마우스 작은 장의 면역 시스템에서 세포를 분리

요약

여기 창 자 연관 된 림프 조직 Peyer의 패치 및 배수 mesenteric 림프절을 포함 하 여 유도 사이트와 lamina propria 포함 이펙터 사이트에서 세포의 고립에 대 한 자세한 프로토콜 설명 및 작은 장 면역 시스템의 장 상피입니다.

초록

장의 면역 시스템 enteropathogenic에 대 한 효과적인 면역 응답을 설치 하는 동안 식이 항 및 공생 박테리아 허용 응답을 생성 하 여 위장의 장벽 기능 유지에 중요 한 역 미생물입니다. 또한, 그것은 분명 지역 장 면역 먼 및 조직의 면역에 깊은 영향을가지고 되었다. 따라서, 그것은 장 면역 반응을 유도 하는 어떻게 무엇 이며 응답의 면역학 결과 공부 하는 것이 중요입니다. 여기, 상세한 프로토콜 창 자 연관 된 림프 조직 Peyer의 패치 및 배수 mesenteric 림프절 같은 소장 유도 사이트와 lamina propria 같은 이펙터 사이트에서 세포의 고립에 대 한 설명 및 장 상피입니다. 이 기술은 최적의 순도 및 생존 능력 허용 시간 범위 내에서 최소한의 상호 compartmental 오염 작은 창 자 조직에서 세포의 많은 수의 격리를 보장합니다. 세포 및 장 조직에서 다른 면역 세포 분리 기술 기능 위장 감염, 암, 염증 성 질환에 면역 반응의 이해를 수 있습니다.

서론

위장 (GI)는 많은 주름 돌출 외부 환경과 내부 신체 분리 큰 인터페이스를 나타내는 있다. 장의 면역 시스템 기 관의 장벽 기능 유지에 필수적인 역할을 한다. 그것은 끊임없이 식이 항, 공생 박테리아 및 병원 성 미생물에 노출 됩니다. 이와 같이, 음식 항 원 및 공생 박테리아 관용 있어야 합니다 빠르게 enteropathogenic 미생물¹에 대 한 효과적인 면역 응답을 생성 하는 능력을 유지 하면서. 장의 면역 시스템 해부학 어디 순진한 림프 톨 항 원 장 점 막에서 항 원을 운반 하는 세포에 의해 활성화 됩니다, 유도 사이트 및 이펙터 사이트, 활성화 된 림프 톨 특정 발휘로 분할 될 수 있다 이펙터 기능². 유도 사이트 구성 조직된 림프 구조에 Peyer의 패치 (PP)의 전문된 M 세포와 지역 배수 mesenteric 림프절 (MLN)의 행동을 통해 직접 창 자 루멘을 조사. 이펙터 사이트 lamina propria (LP), 지하실 멤브레인와 장 상피 세포, intraepithelial 세포 (IEL)를 포함 하는 지하실 멤브레인 위에 있는 단일 셀 레이어 아래 결합 조직으로 구성 됩니다. 세포는 적응 면역의 주요 플레이어는 감염 및 암에 대 한 보호를 중재 하 고 염증 성 질병에 immunop....

프로토콜

모든 동물 실험 국립 건강 연구소의 지침에 따라 실시 하 고 스토 니 브 룩 대학 기관 동물 관리 및 사용 위원회에 의해 승인 했다.

주: 절차를 수행 하기 전에 모든 승인을 부여 됩니다 확인 하십시오.

1. 솔루션 준비

1. HGPG (HEPES, L-글루타민, 페니실린/스, 그리고 gentamycin), 100 ×
   1. 혼합 59.6 g HEPES (최종 500 mM) 14.6 g L-글루타민 (200 m m 최종), 1 × 10⁶ U 페니실린 (2000 U/mL 최종), 1 g 스 (2 mg/mL 최종), 그리고 2.5 mg gentamicin (5 µ g/mL 최종). 추가 RPMI 1640 ~ 500 mL. 7.5 NaOH를 사용 하 여 pH를 조정 (조정, 전에 버퍼가 노란색/주황색 약 6.0 ph). 필터는 0.45 μ m 필터를 사용 하 여 소독. 약 수 그리고 저장소 또는 1 달까지 4 ° C에서 최대 1 년 동안-20 ° C에서.
2. HEPES-중 탄산염 버퍼, 10 배
   1. 혼합 23.....

결과

프로토콜의 도식 표현 묘사 된다 (그림 1). 림프 톨 유도 장 점 막 및 이펙터 사이트 내에서 명백 하 게 구성 됩니다. 파이어의 패치 (PP) 및 mesenteric 림프절 (MLN) 포함에 잘 조직 된 T 세포 및 B 세포 모 낭, 림프 톨 장 상피 세포 더 만들어진다 배포 되는 포함. Lamina propria (LP)에 브러시가 분산된 세포와 세포 고립된 림프 낭 (ILF)과 cryptopatches 같은 조직된 림프 구조 내에 포함 된 포함 되어 있습니다. 각 장의 면역 구획은 또한 림프 톨 부분 집합 (그림 2)의 독특한 구성으로 대표. MLN 주로 PP 세포는 주로 B 세포 (~ 80%) αβ T 세포 (~ 70%)의 구성입니다. Lp로 림프 구 구성은 크게 긴장 의존 하지만 주로 αβ T 세포와 B 세포의 구성 이다. 다른 장의 구획 구분, 림프 톨.......

토론

자세한 프로토콜 유도 (MLN와 PP) 점 막 세포는 창 자에서 격리에 대 한 제시와 이펙터 (LP 및 IEL 구획) 사이트. 프로토콜 균형 입력 (시간) 및 출력 (생존 및 수율) 결과 및 생산성을 극대화 하기 위해 개발 되었습니다. 프로토콜은 또한 LP와 IEL 구획 사이 최소 상호 compartmental 오염을 보장합니다.

마우스 소장에서 면역 세포의 고립에 대 한 여러 가지 프로토콜 되었습니다 게시^3,,45,,67. 이러한 프로토콜의 대부분 LP에서 면역 세포를 고립 시키기에 초점. 장 상피 LP 외부 환경에 직접 노출 되 고 세포의 독특한 구성의 구성에서 뚜렷한 구획 이다. 이러한.......

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
HEPES	Fisher Scientific	BP310-500
L-글루타민	Sigma-aldrich	G3126-100G
페니실린-스트렙토마이신	생명 과학	15140-122
겐타마이신	생명 기술	15710-072
수산화나트륨	Fisher Scientific	S318-500
RPMI 1640	생명 기술	21870-076
중탄산나트륨	Fisher Scientific	S233-500
소 태아 혈청	Life Technologies	26140-079
10x 행크스 균형 소금 용액	Sigma-aldrich	H4641-500ML
1,4-Dithioerythritol	Sigma-aldrich	D9680-5G
0.5M EDTA, pH 8.0	Life Technologies	15575-020
염화칼슘 육수화물	Sigma-aldrich	21108-500G
염화마그네슘 육수화물	시그마-알드리치	M2670-100G
콜라겐분해효소, 유형 I	Life Technologies	17100-017
DG 그라디언트 스톡 용액(Percoll)	GE 헬스케어	17-0891-01
적혈구 용해 버퍼	바이오레전	420301
70-&마이크로; M 세포 스트레이너	Corning	352350
14 mL 폴리프로필렌 라운드 바닥 튜브	Corning	352059
Erlenmeyer 플라스크	Kimble	26500R-50mL
자기 교반기	Thermo Fisher	50094596
교반 막대	Fisher Scientific	14-512-148

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