Vancomycin 치료 로드 칼슘 염 및 뼈 감염의 향상 된 토끼 모델에서 자생 뼈

요약

이 연구는 향상 된 토끼 선물 모델 같은 양의 골 수에서 박테리아를 차단 하 여 황색 포도상구균 에 감염. Vancomycin 로드 칼슘 염 및 자생 뼈 항생제와 뼈 복구 처리를 위해 사용 됩니다. 프로토콜 뼈 감염 및 재생을 공부에 대 한 도움이 될 수 있습니다.

초록

뼈 감염 임상, 정형 외과, 외상 외과에 치료 하기가 매우 세균성 내 습에서 유래한 다. 뼈 감염 도왔습니다, 지속적인 염증과 최종 뼈 비 조합 될 수 있습니다. 가능한, 재생 가능한 동물 모델의 설립은 뼈 감염 연구 및 항생제 치료에 중요 합니다. Vivo에서 모델로 서 토끼 모델은 뼈 감염 연구에서 널리 이용 된다. 그러나, 토끼에 대 한 이전 연구 뼈 감염 모델 박테리아의 양을 변수 되면서 감염 상태 일치 하지 했다. 이 연구는 골 수에서 박테리아를 차단 하 여, 토끼에 뼈 감염을 유도 하는 향상 된 수술 방법을 선물 한다. 다음, 다단계 평가 모델링 방법 확인 하 실행 될 수 있습니다.

일반적으로 debriding 괴 사 성 조직 및 vancomycin 로드 칼슘 염 (VCS)의 주입은 항생제 치료에 우세. VCS에 칼슘 염 혜택 크롤링 osteocyte와 새로운 뼈 성장, 비록 대규모 뼈 결함 debriding 후 발생 합니다. 자생 뼈 (AB)은 후에 회 저 성 뼈 debriding 대규모 뼈 결함의 치료에 대 한 뼈 결함을 극복 하는 매력적인 전략 이다.

이 연구에서 우리는 자생 뼈 이식 뼈 결함으로 꼬리 뼈를 사용. 뼈 수리 동물 희생 후 마이크로--단층 촬영 (마이크로 CT) 및 조직학 분석을 사용 하 여 측정 했다. 그 결과, VCS 그룹에서 뼈 비-연합 지속적으로 얻은 했다. 대조적으로, 뼈 결함 영역 VCS AB 그룹에서 크게 감소 했다. 현재 모델링 방법 뼈 감염 모델을 준비 하는 재현, 실현, 안정적인 방법 설명. VCS AB 치료 항생제 치료 후 낮은 뼈 연방 비 비율에 있는 결과. 향상 된 뼈 감염 모델 및 VCS와 자생 뼈의 조합 치료 뼈 감염 뼈 재생 관련 학 정형 응용 프로그램의 기본 메커니즘을 공부 하는 데 도움이 수 있습니다.

서론

뼈 감염 세균 이나 다른 미생물 침입 후 외상, 뼈 골절, 또는 다른 뼈 질환¹에서 일반적으로 유래한 다. 뼈 감염 염증 및 뼈 조직 파괴의 높은 수준의 유도 수 있습니다. 클리닉, 황색 포도상구균 (S. 구 균)에서는 뼈 감염^2,3의 주된 원인이 에이전트입니다. 뼈 감염 고통, 쇠 약, 그리고 종종 매우⁴치료 하기 어려운 만성 과정을 걸립니다. 현재, 회 저 성 직물의 debridement 그리고 vancomycin 로드 칼슘 (VCS) 구슬의 이식 로컬 감염^5,6를 제어 하기 위한 효율적인 전략으로 확인 되었습니다 있다. 그러나, 10% ~ 15%의 환자는 항 감염 치료⁷후 장기간된 뼈 복구 프로세스, 지연된 연합, 또는 비-연합을 경험. 뼈의 결함의 큰 세그먼트는 정형 외과 대 한 가장 어려운 문제입니다. 자가 뼈 이식 뼈 비 조합 치료^8,

프로토콜

현재 연구에 사용 된 토끼는 관리 및 실험 동물의 사용에 대 한 가이드에 따라 취급 했다. 모든 실험 절차 규칙의 생명 윤리 위원회의 절 강 아카데미의 전통 중국 의학 순 이었다.

1입니다. 세균 현 탁 액의 준비

1. S. 구 균 동결 분말 (ATCC 6538)와 Luria Bertani 문화 매체의 0.3 mL의 0.5 mg을 디졸브. 완전히 정지를 혼합.
2. 줄무늬가 tryptic 간장 한 천 격판덮개에 박테리아 중단 하 고 16 h 37 ° C에서 세균성 식민지를 품 어.
3. 단일 세균성 식민지 형성 단위 (CFU)과 tryptic 간장 국물 관 24 h. 수행 37 ° C에서 약 24 h에 대 한 하위 문화를 선택 하 고 얻을 중반 대 수 성장 단계 박테리아 후 16 ~ 18 h, 광학 밀도 (OD) 값이 600에서 0.6 nm ¹⁴.
4. 원심 분리기 튜브로 박테리아 서 스 펜 션의 1 mL를 전송 합니다. 825 x g 와 4 ° C에서 5 분 동안 centrifuge 그리고 삭제는 상쾌한. Resuspend 및 버퍼링 하는 인산 염 (PBS);의 100 µ L로 박테리아를 씻어 3 번이이 단계를 반복 ....

결과

뼈 감염 모델의 평가
S. 구 균감염, 후 토끼의 병 적인 발현 클리닉에서 만성 도왔습니다의 대표적인 증상에 유사 했다. 우리의 연구에서 30 토끼 했다 감염, 모델 그룹, 대상 및 10 토끼 제어 동물으로 복종 되었다. 모든 모델 토끼는 sinuses(그림 3)에서 흐름 흰색과 노란색 고름으로 경골 로컬 사이트의 sinuses 감염. H & E 염색의 결과 세균성 집계 모델 그룹에서 죽은 뼈 주위에 있는 정상적인 osteocytes 식별할 수 없는 나타냅니다. CRP와 WBC의 수준을 모델 그룹에서 제어 그룹 (그림 3B) 보다 높다. 회 저 성 골 lysates 모델 그룹에 대 한 식민지의 수를 증가 (그림 3

토론

이전 연구에서 다양 한 종류의 동물 모델 둘 다 급성과 만성 뼈 감염; 공부 건설 되었다 그러나, 이상적인 모델에 대 한 검색은 여전히^17,18을 지속합니다. 또한, 이상적인 뼈 감염 모델 예상 시뮬레이션 모델링 기간 동안 임상 설정에서 뼈 감염의 병 적인 특성, 유지 수행 하기 쉽고 저렴 한 비용. 지금까지, 토끼 뼈 감염 모델은 염증 성 뼈 질병 연구에 가장 일반적인 모델으로 토끼 사용할 수 있고, 가능한 저렴 한. 우리의 이전 연구에서 우리는 사망률 및 다양 한 몸 무게와 토끼의 감염 속도 비교. 체중 3 kg 이상; 해야 했다 결과 그렇지 않으면, 있을 것입니다 높은 사망률 또는 haematosepsis 및 더 높은 사망 율의 발생률이 높은 수술 후.

이전 연구와는 달리 토끼 뼈 감염 모델 및 우리의 연구에서 항생제 치료는 인간의 질병과 수술 치료의 병 적인 특성으로 .......

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
흡수성 외과 봉합사	Jinghuan	18S0604A
무균 인젝터	Jinglong	20170501
뼈 왁스	ETHICON	JH5CQLM
CCD 카메라	올림푸스	DP72
EDTA-K2 항응고제 혈관	XINGE	20170802
전기 뼈 드릴 유닛	Bao Kang	BKZ-1
전기 면도기	Codos	3800
유연한 실리카 겔 몰드	WRIGHT	1527745
Hematoxylin 및 Eosin 염색 키트	Beyotime	20170523
Luria-Bertani 배양 매체	Baisi Biothchnology	20170306
의료용 칼슘 황산염	WRIGHT	1527745
마이크로컴퓨터 단층 촬영 (마이크로 CT)	Bruker	SkyScan 1172
현미경	Olympus	CX41
뉴질랜드 흰 토끼	Zhejiang Experimental Animal Center	SCXK 2014-0047
No. 11 메스	Yuanlikang	20170604
생리식염수	Mingsheng	20170903
	PBS TBD(Jingyi)	20170703-0592
펜토바르비탈 나트륨	Merk	2070124
포비돈-요오드 용액	Lierkang	20170114
S. aureus 동결 건조 분말	중국 일반 미생물 문화 수집 센터	ATCC 6538
양 혈액 한천	HuanKai 미생물 3103210
트립 간장 한천 플레이트	HuanKai 미생물	3105697
트립 콩 국물 튜브	HuanKai 미생물	3104260
Vancomycin	Lilly	C599180