이 프로토콜 vestibular 시스템 공부에 대 한 유용한 방법은 쥐의 외과 labyrinthectomy에 설명 합니다.
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이 논문에서
요약
초록
Vestibular 시스템 또는 vestibular 보상 과정을 연구 하는 여러 메서드 vestibular 신경 절제 수술 또는 화학 labyrinthectomy 등 vestibular 손상을 개발 되었습니다. 외과 labyrinthectomy는 비교적 신뢰할 수 있는, 간단 하 고 빠른 방법입니다. 여기, 우리가 쥐 labyrinthectomy에 대 한 수술 기법을 설명합니다. Postauricular 절 개 외부 청각 운하와 봐서 고 막, 후 봐서 고 막과 이소골에는 등골 없이 제거 됩니다 노출 전신 마 취하에 이루어집니다. 등골 동맥 사이는 등골과 타원형 창 있는 취약 한 구조 이며, 분명 수술 필드를 유지 해야 합니다. Fenestrate 구멍 현관으로 만들어진 2.1 m m 드릴 가시는 등골에 우수한. 다음, 100% 에탄올은이 구멍을 통해 주입 하 고 발음 하는 여러 번. 세심 한 해 부 현미경 및 주의 출혈 제어에서 신뢰할 수 있는 결과 얻기 위해 필수적입니다. Vestibular 손실, nystagmus, 머리 기울이기, 회전 운동 등의 증상이 수술 후 즉시 볼 수 있습니다. Rotarod 또는 회전의 자 검사는 객관적으로 그리고 양적 평가 vestibular 함수를 사용할 수 있습니다.
서론
Vestibular 장기 균형과 눈 제어에 대 한 필수적입니다. 일반 vestibular 함수 두 내 귀에 vestibular 장기에서 대칭 구심 성 신호에 따라 다릅니다. Vestibular hypofunction 또는 손실 현기증, nystagmus, 및 자세 불균형을 유도 한다. 급성 손상 후 vestibular 기능 복구 자발적으로 몇 일 이내 vestibular 보상1,2로 알려진 프로세스. 정적 적자의 vestibular 보상 동측 및 contralateral vestibular 핵 사이 자발적인 휴식 활동의 불균형 관련 복구의 과정 이다. 동적 적자의 vestibular 보상 이루어집니다 주로 통해 감각 및 행동 대체 (를 사용 하 여 시각적 또는 somatosensory 입력)3. 이러한 프로세스는 신경가 소성 연구4,5에 대 한 매력.
다양 한 방법 vestibular 시스템 및 수술 및 화학 labyrinthectomy 등 vestibular 신경 절제5,6 vestibular 보상 중 신경가 소성을 underpinning 메커니즘 연구 개발 되었습니다. ,,78. Vestibular 신경 절제 완전 vestibular 손실, 유도 하는 특정 방법입니다 하지만 그것은 더 곤란 하 고 침략 적 절차 뇌 손상8,9유도 수 있습니다. 이 방법은 큰 수술 기술이 필요로 하 고 labyrinthectomy 보다 더 많은 시간이 걸립니다. 화학 labyrinthectomy gentamycin, arsanilate, tetracaine, 등 쉽게 이며 신뢰할 수 있는 결과10,,1112를 얻을 수 있습니다. 그러나, 달팽이 관은 또한 손상 될 수 있습니다 그리고 vestibular 손실 시간11이상 개발할 수 있습니다. 또한, 정확한 평가 위해 보존 해야 하는 두뇌에 있는 화학 물질의 효과 명확 하지 않다. 외과 labyrinthectomy 184215 동물 연구에 처음 도입 된 고 193616쥐에서 처음 보고 되었다. 이 기술은 이후 사용 되었습니다 많은 동물 연구5,17,,1819. 외과 labyrinthectomy 특정, 신뢰할 수 있는, 그리고 상대적으로 간단한 방법 이다. 13 , 14 게다가 vestibular 손상의 증상은 수술 후 즉시 볼 수 있습니다. 여기, 우리가 쥐 labyrinthectomy에 대 한 우리의 수술 기법을 설명합니다.
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프로토콜
이 연구 기관 동물 관리 및 사용 위원회의 서울 국가 대학 병원 (14-0148-C1A1) 평가 및 실험 동물 관리 인증 협회 공인 수행 되었다 국제입니다.
참고: Sprague-Dawley (SD) 7-8 주 이전 (200/250 g)의 남성 쥐에 실험 수행 했다. 각 동물 실험의 시작 이전에 1 주 동안 실험실 조건에 acclimatized 했다. 동물 12 상수와 온도 및 습도 제어 룸에 보관 되어 있었다-h:12-h 빛: 다크 무료 음식 및 물 주기.
1입니다. Labyrinthectomy
- 압력가 마로 소독 외과 기구 살 균 패드와 함께 커버. 운영 지역 70% 에탄올으로 소독. 무 균 드 레이프를 사용 하 고 수술 하는 동안 멸 균 상태를 유지.
- (커버 코 입)를, (헤드 커버)에 모자, 마스크, 가운을 착용 하 고 멸 균 장갑 한 켤레. 수술 기구 살 균 표면 접촉만 야 합니다.
- Tiletamine-zolazepam 마 취 (40 밀리 그램/kg 체중)을 주사 내측 허벅지에 피하 또는 intraperitoneally, 및 xylazine (10 mg/kg 체중) 피하 또는 intraperitoneally.
참고: 다른 모드 isoflurane 흡입를 포함 하 여 전신 마 취를 사용할 수도 있습니다. - (처음에 42 ° C에서 설정) 온난 패드에 쥐를 놓습니다. 마 취에서 눈 건조를 방지 하기 위해 쥐의 두 눈에 윤활제 눈 연 고를 적용 합니다.
- 쥐의 오른쪽에 놓습니다. 발기와 수술 영역에서 모피를 면도. 70% 에탄올과 사이트를 소독.
- 1 %lidocaine 염 산 염을 왼쪽된 retroauricular 지역으로 피하 주사.
- 사용 공식 로고는 메스 블레이드 # 15로 보호 되어, ~5.0 cm retroauricular 절 개 만들. 근육과 근 아이리스가 위 (그림 1A) 외부 청각 운하 폭로 구분 합니다. 약간 외부 청각 운하 블레이드 #15 또는 아이리스가 위 (그림 1B)를 사용 하 여 엽니다. 널리 봐서 고 막 (그림 2A)를 노출 합니다.
- 현미경 (7.5 X 또는 12.5 X), 봐서 고 막과 등골는 집게를 사용 하 여 제외한 이소골을 제거 합니다. #15 블레이드와 아이리스가 위 (그림 2B) lambdoidal 능선에 근육을 분리 합니다.
- 낮은 속도에서 드릴을 사용 하 여 (< 3000 rpm) 다이아몬드 bur (2.1 또는 1.4 m m)와 (그림 3A) 안 면 신경의 출구의 포인트 주위 귀 물집 뼈 드릴. Stapedial 동맥을 식별 합니다. 알아서 하지 드릴링 과정 stapedial 동맥을 손상.
- 현관 stapedial 동맥에 우수한 드릴링 계속 하 고 둥근 창와 뼈 측면 반원형 운하. 자사의 ampulla 근처 측면 반원형 운하를 엽니다. 측면 반원형 운하의 평면에 드릴링 계속 하 고 우량한 반원형 운하의 ampulla 드릴.
- 18-22-G 또는 바늘을 사용 하 여 현관의 내용을 발음합니다 주입 하 고 100% 에탄올 3의 1 cm3 발음 x.
- 근육 및 간단한 중단 봉합 2 개의 층에 피부를 닫습니다.
- 두지 마십시오 동물 무인 sternal recumbency를 유지 하기 위해 충분 한 의식 회복 될 때까지. 때까지 그것가 열 패드 또는 열 램프를 사용 하 여 wakens 쥐를 따뜻한 유지. 후, 일반적인 환경 조건을 갖춘 객실에는 개별 케이지에 쥐를 이동 합니다.
- 항생제를 관리 (예를 들어, Cefazoline 20 mg/kg, trimethoprim-술 100 µ L 피하, 또는 페니실린 300000 IU) 하루에 1; 필요에 따라 진통제 (opioid; 예를 들어, Metacam 2 mg/kg, Carprofen 5 mg/kg 피하) 또한 주어질 수 있다.
2. 가짜 수술
- (1 절) 당 같은 수술 및 수술 후 절차를 수행 하는 제어로 가짜 수술에 대 한 외부 청각 운하와 봐서 고 막 (1.7), 단계 봐서 고 막, 이소골의 제거의 노출을 포함 하 여 그리고 lambdoidal에 근육의 분리 (단계 1.8), 리 지 하지만 할 하지 반원의 운하 열거나 에탄올을 주입 합니다.
3입니다. 확인 Vestibular 기능 손실
참고: vestibular 기능의 손실을 평가할 수 있습니다 어느 행동 또는 vestibular 기능 테스트를 사용 하 여. 13 , 17 , 18 행동 테스트 자세 불균형 및 nystagmus 평가 포함 됩니다.
- 자발적 또는 갖는 배럴-압 연, 왼쪽된 사이드에 떨어지는 또는 lesioned 쪽18쪽으로 기울고 있는 동안 이동 포함 postural 비대칭을 식별 합니다. 동영상 1을참조 하십시오.
- 자발적인 눈 운동의 육안 검사에 의해 nystagmus를 식별 합니다. 자발적인 nystagmus는 결 석 때 휴식 상태에서 퍼프 어 부드럽게 동물18의 머리. 비디오 2를참조 하십시오.
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결과
수술의 성공 행동 테스트에 의해 검증 되었다. 모든 동물 vestibular 기능의 일방적인 손실의 일반적인 행동을 전시. 즉시 수술 후, 머리 또는 몸에 가벼운 터치 초기 복구 단계 (비디오 1)에 어 퍼프에 의해 갖는 되 고 자발적인 배럴-압 연 분명 했다. 수술 후 3 d, 동물 가끔 lesioned 측면 쪽으로 기울고 이동 왼쪽에 폭포. 자발적인 nystagmus 2 d (비디오 2) 내에서 관찰 되었다. 갖는 nystagmus 3 d 내에서 관찰 되었다.
일반적으로 필요한 수술 < 30 분. 50 수술의 과정, 2 쥐 작업 및 수술의 1 일 이내 3 중 사망 했다. 전반적으로, 손실 율 10% (5 명 중/50 수술 후) 했다. 모든 죽음은 stapedial 동맥에는 부상으로 발생 했다. ...
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토론
이 기술은, 영구, 갑자기 하 고 완전 한 vestibular 기능 손실 만들기 위한 유용한 방법입니다. 이 vestibular 신경 염, 음향 종양, Meniere 병 등 vestibular 병 리 연구 사용 될 수 있습니다. 많은 연구 vestibular 핵의 신경가 소성 또는 관련된 중앙 과정5,17,,1819연구 하이 기법을 사용 했습니다.
The most 성공적인 수술을 위한 중요 한 단계 1) 정확한 위치, 및 3) 세심 한 출혈 통제 주의 2) 드릴링 stapedial 동맥의 보존 됩니다. 큰 postauricular 절 개 상처는 치료 쪽에 다리 움직임을 방해 하는 큰 외부를 발생할 수 있습니다. 그러나, 작은 절 개 수술 필드를 제한 하...
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공개 사항
저자는 공개 없다.
감사의 글
이 연구는 한국 건강 기술 R & D 프로젝트 통해는 한국 보건 산업 개발 연구소 (진흥원), 사역의 건강 및 복지, 한국 자금 교부 금에 의해 지원 되었다 (허가 번호: HI15C2651).
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재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| ASPIRATOR KB-012 | 코봉 & CO., LTD. | KB-012 | 의료용 흡인기 |
| 블레이드: #15 | Fine Science Tools | #10015-00 | #7 메스 핸들용 블레이드, #15 |
| 탄소강 버 | Fine Science Tools | #19007-05 | 샤프트 직경: 2.3 mm, 길이: 44 mm, 10 버 패키지 |
| Carl Zeiss Surgical GmbH | Carl Zeiss | #6627100863 | 수술용 현미경 |
| Dumont #3c | Fine Science Tools | #11231-20 | 표준 팁 0.17 x 0.10 mm, 11 cm |
| Dumont #5SF | Fine Science Tools | #11252-00 | |
| Dumont #7B | Fine Science Tools | #11270-20 | 톱니 모양 0.17 x 0.10 mm, 11 cm |
| Extra Fine Bonn: 스트레이트 | 파인 사이언스 도구 | #14084-08 | 아이리스 가위, 고배율 미세 해부에 가장 적합 |
| 파인 아이리스 가위: 스트레이트 | 파인 사이언스 Tools | #14094-11 | 마르텐사이트 스테인리스 스틸로 만들어졌으며, 몰리브덴과 바나듐이 결합된 |
| Finger Loop Ear Punch | Fine Science Tools | #24212-01 | 1 mm. 번호 체계를 사용하는 연구자들에게 안정성과 제어력을 제공합니다. |
| Hartman | Fine Science Tools | #13002-10 | 팁 너비: 1 cm, 톱니형, 10 cm |
| 짧은 메스 핸들 #7 Solid | Fine Science Tools | #10003-12 | #7 짧은, 12cm |
| 소형 용기 소작 기계 | Fine Science Tools | #18000-03 | 교체 팁, 직선 칼, 출혈을 최소화하여 클램프와 지혈이 없는 수술 영역을 제공합니다 |
| Strong 207S | SAESHIN | 207S | 속에서 강력한 토크, 속도 또는 온/오프 풋 컨트롤러와 함께 사용 가능 |
| 흡입 튜브 | JEUNGDO B& 공급자:P CO., LTD. | H-1927-8 | Frazier, 18 cm |
| VICRYL | ETHICON | W9570T | 합성 흡수성 멸균 수술용 봉합사 |
| Weitlaner-Locktite | Fine Science Tools | #17012-13 | 최대 퍼짐: 4.5 cm, 2 x 3 뭉툭한 이빨, 11 cm |
| Zoletil | Virbac, 프랑스 | Tiletamine-zolazepam | |
| Rompun | Bayer | Xylazine | |
| Rimadyl | 화이자 | 카프로펜 | |
| 셉트라 | 화이자 | 트리메토프림-설폰아미드 |
참고문헌
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