유전자 변형 마우스 생산을 중재 하는 lentiviral: 창시자의 직접적인 연구를 위한 간단 하 고 매우 효율적인 방법

Sébastien Dussaud; Corinne Pardanaud-Glavieux; Claire Sauty-Colace; Philippe Ravassard

doi:10.3791/57609

이 콘텐츠를 보려면 JoVE 구독이 필요합니다. 로그인하거나 오늘 무료 평가판을 시작하세요.

방법 논문

유전자 변형 마우스 생산을 중재 하는 lentiviral: 창시자의 직접적인 연구를 위한 간단 하 고 매우 효율적인 방법

9.4K 조회수

⸱

DOI:

10.3791/57609

⸱

2018년 10월 7일

Sébastien Dussaud¹^,² , Corinne Pardanaud-Glavieux¹ , Claire Sauty-Colace¹ , Philippe Ravassard¹

¹UPMC Univ Paris 06, INSERM U1127, CNRS UMR 7225, Institut du Cerveau et de la Moelle épinière, ICM, Sorbonne Universités, ²UPMC Univ Paris 06, INSERM UMRS1166, Institute of Cardiometabolism and Nutrition, Sorbonne Universités

이 논문에서

요약

여기, 선물이 수정된 oocyte의 perivitelline 공간에서 lentiviral 벡터의 간단한 주입에 의해 transgene 통합 및 높은 효능과 설립자 유전자 변형 생쥐의 생산을 촉진 하는 프로토콜.

초록

거의 40 년 동안, pronuclear DNA 주입 transgenes의 임의의 통합 유전자 변형 쥐를 생성 하는 표준 메서드를 나타냅니다. 일상적인 절차는 전 세계에 걸쳐 널리 활용 하 고 그것의 주요 제한은 transgene 통합, 설립자 동물의 낮은 수율 결과의 가난한 효능에 있는. 주입 된 수정 된 oocytes의 이식 후 동물의 몇 %만는 transgene를 통합 했습니다. 반면, lentiviral 벡터 통합 유전자 이동에 대 한 강력한 도구 이며 transduce 수정 된 oocytes를 그들의 사용 허용 설립자의 고효율 생산 70% 이상 평균 수확량을 가진 유전자 변형 쥐. 또한, 모든 마우스 변형 유전자 변형 동물을 생산 하기 위해 사용할 수 있습니다 이며 transgene 표현의 penetrance lentiviral 중재 transgenesis DNA microinjection에 비해 80% 이상의 매우 높은. Lentiviral 벡터에 의해 화물을 될 수 있는 DNA 조각의 크기 10 kb로 제한 하 고이 방법의 주요 한계를 나타냅니다. 간단 하 고 쉽게 수정 된 oocytes의 zona pellucida 아래 주입 절차를 수행 하려면 사용 하 여, 50 개 이상의 설립자 동물 microinjection의 단일 세션에서 생산 수 있습니다. 이러한 메서드는 설립자 동물, 신속한 이득 및 손실 함수 연구 또는 자신의 능력을 제어 하 고 진 식에 vivo에서규제에 대 한 화면 genomic DNA 영역에서 직접 수행에 매우 적응.

서론

1980 년에 고 든 외 의 선구적인 작품 pseudopregnant 마우스에 이식 후 수정 된 oocytes의 남성 pronuclei 에 플라스 미드 DNA 주입 통합 유전자 변형 동물의 생산 얻을 수 있습니다 보여주었다는 플라스 미드 DNA¹. Transgenic 포유류를 생성할 수 있습니다 데모 모두 기본적인 과학 및 변환 생물 의학 연구의 새로운 분야에 길을 열어 글로벌 생명과학에 엄청난 영향을 했다. 지난 4 년간 DNA microinjection은 일상적인 연습 되었다. 유전자 변형 쥐의 거 대 한 수 제작 되었습니다, 하지만 표준 방법 모든 마우스 긴장에 대 한 완벽 하 게 사용할 수 이며 시간이 소요 backcrosses²^,³를 요구 한다. 다른 종에의 응용 도전⁴ 유적과 전반적인 transgene 통합 수익률 태어난된 동물⁵의 몇 %로 제한 됩니다. 또한, transgene 통합의 효능 pronuclear DNA 주입의 가난한 전체 수익률을 설명 하는 제한 요소를 나타냅니다. 이 점에서 통합 바이러스 성 벡터 화물....