쥐에 있는 침 샘 기능의 측정 하는 방법

요약

침 샘 hypofunction는 자가 면역 질환과 방사선 치료의 빈번한 결과 이다. 이러한 질병 마우스 모델에서 침 샘 기능의 재현 평가 기술 도전 이다. 여기, 쥐에 타 액 생산의 정확 하 고 재현 가능한 측정을 위한 간단한 방법을 설명 합니다.

초록

Sjögren의 증후군, 전 분 비에 영향을 미치는 면역 질환 환자는 침 샘 염증을 개발 하 고 타 액 생산을 감소 했습니다. 마찬가지로 타 액 생산 머리와 목 암에 대 한 방사선 치료를 받은 환자에서 심각 하 게 손상 됩니다. 설치류 모델, 이러한 임상 조건 모방 개발 질병 pathogenesis의 이해를 촉진 하 고 새로운 치료 전략의 개발에 대 한 허용. 따라서, 정확 하 게, reproducibly, 그리고 반복적으로 동물 모델에서 침 샘 기능을 측정 하는 능력은 중요 합니다. 문학에서 설명한 이전 절차에 건물, 메서드는 이러한 기준을 충족 하 고 쥐에 있는 침 샘 기능을 평가 하는 데 사용 했다 개발 되었다. 이 새로운 방법의 추가적인 이점은 그것 쉽게 마스터 하 고는 작은 간 연산자 변화입니다. 침 샘 기능 (무게 또는 양) 또는 pilocarpine 자극에 대 한 응답에서 생산 하는 타 액의 속도 (mL/min)로 평가 됩니다. 수집 된 타 액 단백질 콘텐츠, 면역 글로불린 농도, 및 다른 생체 분석에 대 한 좋은 소스입니다.

서론

침 샘 침 다양 한 신경 및 기계적 자극¹에 대 한 응답을 생성합니다. 자극에 선 아드레날린 및 해 수용 체 교감 및 부 교감 신경 신경 시스템을 통해 수행 됩니다. Pilocarpine muscarinic 수용 체에 우위 하 게 작동 해, 파라 sympathomimetic 에이전트입니다. 침 샘에 그것은¹M3 muscarinic 아 세 틸 콜린 수용 체에 행동에 의해 타 액의 생산을 유도합니다. Pilocarpine 관리에 따라 타 액 생산 자극에 응답 하는 침 샘의 능력의 지표 이며 침 샘 기능의 측정으로 상용 된다.

타 액 생산의 정확한 측정은 Sjögren의 증후군² 등 방사선 상해 다음 머리와 목 암 치료³침 샘 질환의 연구에 중요 합니다. 여러 가지 다른 방법은 설치류에 타 액 생산을 측정 하기 위해 개발 되었습니다. ⁴배설 침 덕트, 진공⁵, 아래 구강에서 타 액의 수집 그리고 유리 모 세관⁶ 또는 micropipette

프로토콜

아래에 설명 된 프로토콜 기관 동물 관리 및 사용 위원회에 의해 승인 되었다 그리고 그것은 건강의 국가 학회에 의해 설립 하는 윤리적인 지침을 따릅니다. 이 보고서에 제공 된 모든 데이터는 10-12 주 나이의 여성 쥐를 사용 하 여 생성 되었습니다. 쥐의 다음 긴장 사용 했다: C57BL/6, BALB/c, DBA1, 129S, 및 (B6XA/J) F1. 모든 마우스 장에 장벽 (5 동물 케이지 당) 특정 병원 체 자유로운 조건에서 지 내게 되었고 먹이 물 ad libitum 제공.

1입니다. 준비

1. Pilocarpine 염의 재고 솔루션을 준비, 화합물의 10 밀리 그램의 무게 그리고 vortexing, 5.63 mg/mL의 재고 솔루션을 제공 하 여 살 균 isotonic 식 염 수의 1.776 mL에 녹이 지. 이 솔루션을 소독 아무 필요도 없다. 하지만 원하는 경우 0.2 µ M 필터를 통해 필터링. 최대 3 개월까지-80 ^oC 냉장고에 여러 aliquots에서이 재고 솔루션을 저장 합니다. 각 냉동된 주식은 단일 사용 됩니다. 일단 해 동, pilocarpine 솔루션을 refreeze 하지 마십시오.
2. 0.6 mL microfuge 관을 신중 하 게 온수 18 게이지 바늘으로 각....

결과

실험 마우스 모델 시스템에서 응답 pilocarpine 자극으로 타 액을 생산 하는 능력은 침 샘 기능의 지표로 서 사용 됩니다. 타 액 생산 면봉 메서드에서 11 주 된 C57BL/6 여성 쥐에서 측정 했다. 그림 1A, 결과 타 액 (mg) 수집된 pilocarpine의 증가 복용량을 다음의 금액으로 표시 됩니다. 체중 1 mg/kg의 복용량에 쥐의 일부 (무의식적인 떨고 고 떨고) 조 난 전시 시작 했다. 따라서 더 높은 복용량의 1 밀리 그램/kg 체중 넘어 pilocarpine 하지이 연구에서 테스트 되었습니다. 그림 1B, 결과 마우스 몸 무게 (g)을 타 액 무게 (mg)의 비로 표시 됩니다. 샨 다, 이러한 데이터 좋은 복용량 응답 관계를 pilocarpine 양과 타 액 생산을 보여줍니다. 면봉에서 회복 하는 타 액의 양을 측정 했다.

토론

타 액 생산은 복잡 한 프로세스 이며 많은 요인에 의해 영향을 받습니다. 따라서, 실험실 동물에 침 샘 기능을 측정 하는 것은 도전 될 수 있습니다. 추가 도전 침 샘 기능 같은 동물에서의 반복된 측정은 질병의 발병을 설정 하거나 복구 치료 다음과 설명 필요입니다.

이 보고서에 설명 된 면봉 메서드는 데이터를 표현 하기 위해 여러 옵션을 수행할 수 기술적으로 간단 하다. 얻은 결과 작은 간 연산자 변이로 재현할 수 있습니다. 메서드는 침 샘 기능 장애의 다른 모델에 타 액 생산에 감소를 검색할 수 있습니다. 중요 한 이점은 이다 불활성, 높은 흡수 성 고분자의 사용 및 수 침 생체 측정 수집, 타 액의 효율적인 복구. 이 방법의 또 다른 장점은 하나의 연산자에 의해 한 번에 최대 2 마우스에서 동시에이 절차를 수행 하는 것. 이 한 번에 하나의 마우스에서 수행 됩니다 일부 다른 방법 보다 훨씬 더 효율적입니다.

타 액 생산 측정의.......

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
Chemicals for Saliva Collection
Pilocarpine hydrochloride	Alfa Aesar, Tewksbury, MA, USA	B21410	멸균 등장성 식염수에 희석합니다. 100X 재고의 일회용 부분 표본을 -80oC
Name	Company	>카탈로그 번호	Comments
>Anesthesia Mix solution			Mix 1 mL 케타민 염산염 + 0.5 mL 자일라진 + 8.5 mL 멸균 등장 식염수를 멸균 바이알에 혼합합니다. 3 개월 동안 사용할 수 있습니다.
Zetamine (Ketamine hydrochloride)	Vet One, Boise, Idaho, USA	C3N VT1	재고는 100 mg/mL
Anased (Xylazine)	Med-Vet International, Mettawa, IL, USA	RXANASED-20	재고는 20 mg/mL
Isotonic sterile Saline	Vet One, Boise, Idaho, USA	501032	희석제로 사용
인공 눈물(윤활제 안과 연고)	Henry Schien, Dublin, OH, USA	48272	시술 중 눈이 건조해지는 것을 방지하기 위해 사용
Name	Company	카탈로그 번호	코멘트
>타액 채취용 재료
SalivaBio 어린이용 면봉	Salimetrics, LLC Carlsbad, CA, 미국	N/A	개별 포장된 면봉
50mL 폴리프로필렌 튜브	VWR, Radnor, PA, USA	89004-364	튜브의 바닥을 1cm 잘라냅니다. 절단면이 매끄러운지 확인하십시오.
마이크로 원심분리기 튜브 0.6 mL	VWR, Radnor, PA, USA	87003-290	가열된 18 게이지 바늘로 튜브 바닥에 구멍 만들기
마이크로 원심분리기 튜브 2 mL	VWR, Radnor, PA, USA	87003-298
영구적으로 부착된 바늘이 있는 인슐린 주사기	Becton Dickinson and Company, Franklin Lakes, NJ, USA	324702
18 게이지 일반 베벨 바늘	Becton Dickinson and Company, Franklin Lakes, NJ, USA	305195
멸균 메스 블레이드 #11	Integra York Inc PA, USA	4-311
미세해부 겸	Roboz, Gaithersburg, MD, USA	RS-5139	톱니 모양의 각도 0.8mm 팁, 4" 길이
라벨 테이프	Santa Cruz Biotechnology, Dallas, TX, USA	sc-224487
3채널 타이머	Amazon.com, 미국 워싱턴주 시애틀	B06W2KCYVN
분석 저울	Mettler Toledo, Columbus OH, USA
strong>Name	Company	카탈로그 번호	Comments
Chemicals/ reagents for inducing salivary dysfunction
LPS	Invivogen, San Deigo, CA, USA	tlrl-b5lps	내독소가 없는 물에 용해시키고 스톡 용액을 5mg/mL로 저장합니다. 멸균 HBSS 100 ug/mL로 희석 - 100 uL/ moue ip
Imject Alum adjuvant	Thermo Scientific	77161	주입 멸균 식염수에 1:1로 희석합니다. 복강내 0.1mL 주입
Rabbit anti-Ro52 antiserum	실험실		생성 재조합 마우스 Ro52
Name	Company	>카탈로그 번호	Comments
Chemicals/ 타액 분석용 키트
Salivary lysozyme estimation
EnzChek Lysozyme Assay Kit	Molecular Probes, Eugene, OR, USA	E-22013	제조사의 지시에 따라 사용됨
Name	>Company	카탈로그 번호	Comments
샌드위치 ELISA에 의한 Salivary IgA 추정 ELISA
Mouse IgA	Southern Biotech, Birmingham, AL, USA	0106-01	샌드위치 ELISA에 대한 표준 - 범위 30 ng/mL - 0.5 ng/mL
염소 항-마우스 IgA unlabeled	Southern Biotech, Birmingham, AL, USA	1040-01	중탄산염 완충액에서 1 ug/mL의 코팅
염소 항-마우스 IgA HRP	Southern Biotech, Birmingham, AL, USA	1040-05	1:4000 희석
TMB 기질	Becton Dickinson and Company, Franklin Lakes, NJ, USA	555214	제조업체의 지침에 따라 사용
Immulon 4HBX Microtiter 96 well plates	Thermo Scientific, Rochester, NY, USA	3855
Name	Company	카탈로그 번호	코멘트
타액 단백질 추정
Bio-Rad 단백질 분석 염료 시약 농축	BioRad, Hercules, CA, USA	5000006	제조업체의 지침에 따른 단백질 추정

자 < 마우스 에서 에서 사용되는 검출 항체 액