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방법 논문

스테이 시스 고주파 초음파에 의해 모니터링 하는 쥐에 의해 유도 된 깊은 정 맥 혈전 증

9.8K 조회수

⸱

DOI:

10.3791/57392

⸱

2018년 4월 13일

 ,  , 
1Lady Davis Institute for Medical Research, Jewish General Hospital, McGill University, 2Department of Medicine, Jewish General Hospital, McGill University

이 논문에서

요약

현재 프로토콜 스테이 시스 모델을 사용 하 여 정 맥 혈전 증을 얻기에 단계를 설명 합니다. 또한, 우리는 시간이 지남에 혈전 형성 및 해상도 측정 하는 비-침략 적 방법을 사용 하는.

초록

정 맥 혈전 증 1에서 500의 연례 부각 인구의 1-2%에 영향을 미치는 일반적인 상태 이다. 정 맥 혈전 증 폐 색 전 증 또는 결과 만성적인 다리 통증, 붓기, 및 궤, 특징 후 thrombotic 증후군 또는 만성 폐 고혈압 인 중요 한 만성 통해 죽음으로 이어질 수 있습니다 호흡기 타협. 가장 일반적인 심혈 관 질환 심근 경색 및 허 혈 성 뇌졸중 후 이며 암, 조직의 질환, 수술 등 주요 외상 다른 장애의 과정을 복잡 하 게 수로 모든 의료 분야에 대 한 임상 도전 이다.

실험 모델은 이러한 메커니즘을 연구 하는 데 필요한. 스테이 시스 모델 일관성 혈전 크기와 혈전의 정량 금액을 유도합니다. 그러나, 그것은 체계적으로 열 등 한 베 나 정 맥 혈전 크기에서 변화 및 모든 잘못 된 데이터 해석에의 측 지점 선 하는 데 필요한. 초음파를 사용 하 여 혈전 크기를 측정 하는 비-침략 적 기술을 개발 했습니다. 이 기술을 사용 하 여, 우리가 평가할 수 혈전 개발 및 해상도 같은 동물에서 시간이 지남에. 이 방법은 마우스 교체, 감소, 및 연구에 있는 동물의 구체화의 원리와 일치 하는 정 맥 혈전 증의 정량화에 필요한 수를 제한 합니다. 우리는 초음파로 혈전 무게와 측정으로 혈전 크기 상관의 조직학 분석 얻은 증명 하고있다. 따라서, 현재 연구에 높은 주파수의 초음파를 사용 하 여 모니터링 하는 방법 열 등 한 베 나 정 맥 stasis 모델을 사용 하 여 마우스에 깊은 정 맥 혈전 증을 유발 하는 방법을 설명 합니다.

서론

정 맥 혈전 색 전 증 (VTE), 깊은 정 맥 혈전 증 (DVT) 폐 색 전 증의 구성 된 심근 경색 및 뇌졸중 후 심장 혈관 죽음의 세 번째 주요 원인입니다. 그것은 1에서 5001의 연간 발생률을 인구의 1-2%에 영향을 미치는 일반적인 조건. VTE 이어질 수 있습니다: 1) 폐 색 전 증; 통해 죽음 만성적인 다리 통증, 붓기, 및 궤; 특징 2) 후 thrombotic 증후군 또는 3) 중요 한 만성 호흡 타협의 결과로 만성 폐 고혈압. VTE는 다중 요인 질병 이며 그것은 전에 백 년 이상 설명으로 혈액의 흐름, 혈관 벽, 또는 hypercoagulable 국가 응고 fibrinolytic 시스템 사이의 균형의 붕괴 때문에 손상의 스테이 시스에서 발생할 수 있습니다. Virchow에 의해 Virchow의 3 인조로 알려져 있다.

대부분의 경우에서 그것은 인간의 DVT 샘플을 얻을 수, 때문에 연구원은 DVT의 실험 동물 모델을 개발 했습니다. 쥐2, 마우스3, 토끼4, 돼지5,6개 및 비 인간 영장류7 을 포함 하 여 여러 동물 사용 되었습니다. 쥐 유전자 변형 될 수 있으며 DVT를 공부 하는 가장 자주 사용된 동물. 모든 동물에서의 자발적인 DVT 하지 쥐에서 관찰 됩니다. 따라서, 정 맥 벽의 물리적 또는 화학적 변경 마우스에서 혈전 증을 만드는 데 사용 됩니다. 우리는 열 등 한 베 나 정 맥 (IVC) 마우스8,,910의 혈전 증을 유발 하 이전 제 2 철 염화 모델을 이용 했다. 이 분 이내 폐색 혈전을 안정적으로 생산의 장점이 고 급성 DVT 동안 항 응고 제와 항 혈소판 약물의 역할을 조사 하는 데 사용할 수 있습니다. 그러나, 그것은 터미널 절차입니다. 따라서, 공부 하 고 급성과 만성 DVT, 스테이 시스 모델 더 적당 하다. 이 모델에서는 혈전 형성 IVC, DVT 개발 Virchow의 3 인조의 요소 중 하나에서 혈액 흐름의 완전 한 중단에 의해 유도 된다. DVT 형성 FeCl3 모델11에 비해 이점이 해상도 공부 하 고이 모델을 사용할 수 있습니다.

혈전 형성 및 해상도 마이크로 이미징-고주파 초음파 시스템12을 사용 하 여 시간이 지남에 따라 비-침략 적 방법을 개발 했습니다. 우리는 이전 측정 초음파에 의해 정 맥 혈전 증의 혈전 병 적 얻은 호의 상관을 증명 하고있다. 우리가 측정 초음파 상관 혈전 무게와 혈전 영역 histochemistry9,10정량으로 얻은 두 후속 연구에서 확인 했습니다. 더 중요 한 것은, 우리는 높은 주파수 초음파 쥐12에서 깊은 정 맥 혈전의 형성을 모니터링 하는 데 사용할 수 있습니다 보여주 있다. 그것은 또한 비-침략 적 방법으로 혈전 해상도 척도를 사용할 수 있습니다.

여기, 우리는 스테이 시스 유도 혈전 증 마우스 모델 및 어떻게 혈전 형성을 모니터링할 수 있습니다 비 접촉 고주파 초음파를 사용 하 여 시간이 지남에 사용 하 여 혈전 형성을 허용 하는 프로토콜을 설명 합니다.

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프로토콜

모든 절차는 기관 동물 관리 위원회의 맥 길 대학 몬트리올, QC, 캐나다에 의해 승인 되었다. 필요한 모든 장비는 테이블에 나열 된 나.

1. murine (C57BL/6J) IVC 스테이 시스 프로토콜

  1. 수술 준비
    참고: 이것은 생존 수술 하 고 따라서, 적절 한 무 균 기술을 항상 따라 해야. 이 포함 모든 물질이 가까이 다는 것을 확인, 청소 전과 사용 사이 악기를 살 균 하 고 모든 멸 균 자료에 대 한 작업 표면에 살 균 영역을 지정 합니다.
    1. 모든 수술 기구와 고압에 의해 재료를 소독. 유리 구슬 소독 기 소독 동물 일 경우 더 이상의 절차 한 번에 완료 되 고 사이 악기 팁 충분 하다.
    2. 100% 산소와 2.5 %isoflurane 혼합물으로 8-10 주 오래 된 C57Bl/6 남성 마우스 anesthetize
      참고: 산소와 필요한 isoflurane의 흐름을 조정 합니다.
    3. 집게와 발가락 사이 동물의 뒷 발을 곤란 하 게 하 여 anesthetization를 확인 합니다. 핀치에서 응답이 동물 마 취 나타냅니다.
    4. 느린 방출 진통제 (buprenorphine) 피하 주사를 통해 관리 합니다. 마우스 1 kg의 몸 무게 (1 mg/kg) 당 진통제의 1 밀리 그램의 복용량을 제공 합니다.
    5. 절차 동안 아무런 각 막 건조 되도록 동물의 두 눈에 눈 연 고를 배치 합니다.
    6. 0.2-몸 무게의 10 g 당 isotonic 체액의 0.5 mL을 피하 관리 합니다.
    7. 외과 테이프를 사용 하 여 수술 테이블에 장소에 동물을 수정. 복 부를 노출 하는 부정사 위치에 동물을 놓습니다. 저체온증을 방지 하기 위해가 열 패드에 수술을 수행 합니다.
    8. 머리에서에서 제거 마우스의 복 부 제 모 크림 1-2 분 복 부 지역 거 즈와 깨끗 하 고 증류수, 지우기에 대 한 응용 프로그램에 의해 필요한 경우.
    9. 또는, 작은 전기 면도기로 면도 하 여 복 부에서 머리를 제거 합니다.
    10. 어떤 절 개 하기 전에 Baxedin (액체 Gluconate BP 솔루션)와 복 부를 소독. 에탄올 알코올의 증발에 의해 발생 하는 과도 한 열 손실을 방지 하기 위해 거 즈로 가볍게 적용 됩니다.
  2. 열 등 한 베 나 정 맥 (IVC)의 노출
    1. 수술가 위를 사용 하 여 복 부 구멍 여 개복 술을 수행 합니다.
      1. 낮은 복 부에 집게와 함께 피부를 리프트 하 고 수직 절 개는 교육의 양쪽에 평행 하 게 알바. 왼쪽 또는 오른쪽에 교육의 첫 번째 절 개를 만들기 연산자의 handedness에 따라 알바. 절 개는 중간에서 초음파 이미징 나중에 지원 하기 위해 이루어집니다.
      2. 복 부의 위쪽에 두 번째, 가로 절 개를 확인 합니다.
        참고: 복 부에 침투, 시는 근육 "천을"와 있어야 다음 복 부 장기에 어떤 손상을 방지 하기 위해 수술가 위로 관통 합니다.
      3. 동물의 복 부 근육 층에 수직 및 수평 절 개를 반복 합니다. 근육을 아래 장기 손상 복 부에 침투 하는 동안 텐트를 해야 합니다.
        주의: 리프트 피부와 내장 및 다른 내부 장기에서 근육을 그들을 펑크 절 때.
    2. 피부와 근육 절 개 노출 복 부 구멍을 멀리 접어.
    3. Isotonic 솔루션은 상처의 양쪽에 적신 거 즈를 적용 하 고 내장을 외부화. 내장의 외부화를 지원 하기 위해 복 부의 양쪽에 압력을 적용 됩니다. 목화 제보 주걱으로 부드러운 움직임을 사용 하 여 내장을 이동. Isotonic 솔루션에 거 즈를 흡수 하 고 외부화 창 위에 그것을 배치.
      1. 거 즈 조직에 배치 하기 전에 미리 습 되어야 한다.
    4. 어떤 복 막 지방, 옆으로 이동 하 고 신장과 장 골 정 맥 사이 IVC 노출.
    5. 명백한 측 지점의 초기 id를 확인 합니다. 측면 지점으로 작은 표시 되지만 중요 한 정 맥 IVC, 신장 및 장 골 사이 분기 하는 혈관. 맥 관 구조는 쥐 사이 크게 달라질 수 있습니다. 마우스는 IVC의 한쪽 또는 양쪽에 측 분기 존재 할 수 있습니다.
  3. 측면 지점의 결 찰
    참고: 사이드 분기 존재 하는 경우 다음 절차 뒤에 각 한. 없는 경우 4 단계로 진행: 아래는 IVC 초기 봉합 배치. IVC의 결 찰 사이트 즉시 원심 측 분 지의 존재에 왼쪽된 신장 정 맥에 있을 것입니다.
    1. 측 분기의 각 측에 둔 해 부를 수행 합니다. 무딘 해 부 과정이 반복적으로 주변 혈관을 손상 없이 근 막 돌파 하기 위하여 부드러운 압력, 무뚝뚝한 겸 자 여.
      주의: Puncturing 또는 정 맥을 손상 하지 마십시오.
    2. 분기 들어올린 통과 정 맥 아래 6-0 비단 봉합의 섹션. 항상 해제 또는 선박을 이동 하는 때 주의. 혈관 주위 지방 질을 잡아 것이 최상 이다, 그렇지 않으면 혈관 손상의 위험이 있다.
    3. 표준 수술 매듭 묶는 기법을 사용 하 여 측면 지점 주위 수술 결 찰 봉합 집게를 사용 하 여 확인 하십시오. 완전 결 찰 100% 정 맥의 폐색을 보장 하기 위해 수행 됩니다. 적어도 3 개의 동 점 자유 투를 사용 하 여 보호 하기 위한 고 결 찰.
    4. 모든 나머지 측면 지점에 대 한 1.3 단계를 반복 합니다.
  4. IVC에서 복 부 대동맥의 해 부
    1. 왼쪽된 신장 정 맥에서 즉시 원심 IVC 주위 무딘 해 부를 수행 합니다. 복 부 대동맥 근 막 통해 IVC에 연결 되어, 따라서 IVC 및 복 부 대동맥 주위 초기 무딘 해 부 합니다.
      주의: puncturing 또는 정 맥을 손상 하지 마십시오. 파열 하거나 어느 배를 찔린 마십시오. 이것은 혈관 손상에 대 한 높은 위험 절차의 가장 중요 한 부분입니다.
    2. 계속 때까지 분명 윈도우는 IVC와 대동맥 사이 무딘 해 부를 통해 부드러운 압력을 적용.
  5. 봉합 사 배치 및 IVC 결 찰
    1. IVC와 복 부 대동맥의 아래 6-0 비단 봉합의 부분을 전달 합니다.
    2. IVC와 대동맥 사이 창을 통해 봉합을 찾습니다. 집게를 사용 하 여 봉합 하 고 복 부 대동맥 사이 IVC 스레드. 스레드를 통해 봉합 신중 하 게, 풀/펑크 IVC 및 복 부 대동맥을 하지 않으려고 합니다.
    3. 게는 IVC 주위 수술 결 찰 봉합 겸, 정 맥의 총 폐색을 보장. 다시, 왼쪽된 신장 정 맥에서 즉시 말 초는 결 찰을 확인 합니다.
    4. 3 개의 봉합은 결 찰을 확보 하 여 throw.
      참고: 그것은 또한 IVC와 대체 옵션으로 두를 분리 하기 전에 대동맥의 아래 봉합을 전달할 수 있습니다. 또는 7-0 Prolene 봉합 측면 지점과 IVC의 결 찰에 대 한 사용할 수 있습니다.
  6. 상처 폐쇄 및 수술 후 관리
    1. 복 부 대동맥 남아 있다 중단 하 고 모든 측면 지점 출혈 되었습니다 확인 합니다. IVC는 동 공이 확장 되어 나타납니다 결 찰 사이트와 혈액에서 원심 흐름 표시 됩니다.
    2. 모든 복 막 지방 및 내장 복 부 구멍에 다시 배치 합니다.
    3. 상처 봉합 집게와 6-0 비단 봉합 사를 사용 하 여 닫습니다. 실행 중인 봉합 (간단한 연속)을 사용 하 고 봉합 너무 꽉 되지 것입니다 확인 하십시오. 꽉 봉합 동물과 깨어나면 그것의 감 금 소의 주위에 이동 될 때 파열 됩니다.
      1. 또는, PDS, Ethilon, Vicryl, Dexon, 또는 스테인리스 클립을 사용 하 여 상처 폐쇄에 대 한.
    4. 먼저 적절 한 봉합 기술을 매를 사용 하 여 복 부 근육의 층 봉합
    5. 피부에 대 한 봉합 기술을 반복 하 고 충분 한 상처 폐쇄 확인 합니다.
      참고: 여러 동물에 대 한 동일한 봉합 바늘과 스레드를 사용 하는 경우 각 사용 전에 70% 에탄올에 모두 소독.
    6. 동물 마 취 가스에서 제거 하 고 적어도 30 분 동안 34 ° C 배양 기에 넣어.
    7. 다시, 0.2-0.5 mL 몸 무게의 10 g 당 isotonic 체액의 피하 관리 합니다. 체액 주어질 수 있다 다음 일에 수술 몸 무게를 유지 하기 위해 필요한 경우.
    8. 성공적인 수술을 보장 하는 동물의 전반적인 건강을 평가 복구까지 동물을 모니터링 합니다.
      주의: 이 같은 침략 절차에 대 한 약간의 돌출된 자세를 기대 하지만 동물 빠르면 30 분 후 작업이 정상적으로 작동 합니다.
    9. 그것의 자신의 감 금에 있는 동물을 놓고 완전히 복구 될 때까지 다른 동물 들과 함께 그것을 배치 하지 마십시오.
    10. 다시 최대 48 h postop에 대 한 진통제를 매일 관리 합니다.
    11. 복구에 동물 동안 감 금 소의 바닥에 음식을 놓습니다. 다른 특별 한 치료는 일반적으로 필요 하지 않습니다.
    12. 빨갛게, 붓기, 또는 방전 및 감염의 다른 증상에 대 한 상처 사이트를 검사 합니다.
    13. 필요한 경우 7-10 일 후에 봉합을 제거 합니다.
    14. 수술은 성공 하는 경우 즉시 안락사를 수행 (예를 들어, 중요 한 혈관 손상 및 혈액 손실) 또는 동물 수술 치료와 개선 되지 않습니다. 안락사는 48 h postop에서 일반적으로 수행 됩니다. 더 이상 실험에 대 한 7-0 Prolene 사용 하 여 측면 가지는 IVC와 5-0 Vicryl 봉합 복 부 구멍을 선.
      1. 앞에서 설명한, 제외 하 고 5 %isoflurane로 유도에 동물의 anesthetization에 의해 안락사를 수행 합니다. 이것은 100% CO2 마 취 동안 질 식 옵니다.
      2. 질 (하트 비트 및 아무 호흡의 손실)에 의해 안락사의 확인 후 완전 한 안락사를 위해 자 궁 경부 전위를 수행 합니다.

2. 고주파 초음파 프로토콜

참고:이 프로토콜은 레이디 데이비스 연구소 설치류 형질 코어 SOP 고주파 초음파 이미징에서 적응. 이 프로토콜 수술 24 시간 후, 실시 하지만 동물 수술에 잘 응답으로 빨리 할 수 있습니다. 프로토콜 건강 한 쥐에서 언제 든 지 실행 될 수 있습니다 그리고 수술 전후 비교를 그렇게 자주 이루어집니다.

  1. 동물의 준비
    1. 유도 챔버에서 동물을 배치 하 고 100% 산소와 2.5 %isoflurane 혼합물으로 동물을 anesthetize.
    2. 심 박수 및 온도 모니터를 켭니다. 절차 동안 동물을 따뜻하게 유지 하는 테이블 위에 위치 열 램프.
    3. 유도 챔버에서 동물을 제거 하 고 각 막 건조 방지 하기 위해 눈 윤 활 유를 적용. 분석 플랫폼에 동물을 동물의 입/코에 마 취 튜브를 부착 하십시오.
    4. 따뜻한 초음파 37 ° C에 젤 하 고 동물의 복 부에 젤을 놓습니다. 초음파 젤은 펌프 물 젤 병 주위에 감싸인 코일을 통해 따뜻한 물 난방 시스템을 사용 하 여 예 열.
    5. 심장 박동 측정 (필요한 경우), 분석 플랫폼의 4 전극에 전극 젤을 넣고 수술 테이프로 플랫폼/전극에 동물의 발을 해결. 장소는 IVC의 이미징 부정사 위치에 동물. 이미징 시스템 초음파 분석 플랫폼은 예 열 하 고 동물을 모니터링 하기 위한 전극 포함을 포함 합니다.
    6. 온도 측정용 온도계에 전극 젤을 넣고 동물의 항문에 삽입.
    7. 열 램프 및 isoflurane 그 동물 편안 하 게, 30-70 bpm 사이 호흡 그리고 37 ° c.에 유지 되도록 필요에 따라 조정
    8. 필요한 경우, 동물의 복 부를 면도 하거나 제 모 크림으로 털을 제거 합니다. 1-2 분 동안 적용 하 고 깨끗 한 거 즈와 증류수로 닦아.
      참고: 너무 많은 머리는 이미지의 품질을 발생할 수 있습니다.
    9. 거 즈 또는 어떤 초과 초음파 젤을 잡으려고 동물의 측면에 배치 합니다.
  2. IVC 및 혈전 영상
    1. 이미징 소프트웨어를 켜고 새로운 연구를 시작.
    2. 이미징에 대 한 적절 한 scanhead를 선택 합니다. 복 부 장기는 scanhead 여기 사용 (주파수: 35 MHz, 초점 거리: 12.8 m m).
    3. 동물에 대 한 관련 정보를 기록 합니다. 이 동물을 포함할 수 있습니다 ID, 성별, 체중, 생년월일, 스트레인, 등등.
    4. 그것은 동물에 초음파 젤 감 동적 때까지 아래로 scanhead를 낮춥니다.
    5. 동물의 2 차원 이미징 시작 scanhead 조사를 시작 합니다. 이 모드에서 이미지는 2 차원, 회색의 다양 한 음영으로 표시 됩니다.
    6. IVC 및 복 부 대동맥 z-비행기를 통해 scanhead 이동 하면서 x-및 y-비행기를 통해 마우스 플랫폼을 이동 하 여 찾습니다.
      참고: 혈액이 혈관의 벽 화이트와 내부 혈액 거의 나타납니다 블랙. 복 부 대동맥 달아 고동치는 두꺼운 벽, 이미지 화면는 scanhead 이동 하 고 아래로 IVC 얇은 벽과 압축/쉽게에 확장 하는 동안. 결 찰 사이트와 혈관을 넓힐 것 이다 정 맥 벽 지점에 올 것 이다 명백한 될 것입니다. 안으로 형성 하는 어떤 혈전 초음파 영상에서 고체 되며 정 맥 벽이 하는 것 처럼 쉽게 압축 하지 않습니다. 정 맥 결 찰, 아니 혈전 형성은 위에 압축 됩니다.
    7. 위치에 IVC와 결 찰 사이트 센터 그들, 초음파의 초점에 가장 정확한 이미지를 달성 하기 위하여.
      1. 이미지 너무 어두운 명확 하 게 볼 젤을 조정 하 고 목화 제보 주걱으로 모든 기포를 제거 하는 경우.
      2. 필요한 경우 scanhead 왼쪽 이나 오른쪽으로 45 ° 기울기와 정 맥을 명확 하 게 볼 수 있는 동물 플랫폼을 재조정. 이 경우는 scanhead 간섭이 이루어집니다. 이 시나리오에서는 정 맥을 봉합을 피하기 위해 측면 각도에서 이미지 필요 합니다.
        참고: 이미지 간섭은 어두운 피부 패치를 동물, 불 쌍 한 상처 봉합 배치, 또는 초음파 젤에 거품에 의해 가장 자주 발생 합니다.
    8. 소프트웨어를 사용 하 여 어떤 원하는 구조를의 사진을 찍어 고 어떤 측정 도구를 사용 하 여 측정. 일반적인 측정은 혈전의 단면적 또는 결 찰 사이트의 너비를 포함합니다.
    9. 펄스 파 도플러 혈 류 측정을 이미징 모드를 변경 합니다. 이 모드에서는 혈관 혈액 흐름의 이미징 및 다른 변수 간의 흐름 속도의 측정.
    10. 동물의 후부 끝 낮은 분석 플랫폼을 기울기.
    11. 그것은 동물의 후부 끝에서 약 30 °의 각도에서 젤 연락는 scanhead의 각도/위치 변경.
    12. 동물 플랫폼과 scanhead를 재조 정할. 필요한 경우는 IVC와 결 찰을 재배치 합니다.
    13. 스테이 시스를 확인 하 고 원하는 어떤 이미지를 내 고 사이트 주위 혈액 흐름 측정을 확인 합니다. 혈액 흐름의 일반적인 측정에는 평균 속도, 최대 속도, 또는 중간 속도 포함 됩니다.
    14. 어떤 측정 또는 촬영 한 이미지를 저장 합니다.
  3. 청소 및 동물성 복구
    1. 초기 위치를 초기 위치로, 또한 동물 플랫폼을 위치를 scanhead를 올립니다.
    2. 거 즈와 동물에서 과잉 젤을 제거 합니다. 이렇게 부드럽게 상처 봉합 파열 하지 것입니다 있도록.
    3. 동물의 항문에서 온도계를 제거 하 고 플랫폼에서 동물을 걸릴.
    4. 그것의 감 금 소 및 34 ° C 배양 기에서 동물을 놓습니다.
    5. 복구까지 동물을 모니터링 합니다. 절차는 매우 작고 비-침략 적. 동물 신속 하 게 깨울 것 이다. 이 프로토콜의 섹션 1.6 다음 일에 동물을 모니터링을 계속 합니다.
    6. 거 즈와 소독 제 동물 플랫폼을 청소.
    7. 거 즈와 증류수 깨끗 scanhead 지우기.
      주의: scanhead를 아주 부드럽게 청소 및 증류수 만으로.
    8. 다음 동물에 대 한 2 단계를 반복 합니다.
      1. 모든 과목과 함께 한다면, 모든 이미지와 녹음 저장 되었습니다 확인 합니다. 그런 다음 모든 장비 및 소프트웨어 해제 합니다.

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결과

스테이 시스 정 맥 혈전 증 모델

스테이 시스 모델에서 쥐 취는, 그리고 절 개 폭 열 등 한 베 나 정 맥 (IVC)로 이루어집니다. 절 개 초음파 프로브와 함께 방해 하지 것 이라고 하는 방식으로 중간 개복 술 대신 마우스의 왼쪽 또는 오른쪽에 이루어집니다. 복 부 근육과 피부는 배 다시 IVC (그림 1)을 폭로. 첫째, 옆 분 지는 6-0 비단 봉합 (그림 2)와 출혈. 그리고는 IVC 무딘 해 부 대동맥에서 구분은 실크 IVC (그림 3A-C) 주위에 배치 됩니다. IVC는 6-0 비단 봉합으로 출혈입니다. 결 찰 사이트 아래 IVC의 ...

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토론

스테이 시스 모델을 사용 하 여 성공적인 정 맥 혈전 형성에 대 한 몇 가지 중요 한 단계가 있습니다. 유도 정 맥 혈전 증의 열 등 한 베 나 정 맥과 대동맥 주변 지방의 축적으로 인해 오래 된 쥐에 있는 더 많은 도전 이다. 이상적으로,이 절차를 진행 하는 쥐 8-10 주 오래 된 해야 합니다. 신중 하지 무딘 해 부 및 합자는 IVC 내 피 손상을 유도를 취해야 한다. 또한, 수술 후 적어도 30 분 동안 34 ° C 배양 기에서 동물을 유지 하 고 전체 복구 후에 다른 동물의 회사에 반환에 결정적 이다. 수술은 제대로 동물 수술 치료 동안 너무나 잘 작동 합니다. 그들은 불구가 됨, paresis, 요 실 금 등 심각한 부작용을 전시 한다. 그들은 즉시 수술 후, 감소 된 운동 및 자세를 약간 돌출된을 전시 수 있습니다 하지만이 나타나지 않습니다 종종 진통제는 효과적 이며 수술 제대로 수행으로.

스테이 시스 모델 재현 크기 측정 한 마우스에서 다른 큰 혈전을 생성합니다. ...

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공개 사항

저자는 공개 없다.

감사의 글

이 작품은 심장과 스트로크 캐나다 재단에서 교부 금에 의해 그리고에 모리스와 벨라 Fainman 가족 기초에 의해 지원 되었다. 저자에 대 한 그녀의 기술 VEVO770 초음파 이미징 시스템 베로 미를 감사 하 고 싶습니다.

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재료

이 논문에 사용된 재료 목록
이름회사카탈로그 번호댓글
6-0 퍼마핸드 실크 봉합Ethicon706G
수술용 가위파인 사이언스 도구20830-00
봉합 묶는 집게파인 사이언스 도구20830-00
무딘 펜치 (직선 및 곡선형)파인 사이언스 도구20830-00
니들 드라이버파인 사이언스 도구13002-10
Moria Spring ScissorsFine Science Tools15396-00
1ml 주사기BD Biosciences
26G 바늘Becton Dickinson & Co.
VEVO 770 고해상도 이미징 시스템Visualsonics더 이상 판매
SR 부프레노르핀ZooPharm수의사
수술 현미경Leica LeicaM651
Systan eye oinmentAlcon288/28062-0
2x2 sterile GauzeCDMV#104148
Cotton Tip JGH
JGH#AKEN4061
인큐베이터
Dispomed
마취실, 호스 및 관리 장비Dispomed
헤어 리무버Nair
Water 가열 하드 패드Braintree Scientific, Inc.#HHP-2
Gaymar 히터 워터 펌프 TP500MATVET Inc.#R-500305
적외선 전열램프electrimat inc.#1R175R-PAR
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참고문헌

  1. Fowkes, F. J., Price, J. F., Fowkes, F. G. Incidence of diagnosed deep vein thrombosis in the general population: systematic review. Eur J Vasc Endovasc Surg. 25 (1), 1-5 (2003).
  2. McGuinness, C. L., et al. Recruitment of labelled monocytes by experimental venous thrombi. Thromb Haemost. 85 (6), 1018-1024 (2001).
  3. Singh, I., et al. Failure of thrombus to resolve in urokinase-type plasminogen activator gene-knockout mice: rescue by normal bone marrow-derived cells. Circulation. 107 (6), 869-875 (2003).
  4. Itoh, K., Ieko, M., Hiraguchi, E., Kitayama, H., Tsukamoto, E. In vivo kinetics of 99mTc labeled recombinant tissue plasminogen activator in rabbits. Ann Nucl Med. 8 (3), 193-199 (1994).
  5. Kang, C., Bonneau, M., Brouland, J. P., Bal dit Sollier, C., Drouet, L. In vivo pig models of venous thrombosis mimicking human disease. Thromb Haemost. 89 (2), 256-263 (2003).
  6. Knight, L. C., Baidoo, K. E., Romano, J. E., Gabriel, J. L., Maurer, A. H. Imaging pulmonary emboli and deep venous thrombi with 99mTc-bitistatin, a platelet-binding polypeptide from viper venom. J Nucl Med. 41 (6), 1056-1064 (2000).
  7. Wakefield, T. W., et al. Venous thrombosis prophylaxis by inflammatory inhibition without anticoagulation therapy. J Vasc Surg. 31 (2), 309-324 (2000).
  8. Robins, R. S., et al. Vascular Gas6 contributes to thrombogenesis and promotes tissue factor up-regulation after vessel injury in mice. Blood. 121 (4), 692-699 (2013).
  9. Aghourian, M. N., Lemarie, C. A., Bertin, F. R., Blostein, M. D. Prostaglandin E synthase is upregulated by Gas6 during cancer-induced venous thrombosis. Blood. 127 (6), 769-777 (2016).
  10. Laurance, S., et al. Gas6 (Growth Arrest-Specific 6) Promotes Inflammatory (CCR2hiCX3CR1lo) Monocyte Recruitment in Venous Thrombosis. Arterioscler Thromb Vasc Biol. , (2017).
  11. Diaz, J. A., et al. Critical review of mouse models of venous thrombosis. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 32 (3), 556-562 (2012).
  12. Aghourian, M. N., Lemarie, C. A., Blostein, M. D. In vivo monitoring of venous thrombosis in mice. J Thromb Haemost. 10 (3), 447-452 (2012).
  13. Brandt, M., et al. Deep vein thrombus formation induced by flow reduction in mice is determined by venous side branches. Clin Hemorheol Microcirc. 56 (2), 145-152 (2014).
  14. Diaz, J. A., Farris, D. M., Wrobleski, S. K., Myers, D. D., Wakefield, T. W. Inferior vena cava branch variations in C57BL/6 mice have an impact on thrombus size in an IVC ligation (stasis) model. J Thromb Haemost. 13 (4), 660-664 (2015).
  15. Luther, N., et al. Innate Effector-Memory T Cell Activation Regulates Post-Thrombotic Vein Wall Inflammation and Thrombus Resolution. Circ Res. , (2016).
  16. Subramaniam, S., et al. Distinct contributions of complement factors to platelet activation and fibrin formation in venous thrombus development. Blood. 129 (16), 2291-2302 (2017).
  17. Diaz, J. A., et al. Thrombogenesis with continuous blood flow in the inferior vena cava. A novel mouse model. Thromb Haemost. 104 (2), 366-375 (2010).

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