프로토콜은 차별화에 생체 재료의 강성 효과 확산의 조사와 펩타이드, 없이 투입 했다 다양 한 뻣 뻣 함과 폴 리 비닐 알코올-co-itaconic 산 hydrogels를 준비 하 여 줄기 세포입니다. hydrogels 강성 가교에 의해 통제 되었다.
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프로토콜은 차별화에 생체 재료의 강성 효과 확산의 조사와 펩타이드, 없이 투입 했다 다양 한 뻣 뻣 함과 폴 리 비닐 알코올-co-itaconic 산 hydrogels를 준비 하 여 줄기 세포입니다. hydrogels 강성 가교에 의해 통제 되었다.
확산에 생체 재료의 강성과 줄기 세포의 분화와 같은 물리적 단서의 효과가 여러 연구자에 의해 조사 했다. 그러나,이의 대부분 polyacrylamide hydrogels 그들의 연구에서 줄기 세포 배양에 대 한 사용. 따라서, 그들의 결과 그 결과 polyacrylamide의 특정 한 특성에서와 생체 재료의 물리적 큐 (강성)에서 발생 될 수 있습니다 때문에 논란이 있습니다. 여기, 우리가 polyacrylamide, 다양 한 줄기, 인간 미 발달 줄기 (ES) 세포를 포함 하 여 셀 및 인간 유도 만능 줄기 (iPS) 세포를 배양 수 있습니다 어디를 기반으로 하지 hydrogels를 준비 하기 위한 프로토콜을 설명 합니다. 다양 한 강성과 Hydrogels 강성 가교 시간을 변경 하 여 가교 정도 의해 제어와 bioinert 폴 리 비닐 알코올-co-itaconic 산 (P-IA)에서 준비 되었다. 펩타이드 기질에서 파생 하지 않고 투입 P-IA hydrogels 줄기 세포 배양 및 분화에 대 한 미래의 플랫폼으로 조사 되었다. 문화와 액체 양수 줄기 세포, 줄기 세포 지방이 많은 파생, 인간 ES 세포, 및 인간 iPS 세포의 통로 여기에 설명 되어 있습니다. 펩타이드 P-IA hydrogels가 보였다 우수한 공연, 그들의 강성 속성에 의해 유도 했다. 이 프로토콜의 소재, 강성 속성 및 마지막으로, 이종 무료 문화 조건을 사용 하 여 줄기 세포 운명에 미치는 영향을 제어 하는 함께 그들의 표면 조작, 합성을 보고 합니다. 최근 연구를 바탕으로, 그러한 수정된 기판 지원 하 고 다른 연계; 다양 한 줄기 세포 라인의 운명을 직접 미래의 플랫폼으로 작동할 수 있다 또한, 재생성 하 고 잃어버린된 기관 또는 조직의 기능을 복원 합니다.
세포와 줄기 세포, 특히 인간 유도 만능 (iPS) 세포와 인간 배아 줄기 (ES) 세포의 장기 확산의 특정 계보에 줄기 세포 분화의 운명을 억제제, 성장 요인에 의해 통제 될 것으로 알려져 고 / 또는 문화 미디어에 작은 생리 활성 분자입니다. 최근, 생체 재료, 특히 셀 문화 생체 재료의 강성의 물리적 신호 줄기 세포 확산 그리고 감 별 법1,2,의 운명을 인도 하는 중요 한 요소가 될 인정을 받고 있다 3,4,,56. 따라서, 여러 연구자 다양 한 강성과 polyacrylamide hydrogels를 사용 하 여 주로 hydrogels, 차별화에 교양 줄기 세포의 운명을 조사 하기 시작 했습니다.
생체 재료의 강성은 초점 접착, 세포 형태학, 셀 형 및 줄기 세포 접착, 2 차원 (2 차원) 재배1,
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이 연구에서 실험 대만 Landseed 병원 (IRB-13-05)와 중앙 대학교의 윤리 위원회에 의해 승인 되었다. 모든 실험은이 연구 기간 동안 모든 관련 및 적용 가능한 정부 및 기관 지침 및 규정에 따라 실시 했다.
1. 솔루션 및 미디어 준비
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P-IA hydrogels ECM 파생 된 펩타이드 (oligoECM)로 융합 또는 다른 신축성으로 ECM 준비 반응 체계에 따라 그림 1A에서 보이는 것과 같이 oligoECM (그림 1B)의 다른 종류를 사용 하 여. hydrogels의 신축성은 적용된 가교 강도 (시간) (그림 1C)에 의해 규제 했다. P-IA hydrogels 25.3 kPa (24 h 가교 시간)의 저장 탄성 률이 vitronectin에서 파생 된 펩타이드와 융합 지원 인간 iPS와 이상에 대 한 ES 세포의 장기 문화 10-20 구절. 특히, 공동 세그먼트 (P-i A-24 h-VN1G)와 P-IA hydrogels 투입 또는 듀얼 체인 (P-i A-24 h-VN2G) 인간 iPS와 P-아이오와-VN1 보다 oligoECM (200-.......
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P-i A-oligoECM 및 다양 한 강성과 P-아이오와-ECM hydrogels 인간의 ES와 이종 무료 조건에 이상 10 구절 뿐만 아니라 인간의 AFS 셀, 광고 셀의 문화에 대 한 그들의 pluripotency를 유지 하는 iPS 세포의 장기 확장을 위해 개발 되었다 그리고 조 혈 줄기 세포25,,2832. P-IA hydrogels oligoECM와 함께 움직일 수는 차별화의 운명과 기본 세포로 서 줄기 세포의 다양 한 종류의 확산에 셀 문화 자료의 효과 조사 하기 위해 세포 배양 재료에 대 한 훌륭한 후보와 암 세포입니다.
P i A 솔루션 P i A 솔루션 요리에 캐스팅은 투명 해야 합니다. 가교 시간 P-IA hydrogels의 가교 강도 결정합니다. 24 h P-IA hydrogels의 가교 인간.......
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저자는 공개 없다.
이 연구는 부분적으로 부여 번호 106-2119-M-008-003, 105-2119-M-008-006, 104-2221-E-008-107-MY3 아래 과학과 기술, 대만 의해 지원 됩니다. 이 연구는 대만 Landseed 병원 프로젝트 (NCU-LSH-105-A-001)에 의해 또한 지원 되었다. 교육, 문화, 스포츠, 과학 및 기술 일본에서 과학 연구 (숫자 15 K 06591)에 대 한 특정도 인정 했다. A. 히구치 대학원 및 연구, 킹 사우드 대학, 리야드 11451, 사우디아라비아 왕국에 대 한 국제 과학 파트너십 프로그램 (ISPP-0062) 부회장 Rectorate에 대 한 인정 하 고 싶습니다.
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| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| GTPGPQGIAGQRGVV | PH 일본 | 없음 | 사양: Oligopeptide 약어: Cyclic RGD, cRGD |
| GACRGDCLGA | PH 일본 | 없음 사양: Oligopeptide 약어: FN1 | |
| KGGAVTGRGDSPASS | PH 일본 | 없음 | 사양: Oligopeptide 약어: CS1 |
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| CGGGKKQRFRHRNRKG | PH 일본 | 없음 | 사양 : Oligopeptide 약어 : VN1G |
| GGGGKGGPQVTRGDVFTMP | PH 일본 | 없음 | 사양: Oligopeptide 약어: VN2C |
| GCGGKGGPQVTRGDVFTMP | PH 일본 | 없음 | 사양: Extracellular matrix 약어: rVN |
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| Fibronectin | Sigma-Aldrich | F2006 | 사양 : 상업적으로 이용 가능한 코팅 재료 약어 : Synthemax II |
| Synthemax II | Corning | 3535 | 사양 : 고분자 |
| 폴리 비닐 알코올 - 코 이타콘산 | 일본 VAM & Poval | AF-17 | 사양 : 화학 |
| 글루 타르 알데히드 | 시그마 - 알드리치 | G5882 | 사양 : 화학 |
| 물질 Na2< / sub>SO 4< / sub> | Aldrich | 239313 | 사양 : 화학 |
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| N- (3- 디메틸 아미노 프로필) -N'- 에틸 카르 보디 이미드 염산염 | 시그마 - 알드리치 | E7750 | 사양 : 화학 < br / > 약어 : NHS |
| N- 하이드 록시 숙신이 미드 | 시그마 - 알드리치 | 56480 | 사양 : 화학 |
| 파라 포름 알데히드 | 시그마 - 알드리치 | P6148 | 사양 : 화학 |
| 트리톤 -X100 | 시그마 알드리치 | T8787 | 사양: Cell culture consumable |
| Cell scraper | Corning | 3008 | 사양: Cell culture consumable |
| Dispase II | Sigma-Aldrich | SI-D4693 | 사양: Cell culture medium |
| Essential 6 | Thermo Fisher scientific | A1516401 | 사양: Cell culture medium |
| Essential 8 | Thermo Fisher scientific | A1517001 | 사양: 세포 배양 배지 |
| DMEM/F12 | Thermo Fisher scientific | 11330-032 | 사양: 세포 배양 배지 |
| DMEM | Thermo Fisher scientific | 12800-017 | 사양: 세포 배양 배지 |
| MCDB 201 | Sigma-Aldrich | M6770 | 사양: ES cell |
| Human ES cell | WiCell Research Institute, Inc.. | WA09 | 사양 : iPS 세포 |
| 인간 iPS 세포 | Riken 세포 은행 | HS0077 | 사양 : 35 mm 약어 : TCP |
| TCP 접시 | 코닝 | 353001 | 사양 : 60 mm 약어 : TCP |
| TCP 접시 | 코닝 | 353002 | 사양 : 24 잘 |
| 접시 24 잘 접시 | 코닝 | 353047 | 사양 : 차단 제제 |
| 소 혈청 알부민 | Sigma-Aldrich | A8806 | 사양: 검출 시약 |
| 알칼리성 인산가수분해효소 라이브 스테 | Thermo Fisher Scientific | A14353 | 사양: 검출 시약 |
| Hematoxylin & eosin | Sigma-Aldrich | 1.05175 | 사양: EB 형성 접시 |
| 6웰 초저 부착 접시 | Corning | 3471 | 사양: 코팅 재료 |
| 젤라틴 | Sigma-Aldrich | G9391 | 사양: 코팅 재료 |
| Matrigel | Corning | 354230 | 사양: 마우스 |
| NOD-SCID 마우스 | National Applied Research Laboratories | 없음 | 사양: 혈청 |
| 태아 소 혈청 | 생물학 산업 | 04-001-1A | 사양: 항생제 |
| 항진균성 항생제 | Thermo Fisher Scientific | 15240-062 | 사양: |
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| SSEA4 | Abcam | ab16287 | 사양: |
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| Sox2용 | Invitrogen | 48-1400 | 사양: |
| 평활근 Actin | Invitrogen | PA5-19465 | 사양: |
| AFP | Invitrogen | PA5-21004 | 사양: 항체 |
| 항체 GFAP | Invitrogen | MA5-15086 | 사양: |
| 항체 Alexa Fluor 555 – conjugated Goat anti-Mouse 항체 | Invitrogen | A-21422 | 사양: 항체 |
| Alexa Fluor 488 – conjugated Goat anti-Rabbit 항체 | Invitrogen | A-11008 | 사양: 항체 |
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