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방법 논문

Retroductal 나노 Murine Submandibular 동맥에 주입

10.1K 조회수

DOI:

10.3791/57521

2018년 5월 3일

이 논문에서

요약

Submandibular 동맥을 지역 약물 전달 및 새로운 치료제의 개발에 대 한 이해 침 샘 생물학에서입니다. 선물이 배달 정확성과 실험의 재현성을 향상 시키는 업데이트 및 상세한 retroductal 주입 프로토콜. 여기에 소개 하는 응용 프로그램은 고분자 나노 입자의 배달.

초록

침 샘 치료의 두 가지 일반적인 목표는 조직 장애 중 다음의 예방 및 치료 면역 또는 방사선 상해. 로컬 침 샘에 생리 활성 화합물을 함으로써, 큰 조직 농도 조직의 관리 대 안전 하 게 구현할 수 있습니다. 또한, 대상 조직에서 물자의 여분 선 축적 효과 수 극적으로 감소 될. 이와 관련, retroductal 주사 침 샘 생물학과 이상 조사를 위해 널리 사용 되는 방법입니다. Retroductal 관리 성장 요인, 일차 전지, adenoviral 벡터, 그리고 작은 분자 약물의 상해의 설정에서 기능을 지원 하기 위해 표시 되었습니다. 우리는 이전 조사를 다음과 같은 기능을 유지 하기 위해 주입 retroductally 나노 siRNA 전략의 효능을 보여주었다. 여기, 왓슨의 덕트를 통해 murine submandibular 동맥에 나노 소재를 관리 하는 매우 효과적이 고 재현 방법에 대 한 자세한 (그림 1). 우리 구강 접근을 설명 하 고 더 관측 절차에 걸쳐 품질 검사로 재직 cannulate와 튼의 덕트, 하는 데 필요한 단계를 개요.

서론

침 샘 기능 장애는 많은 etiologies, Sjögren의 증후군, 기능성 분 비 조직, 그리고 방사선 유발 hyposalivation (RIH), 머리와 목 암 방사선 치료1의 일반적인 sequella의 자기 면역 중재 손실을 포함 하 여 있다. 어느 조건 때문에 침 기능 손실 구두 및 조직의 감염, 충 치, 소화 하 고 삼 키는 기능 장애, 언어 장애, 그리고 주요 우울증1,2,3에 개인을 걸리기. 결과적으로, 삶의 질 크게 겪고 있다, 중재 치료4보다는 증상의 일시적 완화에 국한. Vivo에서새로운 치료 조사, 침 샘에 직접 생리 활성 화합물을 관리 하는 관심입니다.

Retroductal 주사 침 샘에 직접 생리 활성 화합물을 제공 하 고 질병, 부상, 또는 정상 조직의 항상성에서 효능을 테스트 하는 귀중 한 방법입니다. 3 개의 주요 침 샘은 귀 밑 (PG), submandibular (서울시), 그리고 삶의 (SLG), 배설 덕트를 통해 구강에는 빈의 모든. mur....

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프로토콜

아래에 설명 된 모든 vivo에서 절차는 로체스터의 대학, 로체스터, 뉴욕에서 동물 자원에 대학 위원회에 의해 승인 되었다.

1입니다. 준비

  1. 와이어 삽입과 32 G intracranial 카 테 테 르 튜브를 사용 하 여, 3 cm 긴 축에 약 45 ° 경사진된 끝을 형성 하 고 튜브의 컷. 와이어 튜브 보다 1 cm 이상 되는지 확인 합니다.
  2. 해밀턴 주사기를 50 µ L PSMA 나노 솔루션 (그림 1), 또는 다른 주입 재료를 로드 합니다. 주입 동안 barotrauma의 확률을 줄이기 위해, 주사기를 제거 stylet와 카 테 테 르 튜브를 연결 하 고 죽은 볼륨을 추방.
  3. 나노는 완벽 하 게 관리 다음 ductal 방해를 방지 하기 위해 solvated 되도록 주입 솔루션을 검사 합니다.
  4. 0.1 mg/mL에서 아트로핀 솔루션을 준비 합니다.
    참고: 아트로핀은 빛에 민감한 시간이 지남에 저하 됩니다 때문에이 솔루션 주입의 하루와 있어야 관리까지 빛 으로부터 보호 합니다.

2. 액세스 및 Ductal 진입점을 시각화

  1. C....

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결과

Retroductal 주입 murine SMG (그림 1)에 NPs를 관리를 사용할 수 있습니다. 여기, 우리는 50 µ g PSMA NPs 텍사스 레드 fluorophore와 함께 표시를 제공 합니다.

마우스의 적절 한 배치는 손쉬운 액세스와 입 (그림 2A-B)의 바닥의 시각화 수 있습니다. Submandibular papillae 혀 아래 두 살 돌출으로 식별 됩니다. (그림 2C) cannulation 및 아트로핀 주사, 주사기 튜브 submandibular 용의자 (그림 2D)에 배치할 수 있습니다.

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토론

Retroductal 주사 침 샘에 지역화 된 약물 전달에 대 한 중요 하다. 이 기술은 응용 프로그램 Sjogren 증후군 및 RIH9,,1028를 포함 하 여 조건에 대 한 치료제를 심사에 있다. Retroductal 주입을 통해 서울시에 직접 약물 전달 주요 이점이 그것의 잠재력을 줄이기 위해 오프 대상 효과, 면역 활성화11를 포함 하 여 조직의 관리를 제공 합니다. 지역 약물 전달, 주변 조직에 축적 없이 최대화 수 치료 복용량 광범위에서 보다 체계적으로 달성 될 수 있는 테스트를 사용할 수도 있습니다.

우리는이 프로토콜을 제시, murine 서울시20왓슨의 덕트를 통해 고분자 나노 재료를 제공 하는 상세 하 고 업데이트.......

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공개 사항

저자는 공개 없다.

감사의 글

이 간행물에 보고 된 연구는 국립 연구소의 치과 Craniofacial 연구 (NIDCR)와 보너스 번호 R56 DE025098, UG3 DE027695, 및 CA206296 F30 국립 보건원의 국립 암 연구소 (NCI)에 의해 지원 되었다. 내용은 전적으로 저자의 책임 이며 반드시 국립 보건원의 공식 의견을 대표 하지 않는다. 이 작품 또한 NSF DMR 1206219와 IADR 혁신 구강 케어 상 (2016)에 의해 지원 되었다.

우리는 제인 Gavrity IVIS 실험 수행에 그녀의 도움에 감사 하 고 싶습니다. 우리는 그들에 그녀의 지원과 입력 카 렌 벤틀리 감사 하 고 싶습니다. 우리는 페이 Lun Weng IHC와 그의 지원에 대 한 감사 하 고 싶습니다. 우리는 매튜 잉 그림 준비에 그의 원조에 대 한 감사 하 고 싶습니다. 우리는이 논문의 중요 한 읽기 박사 Elaine Smolock, 에밀리 우 감사 하 고 싶습니다.

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재료

이 논문에 사용된 재료 목록
이름회사카탈로그 번호댓글
필로 카르 핀 하이드로 클로라이드시그마 알드리치P6503필로 카르 핀
학생 Vannas 봄 가위미세 과학 도구91500-9기관 절개술 용 스프링 가위
멸균 식염수MedlineRDI30296H식염
Dumont # 7 집게미세 과학 도구11274-20곡선 집게
Dumont # 5 집게Fine Science Tools11251-10스트레이트 집게
표준 패턴 집게Fine Science Tools11000-12무딘 집게
Fine Scissors- 텅스텐 카바이드Fine Science Tools14568-09해부 가위
Microhematocrit Heparinized Capillary TubesFisher Scientific22362566Capillary tubes
Lubricant Eye OintmentRefreshN/ARefresh Lacri-Lube
Goat polyclonal anti-Nkcc1Santa Cruz BiotechSC-21545Nkcc1 항체
DAPI (4',6-Diamidino-2-Phenylindole, Dihydrochloride)Thermo Fisher ScientificD1306DAPI
GraphPad PrismGraphPadver6.0Statistical Software
Cotton tipped applicatorMedlineMDS202000안연 도포구
0.5cc 인슐린 주사기, 복강내 주사용 29G x 1/2"BD7629주사기

참고문헌

  1. Miranda-Rius, J., Brunet-Llobet, L., Lahor-Soler, E., Farre, M. Salivary Secretory Disorders, Inducing Drugs, and Clinical Management. International Journal Of Medical Sciences. 12 (10), 811-824 (2015).
  2. Acauan, M. D., Figueiredo, M. A. Z., Cherubini, K., Gomes, A. P. N., Salum, F. G.

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