Β-aminopropionitrile-유도 대동맥 동맥 및 해 부의 마우스 모델에서 Aortopathy의 양적 마이크로 CT 분석

요약

이 문서는 대동맥 동맥 및 해 부의 마우스 모델에 대동맥 직경 정량화에 대 한 murine 맥 관 구조 perfuse를 방사선 불 투과성 리드 기반 실리콘 고무를 사용 하 여 상세한 방법론을 설명 합니다.

초록

대동맥 동맥 류 및 해 부 상당한 병 적 상태와 사망률은 인구에 연결 되어 있으며 매우 치명적일 수 있다. 대동맥 질환의 동물 모델 존재는 맥 관 구조의 이미징 vivo에서 제한 되었습니다. 최근 몇 년 동안, 미세 전산화 단층 촬영 (마이크로 CT) 모두 크고 작은 혈관 이미징에 대 한 기본 양식 적임 떠오르고 있다 vivo에서 및 전 비보. 함께 관 주조 방법, 주파수 및 C57/Bl6 마우스 β-aminopropionitrile 치료에 대동맥 병 리의 분포 특성 마이크로-CT를 사용 성공적으로 했습니다. 이 방법의 기술적 한계 가난한 동물 준비, 선박 크기 정량화에 대 한 적절 한 방법론의 응용 프로그램 및 비-이 절차의 생존에 의해 소개 하는 관류의 품질에 변화를 포함 합니다. 이 문서는 동맥 및 해 부의 마우스 모델에서 aortopathy의 양적 특성에 대 한 리드 기반의 방사선 불 투과성 실리콘 고무의 혈관 내 관류에 대 한 방법론을 자세히 설명합니다. 대동맥 병 리를 시각화, 뿐만 아니라 다른 혈관 침대에 vivo에서 또는 혈관 침대 제거 사후 조사이 메서드를 사용할 수 있습니다.

서론

대동맥 해 부의 발생률은¹년 당 100000 당 3 경우. 대동맥 해 부 및 aneurysmal 계정 10000 죽음에 대 한 미국에서 매년, 서방 국가²에 있는 모든 죽음의 1-2%. 대동맥 해 부 생리 압력에서 대동맥 벽의 층을 통해 혈액의 전파와 그릇의 내 층에 눈물에 의해 시작 됩니다. 높은 환자 펄스 압력 해 부 및 합병증의 발생률이 증가와 연결 됩니다. 증가 벽 전단 응력 선도 동맥 형성^3,4대동맥 벽 확장 연결 됩니다. 대동맥 해 부의 결과 두뇌, 신장, 대변, 및 사지, 만성 동맥 류, 파열, 또는 죽음^5,,67의 형성을 포함 하 여 먼 장기에 혈액 흐름의 폐색을 포함 합니다.

현재, 개시 및 대동맥 동맥 류 및 해의 진행에 관련 된 생화학과 세포 프로세스 여전히 제대로 이해 하 고. 대동맥 동맥 류 및 해 부 재현 동물 모델은 그들의 병 태 생리학을 이해 하는 열쇠입니다. ....

프로토콜

처리 하는 동물에 대 한 프로토콜 기관 동물 관리 및 사용 위원회의 메릴랜드, 볼티모어 (동물 프로토콜 번호 0116024)에 의해 승인 되었고 AAALAC 국제 표준에 따라 실시.

1입니다. 시 약의 준비

1. 헤 파 린
   1. 희석 250 µ L 1000의 U/mL 헤 파 린 황산 50 ml의 인산 염 버퍼 5 U/mL의 최종 농도 수 있도록 염 분.
   2. 따뜻한는 heparinized (5 U/mL) 인산 염 버퍼 식 염 수, 37 ° c 설정 물 욕조에 맥 관 구조에 혈액 대체 하 게 됩니다
   3. 필요한 튜브를 연결 하 여 압력 제어 펌프를 준비 하 고 2 빈 10 mL 주사기, heparinized 염 분 버퍼에 대 한 1 및 대비 에이전트에 대 한 1.
   4. 버퍼링 따뜻한 heparinized 인산 염으로 튜브와 압력 펌프의 배관에서 공기 방울을 제거.
2. 대비 에이전트
   참고: 참조 하십시오 테이블의 자료 를 대비 에이전트 키트 성분.
   1. 희석제 비율 1:6 염료를 달성 하는 희석제와 함께 색소 화합물을 혼합.
   ....

결과

이 프로토콜을 평가 하기 위해 20 남성 성인 쥐, 혼합된 배경으로 앞에서 설명한¹⁹ 의 그리고 20-30 주 나이, 또는 BAPN 치료 없이 리드 기반의 방사선 불 투과성 실리콘 고무 끼얹는다 했다 ( 테이블의 자료를 참조 ) 위에 상세한 프로토콜을 사용 하 여. 그들은 수술 다음 날에 마이크로-CT 검사 (그림 1 및 그림 2). 비교 그룹 중 쥐의 년에서 상당한 차이가 있었다.

작은 축 직경 다음이 쥐에 정량 했다. BAPN 치료 쥐에 오름차순 대동맥의 평균 직경은 치료 나이 일치 하는 컨트롤의 그것 보다 훨씬 더 큰 (1.43 ± 0.56 m m .......

토론

마이크로-CT 영상 동물 모델에서 혈관 병 리의 매우 상세 하 고 3 차원 개조를 제공 하기 위해 사용할 수 있습니다. 혈관 내 대비 향상 된 미디어의 사용을 통해 향상 된 비 부드러운 조직, 혈관, 루멘 등 그는 강화에서 분화 수 있다. 레이저 도플러, microangiography, 자기 공명 혈관, confocal, 또는 두 광자 현미경으로 조직학 혈관 침대를 평가 하기 위해 사용 될 수 있습니다, 그리고 그들은 일반적으로 연구의 제한 된 영역에 초점 및 2 차원 평가로 제한 됩니다. 마이크로-CT 기본 신생 혈관 생물학의 이해에 도움이 될 수 있습니다 혈관 구조의 상세한 이미지를 얻기의 비용 효율적인 수단을 제공 합니다. 작은 동물을 이미징의 추가 방법에는 vivo에서 마이크로-CT 및 디지털 감산 혈관 포함 됩니다. 마찬가지로 여기서 설명 하는 기술, 마이크로-CT vivo에서 해상도 증가 시킬 exogenous 대비 에이전트에 의존 합니다. Fenestra VC 및 Isovue-370는.......

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
Microfil	Flow Tech, Inc	MV-122	우리는 노란색을 사용하며 원하는대로 다른 색상을 주문할 수 있습니다. 키트에는 MV-Compound, MV-Diluent 및 MV-Curing Agent가 포함되어 있습니다.
헤파린(1000 U/mL)	Sagent Pharmaceuticals	25021-400-10
인산염 완충 식염수	Corning	21-031-CV
이소플루란	Vet One, MWI	502017
3-아미노프로피오니트릴 푸마르산염	Sigma-Aldrich	A3134
단일 주사기 펌프	Fisher Scientific	14-831-200
27-게이지 두피 정맥 세트 바늘	Exel Int	26709	27G x 3/4", 12" 튜브
Inveon Micro-CT 스캐너	Siemens Medical Solutions
Osirix MD	Pimxmeo SARL		버전 8.0.2
Inveon Research Workplace	Siemens Medical Solutions		버전 4.2
설치류 차우	Harlan Teklad	2018sx