수프라스피날 영역에서 일시적인 수용체 잠재적 인 바닐라 노이드 유형 1 (TRPV1)은 뇌 기능에 있는 몇몇 역할을 하기 위하여 건의되었습니다. 여기에 설명된 마우스에서 수지 척추 TRPV1 둔감화를 위한 수지성 관절 의 주입을 위한 프로토콜이 설명되어 있다. 일부 통증 검사에 대한 절차도 제시됩니다.
이 콘텐츠를 보려면 JoVE 구독이 필요합니다. 로그인하거나 오늘 무료 평가판을 시작하세요.
이 논문에서
요약
초록
과도 수용체 잠재적 인 바닐라노이드 유형 1 (TRPV1), 열민감성 양이온 채널, 말초 신경에 통증을 트리거하는 것으로 알려져있다. 주변 기능 외에도 뇌 기능에 대한 참여도 제안되었습니다. 수지압창신(RTX)은 TRPV1의 장기 둔감화를 유도하는 것으로 알려져 있으며, 이러한 둔감은 TRPV1 표현 세포의 생리적 관련성을 조사하기 위한 대안적인 접근법이었다. 여기에서 우리는 마우스에 있는 RTX를 가진 intracerebroventricular (i.c.v.) 처리를 위한 프로토콜을 기술합니다. 절차는 주변 TRPV1 자극 (RTX 테스트) 및 기계적 자극 (꼬리 압력 테스트)에 고드름을 테스트하기 위해 설명된 다음 다음과 같습니다. RTX i.c.v.를 투여한 마우스의 단각 반응은 대조군의 반응과 비교할 수 있었지만, RTX-i.c.v.-투여된 마우스는 아세트아미노펜의 진통 효과에 민감하지 않았으며, i.c.v. RTX 치료가 수척추 선택적 TRPV1 desensit화를 유도할 수 있음을 시사한다. 이 마우스 모델은 뇌/수피척추 기능에서 TRPV1의 역할을 연구하기 위한 편리한 실험 시스템으로 사용할 수 있습니다. 이러한 기술은 또한 다른 약물의 중심 행동의 연구에 적용 될 수 있습니다.
서론
동물은 말초 신경에 센서를 통해 자신의 환경에서 다양한 물리적 및 화학 자극을받습니다. 과도 수용체 전위 바노이드 타입 1(TRPV1)은 열 센서1,2,2및 TRPV1의 활성화 및/또는 변조역할을 하는 열민감성 비선택적 양이온 채널 중 하나이며 정상 및 염증성 문맥3모두에서 노치프션을 위한 핵심 단계로 알려져 있다. 전반적인 발현 패턴은 논란의 여지가 있지만, TRPV1의 발현은 또한 다양한 뇌 활동(nociception4,온도 조절5,불안6,주의력 결핍 과잉 행동 장애7및 간질8)에관여하는 등 다양한 뇌 활동에 관여하는 등 초라척추 지역에서도 제안되고 있다. 더욱이, 최근에는 널리 사용되는 진통제인 아세트아미노펜이 중앙 TRPV1의 활성화를 중재하여 진통 작용9,,10을유도하는 것이 제안되고 있다.
액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
프로토콜
여기에 사용되는 모든 실험 프로토콜은 무사시노 대학의 동물 관리 및 사용위원회에 의해 승인되었다. 수컷 ddY 마우스(SLC, 시즈오카, 일본)는 물과 음식 광고 리비툼을 실험하기 전에 12h 빛/어두운 주기하에서 적어도 7일 동안 보관하였다. 5-6주 된 마우스는 실험을 위해 사용되었다.
1. 마약 제제
-
Rtx
참고: 알코올 RTX 용액은 심한 피부 화상과 눈 손상을 일으킬 수 있습니다. 취급 시 보호하려면 고무 장갑과 안경을 사용해야 합니다. 이 스톡 솔루션은 6 개월 동안 사용할 수 있습니다.- RTX 의 1 mg에 에탄올의 500 μL을 추가합니다.
- 위의 용액에 폴리옥세틸렌(20)의 500 μL을 추가하고 소용돌이를 잘 피하십시오.
- 혼합물과 소용돌이에 생리식염수 4mL를 잘 넣습니다.
- 용액의 Aliquot 40 μL은 1.5mL 나사 캡 튜브로 저장하여 -40 °C에 저장합니다.
-
아 세트 아미노 펜
- 30 mg /mL의 농도에서 아세트 아미노펜에 20 % w / v propyleneglycol 솔루션을 추가하고 초음파 처리....
액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
결과
i.c.v.-treated 마우스는 외모, 자발적활동, 체중19 및 코어 체온(차량 처리군, 38.4±0.3°C, n=6; RTX 처리 군, 38.7 ± 0.2 °C, n = 6).
도2A-B는 RTX의 인트라플라터 주입에 s.c.- 또는 i.c.v.-treated 마우스의 반응성을 나타낸다. Figure 2A 차량 처리 마우스의 핥기/물기 동작은 처음 10 분19에서현저했습니다. s.c.-전처리된 마우스는 핥기/물기 행동을 전혀 보여주지 않았지만, i.c.v.-전처리된 마우스는 일반적으로 RTX의 발바닥 주입에 반응했습니다. 더욱이, 도 2B에
액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
토론
이러한 실험에서 가장 중요한 단계는 i.c.v. 주입의 성공입니다. 여기에 사용되는 i.c.v. 주입 기술은 매우 간단하지만 몇 가지 연습이 필요합니다. 실험 전에염료(예: 식염수의 0.5% 트라이팬 블루)를 사용해 보세요. 주사가 올바르게 수행되는 경우, 바늘 마크는 관상 봉합사에 분명해야하며 주입 된 염료는 금방 심실및 세 번째 심실에 존재해야합니다. 또한 주입 중에 강제 삽입을 피해야합니다. 바늘 끝이 관상 봉합사에 올바르게 놓이면 바늘이 두개골을 부드럽게 관통해야합니다.
이러한 i.c.v. 기술은 또한 깨어 있는 비 마취 마우스에 적용될 수 있으며, 우리는 이 기술을 사용하여 검사된 약물의 급성 중앙 효과를보고하였다(23,,24). 본 절차는 캐닝을 위한 특별한 장비가 필요하지 않다는 점에서 유리하지만, i.c.v. 사출은 한 번만 수행될 수 있다. 약물의 반복 투여가.......
액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
공개 사항
저자는 선언할 이해 상충이 없습니다.
재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| s.c./i.c.v. 전처리 및 RTX 테스트에 사용되는 | Resiniferatoxin | LKT Laboratories | R1774 |
| 세트아미노펜 | IWAKI SEIYAKU SEIYAKU | ||
| Pentobarbital 나트륨 염 | 도쿄 화학 공업 | P0776 | 마취에 사용 |
| 에탄올 (99.5) | Wako Pure Chemical Industries | 057-00456 | RTX 용해에 사용 |
| 폴리옥시에틸렌(20) 소르비탄 모노올레이트 | Wako Pure Chemical Industries | 161-21621 | |
| 25 μ 용해에 사용; L microsyringe | Hamilton | 1702LT | i.c.v. 주입 |
| 100 μ에 사용; L 마이크로 주사기 | Hamilton | 1710LT | 발바닥 주입에 사용 |
| 26 게이지 일회용 바늘 | TERUMO | NN-2613S | i.c.v 주입에 사용 |
| 30 게이지 일회용 바늘 | NIPRO | 01134 | 발바닥 주입에 사용 |
| 압력 측정기 | Ugo Basile | 진통제 측정기 유형 7200 | 꼬리 압력 테스트에 사용 |
참고문헌
- Cavanaugh, D. J., Chesler, A. T., Braz, J. M., Shah, N. M., Julius, D., Basbaum, A. I. Restriction of transient receptor potential vanilloid-1 to the peptidergic subset of primary afferent neurons follows its developmental downregulation in nonpeptidergic neurons. J Neurosci. 31 (28), 10119-10127 (2011).
- Caterina, M. J., Schumacher, M. A., Tominaga, M., Rosen....
액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
재인쇄 및 허가
