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방법 논문

분열 효 모 섬으로 불안정 프로테아좀 돌연변이 선택할 임의의 Mutagenesis 유전자 타겟팅

10.2K 조회수

⸱

DOI:

10.3791/57499

⸱

2018년 5월 15일

 , 
1Department of Biological Sciences, Korea Advanced Institute of Science and Technology

이 논문에서

요약

이 문서에는 분열 효 모에 대상 유전자의 무작위 mutagenesis에 대 한 자세한 방법을 설명합니다. 예를 들어, 우리가 대상 rpt4 +, 19S 프로테아좀 섬으로 불안정 돌연변이 대 한 스크린의 소 단위를 인코딩하는.

초록

대상 유전자의 무작위 mutagenesis 원하는 표현 형을 생성 하는 돌연변이 식별 하기 위해 일반적으로 사용 됩니다. 무작위 mutagenesis 달성 하는 데 사용할 수 있습니다 방법의 오류가 PCR는 돌연변이의 다양 한 풀을 생성 하기 위한 편리 하 고 효율적인 전략 이다 (즉., 돌연변이 도서관). 연구원은 다른 게놈 영역을 영향을 받지 떠나는 동안 유전자의 코딩 지구 같은 미리 정의 된 영역을 변형 하고자 하는 경우 오류가 PCR 방법의 선택입니다. 돌연변이 라이브러리 오류가 PCR에 의해 증폭 되어, 후 적당 한 플라스 미드로 복제 해야 합니다. 오류가 PCR에 의해 생성 된 라이브러리의 크기는 복제 단계의 효율에 의해 제한 됩니다. 그러나, 분열 효 모, Schizosaccharomyces pombe, 복제 단계는 매우 효율적인 원스텝 퓨전 변환에 대 한 구문을 생성 하는 PCR의 사용으로 대체할 수 있습니다. 원하는 고기의 돌연변이 다음 적절 한 기자를 사용 하 여 선택할 수 있습니다. 여기,이 전략 자세하게, 예를 들어, centromeric 섬으로에 삽입 기자 복용 설명 합니다.

서론

앞으로 유전학 연구원 추구 특정 표현 형을 표시 하는 자연적 사건 돌연변이 및 유전 분석을 수행 고전적인 방법입니다. 반전 유전학에서 관심사의 유전자에 돌연변이 소개 하 고 표현 형 검사. 후자의 경우 대상 유전자의 무작위 mutagenesis 이후에 온도 감도 등 원하는 고기에 대 한 선택 또는 효소 활동을 변경 하는 돌연변이의 풀을 생성 하 자주 사용 됩니다. 다양 한 방법은 오류가 PCR1;를 포함 하 여 임의의 mutagenesis 달성 하는 데 사용할 수 있습니다. UV 방사선 조사2. 화학 mutagens, 에틸 methanesulfonate (EMS) 등 질소 산3; - mutD5 4; 표현 등 임시 mutator 긴장의 사용 그리고 DNA5를 걸어 갔다입니다.

여기, 우리는 우리 분열 효 모에 대상 유전자 돌연변이 풀을 생성 하는 오류가 PCR을 이용 하는 반전 유전학 전략을 설명 합니다. 로 한의 이름에서이 메서드는 PCR 동안 일부러 오류를 도입 하 여 돌연변이 생성 합니다. 다른 mutagenesis 방법과 달리 오류가 PCR mutagenized 될 영역을 정의 하는 사용자 수 있습니다. 이것은 관심사의 단백질/도메인의 기능을 연구 하는 노력에 특히 유용 하다.

이 무작위 mutagenesis 절차를 보여, 우리 여기 사용 rpt4 +, 19S 프로테아좀 소 단위를 인코딩하는 예를 들어. Rpt4 분열 효 모6,7,,89, 다른 유기 체에 있는 베이스-독립적인 기능을가지고 표시 되었습니다 및 베이스 결함 단백질을 변경 하 여 간접 효과 일으킬 수 있습니다. 수준입니다. 우리는, 그러므로, 섬으로에 프로테아좀의 기능을 조사 하는 목적으로 베이스-독립적인 변화를 유발 하는 돌연변이 대 한 검사.

오류가 PCR 뇌관을 바인딩할 위치를 조정 하 여 어떤 유전자 영역에 적용할 수 있습니다. 적절 한 기자와 원하는 phenotypic 변화 하는 돌연변이 확인할 수 있습니다. 여기, 우리는 ade6 + 기자 삽입 활용는 centromere 1 외부 반복 (otr) 지역10. Ade6 + 기자 야생-타입 상태;에서 침묵은 그래서 제정 섬으로이 지역11에 형성 된다 이 빨간 식민지10으로 표시 됩니다. Centromere는에 제정 섬으로 destabilizes 하는 돌연변이 ade6 + 기자, 백색 식민지로 시각 이다는 식으로 이어질 것입니다.

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프로토콜

1입니다. 미디어 준비

  1. 준비 효 모 추출 보충 교재 (예), 네 아데닌 (예 로우 에이드), Pombe 조미료 매체 (PMG12), 그리고 PMG 없이 아데닌 (PMG-Ade) 없이 표 1에 설명 된 대로 구성 요소를 혼합 하 여. 예-에이드 (Ade 낮은)와 PMG-에이드 접시 같은 구성 요소를 모두 하지만 아데닌 후자에서 생략 됩니다.
    1. 다음 소금 (50 x) 주식을 사용: 52.5 g/L MgCl2·6H2O, 2 g/L CaCl2·2H2O, 50 g/L KCl, 2 g/L 나24 에 증류수 그래서. 필터는 0.22 μ m 기 공 크기 필터를 사용 하 여 소독 및 4 ° c.에 저장
    2. 다음과 같은 비타민을 사용 하 여 (1, 000 x) 주식: 1 g/L pantothenate, 10 g/L 니코틴산 산, 이노 시 톨 10 g/L, 증류수 비오 틴 10 mg/L. 필터는 0.22 μ m 기 공 크기 필터를 사용 하 여 소독 및 4 ° c.에 저장
    3. 다음 미네랄을 사용 하 여 (10, 000 x) 주식: 붕 5 g/L, 4 g/L MnSO4, 4 g/L ZnSO4·7H2O, 2 g/L FeCl2·4H2O, 0.4 g/L MoO3, 1 g/L 0.4 g/L CuSO4·5H2O 기 증류수에 연산 10 g/L. 필터는 0.22 μ m 기 공 크기 필터를 사용 하 여 소독 및 4 ° c.에 저장
      참고: 네 액체 매체는 agar를 생략 하 여 만들 수 있습니다.
  2. 압력솥 매체 200 rpm의 속도로 저 어 바 교 반 하면서 60 ° C 아래에 그것을 냉각 하 고.
  3. 예 + G418 (geneticin) 판 예 매체 1 mL/L G418 재고 솔루션을 추가 합니다.
    1. 다음 G418 사용 (1, 000 x) 주식: 100 mg/mL 증류수에 G418. 필터-20 ° c.에 0.22 μ m 기 공 크기 필터, 1.5 mL 원심 분리기 튜브 및 저장소에 aliquot를 사용 하 여 소독
  4. 또 다른 5-10 분, 약 수에 대 한 미디어 90 mm 페 트리 접시 (대략 40 접시를 중간 aliquots의 1 L에 저. 4 ° c.에 접시를 저장

2. 복제 rpt4 + 와 그것의 5' / 3' Utr의

  1. PCR 뇌관 p1와 p2 수행 (그림 1A) 분열을 사용 하 여 50 µ L (~ 1 µ g DNA, 20 U 효소 반응 버퍼 x 1)의 총 볼륨에 템플릿으로 genomic DNA (gDNA)를 효 모 그리고 3,315 베이스 증폭 반응 사이클을 표 2 에 설명 된 적용 쌍 (bp) 조각 rpt4 + 및 그것의 5' / 3' Utr. (그림 1A) 제조업체 지시에 따라 정화 키트13 를 사용 하 여 PCR 제품을 정화.
  2. PBlueScript KS(-) 벡터14 16 18 물 목욕에서 37 ° C에서 rpt4 + 와 그것의 5' / 3' Utr BamH1 와 Xho1 (~ 1 µ g의 DNA, 효소, U-20-1 x 소화 버퍼) 20 µ L의 전체 볼륨에 포함 된 증폭된 한 DNA 파편을 소화 h (그림 1B)입니다.
  3. 젤 소화 벡터 (1.2 %agarose 젤)를 정화 하 고 태 기반 agarose 젤 전기 이동 법 (100 V, 1 시간)을 수행, 원하는 크기의 DNA 밴드를 절 개 하 고 젤 추출 키트15DNA를 분리 하 여 DNA 삽입.
  4. 벡터 및 벡터 DNA의 50-100 ng를 포함 20 µ L 결 찰 반응을 수행 하 여 T4 DNA 리가 사용 하 여 DNA 삽입을 위하여는 ~ 삽입 DNA, 400 U T4 DNA 리가 고 결 찰 버퍼 x 1의 3 어 금 니 과잉. 16-18 h 18 ° C에이 혼합물을 품 어.
  5. 열 충격 70을 적용 하 여 합자 DNA를 대장균 DH5α의 100 µ L에 변환 42 ° c.에 s 파운드의 1 mL을 추가 하 고 복구에 대 한 37 ° C에서 1 시간에 품 어. 원심 (13,800 x g)를 변형된 대장균 의 모든 파운드-암 피 실린 (라) 접시에 셀 16 h 37 ° C에서 품 어, 표면에 뜨는 접시를 삭제 합니다.
  6. 이쑤시개와 4-8 식민지를 선택 하 고 하룻밤 3 mL 라 중간에서 37 ° C에서 성장.
  7. 한 플라스 미드 정화 키트16 제조업체의 프로토콜에 따라 사용 되는 플라스 미드를 분리 하 고 고립 된 플라스 미드, 각 제한 효소 (BamH1 및 의 U 5의 5 µ L로 분석 금지 효소 소화를 수행 Xho1) 제한 버퍼 1. 3 헤 시퀀싱 후보 플라스 미드로 복제 하는 확인에 대 한 물 목욕에서 37 ° C에서 반응 혼합물을 품 어.

3. 침묵 돌연변이 (Xho1 제한 사이트) 소개

  1. 한 쌍의 33-bp 뇌관 (p3 및 p4) 그렇지 않으면 보완 순서로 원하는 돌연변이 포함 하는 디자인.
  2. 25 µ L의 전체 볼륨에 높은 중 합 효소17 (그림 1C) PCR을 수행 (10 복제 플라스 미드, 10 pmol 뇌관 믹스, 2 U 효소, 1 x 반응 버퍼 2 µ L의 ng) 자전거 매개 변수를 사용 하 여 표 3에 나열 된.
  3. DpnI 20 µ L (20 U 효소, 1 x 소화 버퍼) 37 ° c 물에서의 전체 볼륨에 h 1에 대 한 목욕으로 템플릿 플라스 미드를 소화.
  4. 변환 하 고, 전파 하 고 분리, 한 시퀀싱 단계 2.5-2.7에서에서 설명한 대로 자동 돌연변이 포함 하는 플라스 미드.
    참고: 또한 단일 반응18여러 DNA 파편의 합류에 대 한 허용 하는 복제 메서드를 사용 하 여 자동 돌연변이 도입 수 있습니다.

4. 무작위 Mutagenesis의 rpt4 + 오류가 PCR에 의해

  1. 서식 파일, 뇌관 p5 및 p6, 50 µ L (단계 4.1.1, 10 pmol 뇌관 믹스, 2.5 U 효소, 1 x 반응 버퍼 2 µ L에서에서 정의 하는 서식 파일의 금액)의 총 볼륨으로 침묵 돌연변이 (Xho1 사이트)와 플라스 미드를 사용 하 여 오류가 PCR을 수행 그리고 높은 오류를 생성 하도록 설계 된 특별 한 중 합 효소 평가19 (그림 1D). 표 2에 설명 된 대로 PCR을 수행 합니다.
    1. 서식 파일 플라스 미드의 4-5 µ g를 사용 하 여 1 bp/kb (kilobase) 돌연변이 주파수를 제어.
      참고: 고 농도 (> 500 ng / µ L) 소형 예비 키트20를 사용 하 여 얻을 수 있습니다, 플라스 미드의 필수입니다.
  2. 젤 전기 이동 법을 사용 하 여 확인 (1.2 %agarose 젤) 2670 bp의 PCR 제품. 2.5 단계에서 설명한 대로 젤이 PCR 제품을 정화.

5. 퓨전 PCR 파편 (칸, 3' UTR)의 준비

  1. 서식 파일, 프라이 머 p 7과 p8,으로 pFA6a KANMX621 을 사용 하 여 PCR을 수행 하 고 마커 (칸) 조각을 표 4에 나열 된 조건. 젤 단계 2.5 (그림 1E)에 설명 된 대로 결과 1480-bp 조각 정화.
    1. 정지 codon 돌연변이 그것의 인접 한 유전자의 코딩 지구에 대 한 타겟 유전자의 500 이상의 구분 됩니다 경우 확인 혈압. 이 지구는 500 미만 때 생 터미네이터 사용할 수 없습니다 혈압; 오히려, ADH 터미네이터 생 터미네이터 대신 사용 되어야 한다. ADH 터미네이터를 사용 하는 데 필요한 프로토콜 변경 표 5에 표시 됩니다.
      참고: 이러한 변경 내용은 ADH 터미네이터 pFA6a-3HA-KANMX6 플라스 미드에서 사용할 수 있는 내 생 터미네이터 대신 사용 하는 경우에 적용 됩니다.
  2. PCR를 수행 하는 복제 rpt4 +-템플릿과 뇌관 p9, p10 50 µ L의 총 볼륨에서으로 벡터를 포함 (20 복제 플라스 미드, 10 pmol 뇌관 믹스, 2 U 효소, 1 x 반응 버퍼 2 µ L의 ng), 표 6에 제시 하는 조건을 사용 하 여. 젤 정화 획득 506-혈압 3' UTR 조각 (그림 1E).

6. 퓨전 PCR (그림 1E)에 의해 변환 구문이 생성

  1. 50 ng / µ L에서 3 조각 (mutagenized rpt4 +, 칸, 그리고 3' UTR)를 준비 합니다.
  2. 퓨전 3의 PCR 파편 뇌관 p11 및 p12를 사용 하 여 표 7에 설명 된 대로 수행 합니다. (융해 PCR 프로토콜은 원래 프로토콜22의 수정입니다.) 주요 4,398 bp의 PCR 제품을 정화.
    1. Rpt4 +사용: KAN:3'UTR 1의 비율로 조각: 최적의 결과 대 한 3:1.
      참고: 삽입 DNA의 총 금액 500을 넘지 말아야 한다 니. Rpt4 +의 권장된 금액: KAN:3' UTR는 50 ng:150 ng:50 ng. Mutagenized 지역에서 약 1.6 kb가 이므로 다른 3 돌연변이 되 고 각 자료의 모든 가능한 조합에 대 한 계정을 것 이라고 하는 효 모 식민지의 최소 수는 1, 600 x 3 = 4800 식민지. 한 변환 반응 일반적으로 400-500 식민지 수율, PCR 건설 융합의 가치가 10 반응 필요 합니다. 이 필요 10의 요인에 의해 단순히 증가 반응 (즉, PCR 튜브의 수)에 의해 충족 될 수 있다.

7. 변화의 Electroporation (그림 1 층)으로 분열 효 모

  1. 16 시간 이상 배양 하 여 누 룩 채도 예 매체의 10 mL을 접종.
  2. 600에서 광학 밀도를 셀 희석 예 매체의 0.2에서 200 mL의 nm (OD600)와 OD600 5-6 h 동안 흔들어 30 ° C에 품 어 = 0.6-0.8.
  3. OD600 세포 집중 = 30, 4 개의 50 mL 원뿔 관에 분배 하 고 10 분 동안 얼음에 진정.
  4. 4 ° c.에 3 분 1050 x g에서 원심 분리를 수행 하 여 셀을 수확 얼음에 튜브와 10 전기-큐 벳을 놓습니다. 얼음에 7.3 7.8 단계를 수행 합니다.
  5. 삭제는 상쾌한 고 1.2 M sorbitol의 15 mL를 추가 합니다. 부드럽게 튜브 resuspend 세포를 흔들어.
  6. 1050 x g 4 ° c.에 3 분에 세포를 원심
  7. 7.4 및 7.5 단계를 반복 합니다. 폐기는 상쾌한. 각 관에 1.2 M sorbitol의 500 µ L을 추가 하 고 셀, resuspend 한 15 ml 원뿔 튜브에 세포의 모든 수집.
  8. 1.2 M sorbitol 추가 최대 2.4 mL (OD600 = 0.2 mL 당 10). 얼음에 튜브를 유지.
  9. Sorbitol 중단 셀 (그들은 완전히 일시 중지 되었는지 확인)의 200 µ L 추가 퓨전 PCR을 포함 하는 EP 튜브 구성, 잘, 그리고 전기 멧에 샘플을 전송.
  10. Electroporate 다음 옵션으로 셀: 버섯, ShS (2.00kV, 1 펄스).
  11. 800 µ L의 전체 볼륨에 대 한 각 전기 멧을 1.2 M sorbitol의 600 µ L을 추가 하 고 4 예 판 (200 µ L/접시)에 셀을 확산. 10 전기-큐 벳 것 이다 분배 40 예 판.
  12. 24 h 30 ° C에서 번호판을 품 어.
  13. 예 + G418 도금 복제를 수행 하 고 3 일 동안 30 ° C에서 번호판을 품 어.

8. 섬으로 불안정 돌연변이 및 판정에 대 한 검사의 선택

  1. 각 예 + G418 플레이트에 대 한 예-에이드 (Ade 낮은) PMG-에이드 (Ade 없음) 접시를 복제 도금을 수행 합니다. 예-에이드 접시에 식민지의 일부 빨간 채색 (그림 1G) 표시 될 때까지 30 ° C에서 1-2 일에 대 한 복제 판을 품 어.
  2. 예-에이드와 PMG-에이드와 예 에이드 접시에 분홍색 또는 흰색을 표시 하 고 또한 PMG-에이드 접시에 성장 하는 선택 셀을 비교 합니다. 그들은 가양성 (예를 들어, 칸 카세트는 게놈에서 비 대상 사이트에 통합 되어 반영) PMG-에이드에 성장 없이 식민지를 선택 하지 마십시오.
  3. 각 식민지에서 약 1 × 105 셀을 선택 하 고 포함 된 식민지 PCR (그림 1 H)에 대 한 시작 템플릿으로 수행 하기 위해이 솔루션의 적어도 30 분 사용 1 µ L 37 ° C에서 2.5 mg/mL zymolyase 100 T SPZ 솔루션의 10 µ L에서 품 어.
    1. 2m sorbitol의 30 mL, 4.05 mL의 1 M 나2HPO4, 0.95 mL NaH2포4 증류수 (최종 pH 7.5) 15 mL를 혼합 하 여 SPZ (50 mL)을 확인 합니다. 샘플 (5 mL) zymolyase 보충 고 사용까지-20 ° C에서 500 µ L aliquots에 저장 될 수 있습니다.
  4. 젤 전기 이동 법 (1.2 %agarose 젤, 180V, 20 분)의 결과 + 식민지 PCR 시각화를 수행 합니다. 선택 적절 한 크기의 PCR 악대를 전시 하 고 Xho와 각 반응 제품의 5 µ L를 소화 하는 반응 (4 U 효소, 1 x 소화 버퍼, 37 ° C 물 목욕, 1 시간)을 화면으로 가양성 (그림 1 H).
  5. XhoI 소화 (1.2 %Agarose 젤, 180 V, 20 분)을 시각화 하기 위해 젤 전기 이동 법을 수행 합니다. 식민지 PCR 제품은 XhoI, 절단 및 예 + G418 번호판 (그림 1I) 패치를 표시 합니다.
  6. 분열 효 모 세포에서 gDNA를 분리 하 고 PCR 제품23의 시퀀싱을 수행. 돌연변이 (그림 1I)를 식별 하는 야생-타입 시퀀스와 얻은 시퀀스를 비교 합니다.
  7. 직접 다시 돌연변이 세포23에서 PCR에 의해 증폭 퓨전 구문으로 변환 하 여 야생-타입 셀에 mutation(s)를 소개 합니다. 새로 만든된 돌연변이 세포 (그림 1J)에 표현 형을 확인 하기 위해 안보를 사용 합니다.
    1. 퓨전 변환 구문을 증폭 하실 수 있습니다 쉽게 PCR에 의해 뇌관 p1와 p10 50 µ L (~ 1 µ g DNA, 20 U 효소 반응 버퍼 x 1)의 총 볼륨에 템플릿으로 돌연변이의 게놈 DNA를 사용 하 고 표 2에에서 설명 된 반응 사이클을 적용 . 구성의 변화 단계 7.1-7.13에 따라 수행할 수 있습니다.

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결과

그림 1 에 설명 된 절차에 따라 인수 Rpt4 돌연변이 식민지의 색상을 평가 하 여 분석할 수 있습니다. 식민지의 색상은 그림 2에 셀 수 감소에 관련 된 접시에 발견 했다. 섬으로 지역에 삽입 기자 ade6 + 야생-타입에 침묵 하 고 예 에이드 접시에 빨간 식민지를 보여줍니다. 일단는 섬으로 불안정 하 고 ade6 + 기자 표현, 백색 식민지 clr4Δ 돌연변이로 예 에이드 접시에 관찰할 수 있습니다. 스크린된 Rpt4 돌연변이 같이 있습니다. rpt4-1 돌연변이 가장 심각한 섬으로 불안을 보여줍니다.

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토론

오류가 PCR 통해 임의의 mutagenesis 주어진된 지역에서 돌연변이의 다양 한 풀을 생성 하기 위한 강력한 도구입니다. 이 기술은 특정 상황에서 단백질의 기능을 평가 하는 연구에 대 한 특히 유용 합니다. 예, 우리는 여기는 19S 프로테아좀 소 단위, Rpt4, 섬으로 유지 보수에서의 기능을 평가 하기 위해 오류가 PCR을 사용. 변화 하 여 지역 오류가 PCR에 의해 표적으로 하 고 심사 조건 조정, 우리 관심 및 원하는 표현 형에 대 한 스크린의 게놈 영역에서 셀을 변경할 수 있었다. 최근, 스핀 들 극 신체 구성 요소25에서 돌연변이 은닉 하는 분열 효 모 세포를 분리 하는 유사한 방법 사용 되었다.

무작위 mutagenesis의 주요 장점은 모두 비 필수 및 필수 유전자에 적용할 수 있습니다. 필수적인 유전자의 무작위 mutagenesis 세포 생존 능력 지속 될 수 있도록 하는 미묘한 또는 부분적 기능 오류 등 다양 한...

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공개 사항

저자는 공개 없다.

감사의 글

이 프로젝트에 대 한 지원 자금 기본 과학 연구 프로그램을 통해 국가 연구 재단의 한국 (NRF) 과학과 ICT (2016R1A2B2006354)에 의해 자금에 의해 제공 되었다.

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재료

이 논문에 사용된 재료 목록
이름회사카탈로그 번호댓글
<강한>1. 미디어
GlucoseSigma-AldrichG8270-10KG
효모 추출물BD Biosciences212720
L-LeucineJUNSEI87070-0310
Adenine sulfateACR16363-0250
Uracil 시그마-알드리치U0750
L-히스티딘시그마-알드리치H8125
KH2PO4시그마-알드리치1.05108.0050
NaClJUNSEI19015-0350
MgSO4• 7H2O시그마-알드리치63140
CaCl2시그마-알드리치12095
프탈레이트 칼륨시그마-알드리치P6758-500G
이노시톨시그마-알드리치I7508-50G
비오틴시그마-알드리치B4501-100MG
붕산시그마-알드리치B6768-1KG
MnSO4시그마-알드리치M7634-500G
ZnSO4• 7H2O JUNSEI83060-031
FeCl2• 4H2OKANTOCB8943686
나트륨 몰리브덴산염 이수화물YAKURI31621
KIJUNSEI80090-0301
CuSO4• 5H2OYAKURI09605
D-myo-inositolMP biomedicals102052
판토텐산YAKURI26003
니코틴산시그마-알드리치N4126-500G
(NH4)2SO4 시그마-알드리치A4418-100G
아가로스바이오베이직D0012
G418, 게네틱인LPSG41805
2. 효소 반응
PfuUltra II Fusion HS DNA PolymeraseAglient600380현장 지시 돌연변이 유발
GeneMorphII 무작위 돌연변이 유발 키트Aglient200500오류 발생 PCR
Phusion High-Fidelity DNA 중합효소Thermo FisherF-530L융합 PCR
Ex Taq  DNA 중합효소TakaraRR001b일반 PCR
BamH1New England BioLabsR0136S
Xho1New England BioLabsR0146S
Dpn1New England BioLabsR0176S
3. 장비
Velveteen 사각형, 검은색VWR89033-116
복제품용 복제품 도금 도구VWR25395-380복제품
MicroPulser ElectroporatorBiorad1652100 핵분열 효모 형질전환용
Electroporation 큐벳, 0.2cm 간격Biorad1652086 핵분열 효모 형질전환용
Thermal CyclerBioerBYQ6078융합 PCR 램프 반응용 

참고문헌

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