암 관련 피로에 미토 콘 드리 아 기능의 역할 평가

요약

우리의 목표는 암 환자의 피로와 관련 된 미토 콘 드 리아 기능 장애를 평가 하는 실용적인 프로토콜을 개발 했다. 이 혁신적인 프로토콜 임상 사용 관련 표준 정 및 기본적인 실험실 절차에 최적화 되어 있습니다.

초록

피로 공통 이며 조건에 영향을 미치는 대부분의 암 환자를 쇠 약. 날짜 하려면, 피로 남아 제대로 없는 진단 특징을 객관적으로 측정이 상태의 심각도 테스트 합니다. 여기는 PBMCs 피로 암 환자에서 수집의 미토 콘 드리 아 기능을 평가 하기 위한 최적화 방법에 설명 합니다. 조밀한 extracellular 플럭스 시스템 및 호흡 저 해제의 순차 주사를 사용 하 여, 우리 검사 PBMC 미토 콘 드 리아 기능 상태 측정 기저 미토 콘 드리 아 호흡, 예비 호흡기 용량 및 에너지 표현 형, 설명 스트레스에 대응 하는 기본 에너지 통로. 신선한 PBMCs 표준 정을 사용 하 여 임상 설정에서 쉽게 사용할 수 있습니다. 이 프로토콜에서 설명 하는 전체 분석 결과 복잡 한 생 화 확 적인 기술의 참여 없이 4 시간 이내에 완료할 수 있습니다. 또한,는 재현할 수 데이터를 얻기 위해 필요한 정규화 방법에 설명 합니다. 간단한 절차 및 정규화 방법 제시 동일한 환자 및 잠재적인 치료 효과 평가 하는 시간 포인트 사이 비교 될 수 있는 재현 가능한 데이터의 생성에서 반복된 샘플 컬렉션에 대 한 허용.

서론

피로 암 환자¹의 삶의 질에 부정적인 영향이 우세 하 고 비참 한 상태 이다. 이 날짜에 암 피로 가난 하 게 정의 된 유적과 환자²주관적인 보고에 의존. 따라서, 객관적 임상 설정^3,4에서 피로 특성을 쉽게 적응 진단 실험실 테스트를 식별 하는 긴급 한 필요가 있다.

미토 콘 드리 아 기능 장애를 포함 하 여 여러 기본 메커니즘을 피로⁵제안 되었습니다. 미토 콘 드리 아 발전소 세포, 산화 인 산화를 통해 세포 에너지의 95%를 제공 하 고 칼슘 신호, apoptosis, 면역 신호 및 다른 세포내 신호 이벤트⁶ 의 규칙에 중요 한 역 . 따라서 장애인된 미토 콘 드리 아 생체 및 결함 에너지 생산에 피로에 기여할 수 있습니다. 이 가설을 지원, 이전 연구는 만성 피로 증후군⁷환자에서 미토 콘 드리 아 DNA에 돌연변이 관찰. 피로의 병 태 생리 기원 중앙 신경 조직 또는 주변 조직, 골격 근육^....

프로토콜

현재 연구 (NCT00852111)에 의해은 기관 검토 위원회 (IRB)의 국립 보건원의 건강 (NIH), 베 데스 다, 메릴랜드 승인 되었다. 이 연구에 등록 참가자 euthymic 남자 18 세, 이전 전립선의 유무에 관계 없이 비 전이성 전립선 암 진단을 받은 사람과 했다 외부 광속 방사선 요법 (EBRT) 받을 예정. 만약 그들이 진보적인 질병 상당한 피로 일으킬 수 있는 잠재적인 참가자 제외 됐다 지난 5 년 이내 정신 질병을 했다, 했다 교정된 hypothyroidism 또는 빈 혈, 또는 두 번째 종은 했다. 진정 제, 스테로이드, 또는 비 스테로이드 항 염증 제 대리인을 사용 하는 개인도 제외 했다. 건강 한 제어 혈액 샘플 NIH 부의 수혈 의학에는 IRB 승인 프로토콜 (NCT00001846)에서 건강 한 기증자 로부터 얻은 했다. 모든 참가자는 Magnuson 임상 연구 센터는 NIH에서 보충 했다. 서명 된 서 면된 통지 해준 동의 연구 참여 전에 얻은 했다.

1. 미토 콘 드리 아 기능 측정 준비 (실험의 1 일)

1. 센서 카트리지 수 화 ( 재료의 테이블; 대략적인 기간을 참조: 5 분).
   1. 패키지에서 센서 카트리지를 제거 합니다. 400 μ Calibrant ....

결과

미토 스트레스 테스트는 완전 한 미토 콘 드리 아 프로 파일을 매핑하는 데 다양 한 호흡 억제제의 순차 주사 후 산소 소비 속도 (OCR) 측정에 의존 합니다. 미토 콘 드리 아 건강에 관련 된 OCR 측정 후 각 약물 주입 다음 매개 변수를 계산 하는 데 사용 수: 기저 OCR 은 먼저 쉬고 레벨 ATP 수요를 충족 하는 데 필요한 산소 소비를 평가 하기 위해 어떤 약물 주입 하기 전에 측정. 기초 호흡 oligomycin 주입 전에 OCR 기준선에서 비-미토 콘 드리 아 호흡 속도 빼서 계산 됩니다. 다음, oligomycin ATP synthase (복잡 한 V)의 양성자 채널을 억제 하기 위해 주입 됩니다. Oligomycin 주입 후 OCR에 후속 드롭 ATP 생산 관련 산소 소비를 나타냅니다. FCCP (Carbonyl 시안 4-[trifluoromethoxy] phenylhydrazone), 양성자.......

토론

암 환자의 피로 잘 정의 되지 않은 또는 특징¹쇠 약 조건입니다. 피로의 진단은 전적으로 주관적인 보고에 의존 하며 현재 진단 표준 또는 그것의 pathobiology²에 대 한 이해의 부족 때문에 주로이 조건에 대 한 치료. 암 환자에서 피로 기본 제안 된 메커니즘의 미토 콘 드 리아 기능에서 장애는 가장 치료 대상 경로 중 하나입니다. 따라서, 우리 임상 샘플 사전 개발을 일찍 피로를 포함 하 여 암 치료 관련 독성 위험 환자를 식별 하는 데 사용할 수 있는 미토 콘 드리 아 기능을 측정 하기 위한 신속 하 고 실용적인 방법을 개발 관리는 제정 될 수 있다.

호흡 억제제의 순차 주사와 함께에서 세포 외 유출 기술 미토 콘 드 리아 기능 상태 평가 대 한 허용 사용 되었습니다 둘 다 생체 외에서 그리고 vivo 모델¹⁹.......

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
CPT 단핵 세포 준비 튜브	BD Biosciences	362761	정맥 절개술 후 PBMC를 분리하기 위한
RPMI-1640	Corning	10-040	PBMCs
Fetal bovine serum (FBS)	Corning	35-010-CV	PBMCs
페니실린/스트렙토마이신	ThermoFisher	15140122	PBMCs
Cell-Tak	Corning	354240	세포 및 조직 접착 용액의 성장 배지 제작, 현탁 세포가 표면에
부착할 수 있도록 합니다.Seahorse XF Calibrant 솔루션	Agilent	103059-000	하이드레이팅 카트리지용
XFp Fluxpak (미니플레이트 및 센서 카트리지)	Agilent	103022-100	XFp 세포 배양 미니플레이트 및 센서 카트리지 포함
XF 기본 배지	Agilent	103335-100	XF 분석 매체
45% 세포 배양 D-(+)-포도당 용액	Corning	25-037-CI	XF 제조용 분석 매체
나트륨 피루브산 용액	Corning	25-000-CI	XF 분석 매체
L-글루타민 용액	ThermoFisher	25030081	XF 분석 매체 제조용
Seahorse XFp Mito 스트레스 테스트 키트	Agilent	103010-100	올리고마이신, FCCP, 항마이신 A/로테논
함유 CyQUANT 직접 세포 증식 분석	ThermoFisher	C35011	살아있는 세포의 정량화 및 데이터 정규화용
Seahorse XFp 분석기	Agilent	S7802AEA	살아있는 세포의 미토콘드리아 기능 측정용
Cytation 5 Cell Imaging Multi-Mode Reader(또는 플레이트의 형광 세포를 정량화할 수 있는 모든 기기)	BioTek	BTCYT5PV	살아있는 세포의 정량화 및 데이터 정규화