사 단백질 복잡 한 어셈블리의 역학에 현재 가능한 것 보다 사용 하 여 표준 선호도 정화 기술입니다.

서론

단백질 복잡 한 어셈블리 많은 신호 경로¹^,²의 spatiotemporal 특이성을 유지 하는 핵심 과정 이다. 이 규제 역할의 중요 한 특성은 넓게 인식 된다, 그러나 실험적인 기술이이 단지 유심히 사용할 수의 부족이 이다. 대부분 상호작용체학 연구 개별 단백질, 또는 개별 복잡 한 부품의 순차 농축 상호 작용에 초점. 여기 선물이 특정 단백질 이합체의 고립에 대 한 기술 파트너³바인딩 경쟁 형성 복합물 뿐만 아니라 구성 요소 단백질의 개별 moieties 제외 하는 동안. 우리는이 기술을 라는 분자 보완성 친 화력 정화 (BiCAP), 그것은 기존 단백질 조각 보완성 분석 결과의 분자 형광 보완성 (BiFC), 조합의 소설 사용을 GFP와 그 파생 상품 나 란 특정 재조합 nanobody (참조 테이블의 재료).

전형적인 단백질 조각 보완성 분석 결과 분할 luciferase⁴, β-galactosidase⁵, 녹색 형광 단백질 (GFP)⁶