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방법 논문

스테이 시스 고주파 초음파에 의해 모니터링 하는 쥐에 의해 유도 된 깊은 정 맥 혈전 증

9.8K 조회수

DOI:

10.3791/57392

2018년 4월 13일

이 논문에서

요약

현재 프로토콜 스테이 시스 모델을 사용 하 여 정 맥 혈전 증을 얻기에 단계를 설명 합니다. 또한, 우리는 시간이 지남에 혈전 형성 및 해상도 측정 하는 비-침략 적 방법을 사용 하는.

초록

정 맥 혈전 증 1에서 500의 연례 부각 인구의 1-2%에 영향을 미치는 일반적인 상태 이다. 정 맥 혈전 증 폐 색 전 증 또는 결과 만성적인 다리 통증, 붓기, 및 궤, 특징 후 thrombotic 증후군 또는 만성 폐 고혈압 인 중요 한 만성 통해 죽음으로 이어질 수 있습니다 호흡기 타협. 가장 일반적인 심혈 관 질환 심근 경색 및 허 혈 성 뇌졸중 후 이며 암, 조직의 질환, 수술 등 주요 외상 다른 장애의 과정을 복잡 하 게 수로 모든 의료 분야에 대 한 임상 도전 이다.

실험 모델은 이러한 메커니즘을 연구 하는 데 필요한. 스테이 시스 모델 일관성 혈전 크기와 혈전의 정량 금액을 유도합니다. 그러나, 그것은 체계적으로 열 등 한 베 나 정 맥 혈전 크기에서 변화 및 모든 잘못 된 데이터 해석에의 측 지점 선 하는 데 필요한. 초음파를 사용 하 여 혈전 크기를 측정 하는 비-침략 적 기술을 개발 했습니다. 이 기술을 사용 하 여, 우리가 평가할 수 혈전 개발 및 해상도 같은 동물에서 시간이 지남에. 이 방법은 마우스 교체, 감소, 및 연구에 있는 동물의 구체화의 원리와 일치 하는 정 맥 혈전 증의 정량화에 필요한 수를 제한 합니다. 우리는 초음파로 혈전 무게와 측정으로 혈전 크기 상관의 조직학 분석 얻은 증명 하고있다. 따라서, 현재 연구에 높은 주파수의 초음파를 사용 하 여 모니터링 하는 방법 열 등 한 베 나 정 맥 stasis 모델을 사용 하 여 마우스에 깊은 정 맥 혈전 증을 유발 하는 방법을 설명 합니다.

서론

정 맥 혈전 색 전 증 (VTE), 깊은 정 맥 혈전 증 (DVT) 폐 색 전 증의 구성 된 심근 경색 및 뇌졸중 후 심장 혈관 죽음의 세 번째 주요 원인입니다. 그것은 1에서 5001의 연간 발생률을 인구의 1-2%에 영향을 미치는 일반적인 조건. VTE 이어질 수 있습니다: 1) 폐 색 전 증; 통해 죽음 만성적인 다리 통증, 붓기, 및 궤; 특징 2) 후 thrombotic 증후군 또는 3) 중요 한 만성 호흡 타협의 결과로 만성 폐 고혈압. VTE는 다중 요인 질병 이며 그것은 전에 백 년 이상 설명으로 혈액의 흐름, 혈관 벽, 또는 hypercoagulable 국가 응고 fibrinolytic 시스템 사이의 균형의 붕괴 때문에 손상의 스테이 시스에서 발생할 수 있습니다. Virchow에 의해 Virchow의 3 인조로 알려져 있다.

대부분의 경우에서 그것은 인간의 DVT 샘플을 얻을 수, 때문에 연구원은 DVT의 실험 동물 모델을 개발 했습니다. 쥐2, 마우스3, 토끼4, 돼지5,6

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프로토콜

모든 절차는 기관 동물 관리 위원회의 맥 길 대학 몬트리올, QC, 캐나다에 의해 승인 되었다. 필요한 모든 장비는 테이블에 나열 된 나.

1. murine (C57BL/6J) IVC 스테이 시스 프로토콜

  1. 수술 준비
    참고: 이것은 생존 수술 하 고 따라서, 적절 한 무 균 기술을 항상 따라 해야. 이 포함 모든 물질이 가까이 다는 것을 확인, 청소 전과 사용 사이 악기를 살 균 하 고 모든 멸 균 자료에 대 한 작업 표면에 살 균 영역을 지정 합니다.
    1. 모든 수술 기구와 고압에 의해 재료를 소독. 유리 구슬 소독 기 소독 동물 일 경우 더 이상의 절차 한 번에 완료 되 고 사이 악기 팁 충분 하다.
    2. 100% 산소와 2.5 %isoflurane 혼합물으로 8-10 주 오래 된 C57Bl/6 남성 마우스 anesthetize
      참고: 산소와 필요한 isoflurane의 흐름을 조정 합니다.
    3. 집게와 발가락 사이 동물의 뒷 발을 곤란 하 게 하 여 anesthetization를 확인 합니다. 핀치에서 응답이 동물 마 취 나타냅니다.
    4. 느린 방출 진통제 (buprenorphine) 피하 주사를 통해 관리 합니다. 마우스 1 k....

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결과

스테이 시스 정 맥 혈전 증 모델

스테이 시스 모델에서 쥐 취는, 그리고 절 개 폭 열 등 한 베 나 정 맥 (IVC)로 이루어집니다. 절 개 초음파 프로브와 함께 방해 하지 것 이라고 하는 방식으로 중간 개복 술 대신 마우스의 왼쪽 또는 오른쪽에 이루어집니다. 복 부 근육과 피부는 배 다시 IVC (그림 1)을 폭로. 첫째, 옆 분 지는 6-0 비단 봉합 (그림 2)와 출혈. 그리고는 IVC 무딘 해 부 대동맥에서 구분은 실크 IVC (그림 3A-C) 주위에 배치 됩니다. IVC는 6-0 비단 봉합으로 출혈입니다. 결 찰 사이트 아래 IVC의 .......

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토론

스테이 시스 모델을 사용 하 여 성공적인 정 맥 혈전 형성에 대 한 몇 가지 중요 한 단계가 있습니다. 유도 정 맥 혈전 증의 열 등 한 베 나 정 맥과 대동맥 주변 지방의 축적으로 인해 오래 된 쥐에 있는 더 많은 도전 이다. 이상적으로,이 절차를 진행 하는 쥐 8-10 주 오래 된 해야 합니다. 신중 하지 무딘 해 부 및 합자는 IVC 내 피 손상을 유도를 취해야 한다. 또한, 수술 후 적어도 30 분 동안 34 ° C 배양 기에서 동물을 유지 하 고 전체 복구 후에 다른 동물의 회사에 반환에 결정적 이다. 수술은 제대로 동물 수술 치료 동안 너무나 잘 작동 합니다. 그들은 불구가 됨, paresis, 요 실 금 등 심각한 부작용을 전시 한다. 그들은 즉시 수술 후, 감소 된 운동 및 자세를 약간 돌출된을 전시 수 있습니다 하지만이 나타나지 않습니다 종종 진통제는 효과적 이며 수술 제대로 수행으로.

스테이 시스 모델 재현 크기 측정 한 마우스에서 다른 큰 혈전을 생성합니다. .......

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공개 사항

저자는 공개 없다.

감사의 글

이 작품은 심장과 스트로크 캐나다 재단에서 교부 금에 의해 그리고에 모리스와 벨라 Fainman 가족 기초에 의해 지원 되었다. 저자에 대 한 그녀의 기술 VEVO770 초음파 이미징 시스템 베로 미를 감사 하 고 싶습니다.

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재료

이 논문에 사용된 재료 목록
이름회사카탈로그 번호댓글
6-0 퍼마핸드 실크 봉합Ethicon706G
수술용 가위파인 사이언스 도구20830-00
봉합 묶는 집게파인 사이언스 도구20830-00
무딘 펜치 (직선 및 곡선형)파인 사이언스 도구20830-00
니들 드라이버파인 사이언스 도구13002-10
Moria Spring ScissorsFine Science Tools15396-00
1ml 주사기BD Biosciences
26G 바늘Becton Dickinson & Co.
VEVO 770 고해상도 이미징 시스템Visualsonics더 이상 판매
SR 부프레노르핀ZooPharm수의사
수술 현미경Leica LeicaM651
Systan eye oinmentAlcon288/28062-0
2x2 sterile GauzeCDMV#104148
Cotton Tip JGH
JGH#AKEN4061
인큐베이터
Dispomed
마취실, 호스 및 관리 장비Dispomed
헤어 리무버Nair
Water 가열 하드 패드Braintree Scientific, Inc.#HHP-2
Gaymar 히터 워터 펌프 TP500MATVET Inc.#R-500305
적외선 전열램프electrimat inc.#1R175R-PAR
마우스 직장 온도 propeemkaTECHNOLOGIES
JGH의멸균수
사 되지 않음Transpore 저자극성 수술용 테이프 CDMV#7411 초음파 젤(Aquasonic-100)의 어플리케이터 Dufort & Isoflurane의 Lavigne

참고문헌

  1. Fowkes, F. J., Price, J. F., Fowkes, F. G. Incidence of diagnosed deep vein thrombosis in the general population: systematic review. Eur J Vasc Endovasc Surg. 25 (1), 1-5 (2003).
  2. McGuinness, C. L., et al. Recruitment of labelled monocytes b....

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재인쇄 및 허가

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