Zebrafish는 자연 비 브리 오 cholerae 호스트 하 고 정리 하 고 전송 식민지 로부터 전체 감염 주기를 연구 하는 데 사용 수 있습니다. 여기, V. cholerae 식민 수준을 평가 하 고 계량 zebrafish에 설사 하는 방법을 보여 줍니다.
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이 논문에서
요약
초록
비 브리 오 cholerae 는 최고의 인간 질병 콜레라를 일으키는 전염 성 대리인 으로입니다. 인간 숙주 밖에 V. cholerae 주로 존재 수생 환경, 높은 수생 종의 다양 한 상호 작용 하는 곳에. 척 추가 있는 물고기 환경 호스트에 알려져 있습니다 그리고 자연에서 잠재적인 cholerae 대 저수지. V. cholerae와 모두 zebrafish로 일반적으로 알려진 teleost 물고기 종 Danio rerio, 인도 아 대륙에서 발생 한 수생 환경에 오랜 상호 작용을 제안. Zebrafish는 공부 하는 생물학, 전염 성 질환 등의 여러 측면에 대 한 이상적인 모델 유기 체. Zebrafish 수 있을 쉽고 빠르게 식민지 V. cholerae로 물에 노출 후. V. cholerae 여 장 식민지 설사의 생산 및 복제 cholerae V.배설 이끌어 낸다. 이러한 박테리아 수를 배설 후 새로운 물고기 호스트를 식민지로 이동. 여기, V. cholerae평가 하는 방법을 보여 줍니다-장 식민지 zebrafish에 V. cholerae계량 하는 방법-zebrafish 설사 유발. 식민 모델은 관심사의 유전자 또는 환경 생존을 위한 호스트 식민지에 대 한 중요 한 있을 수 있습니다 여부를 공부 하는 연구원에 게 유용 해야 한다. Zebrafish 설사의 정량화 zebrafish 모델 시스템으로 탐험에 관심이 어떤 장 병원 체를 공부 하는 연구자에 유용 해야 한다.
서론
비 브리 오 cholerae 산발적 설사1,2뿐만 아니라 인간의 질병 콜레라 발생 한 수생, 그램 음성 박테리아 이다. V. cholerae 종종 다른 해양 유기 체와 관련 된 전 세계의 많은 지역에서 환경에서 발견 된다. 이러한 연결 생물 등 플랑크톤, 곤충 계란 질량, 조개, 척 추가 있는 물고기 종3,,45,6,7. 여러 연구 V. cholerae 다른 지역7,8,,910에 물고기의 창 자 책자에서 고립 있다. V. cholerae의 물고기에 나타냅니다 물고기 환경 저수지로 작동할 수 있습니다. 물고기는 ....
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프로토콜
여기에 설명 된 모든 메서드는 기관 동물 관리 및 사용 위원회 (IACUC)의 웨인 주립 대학에 의해 승인 되었습니다. 이 메서드는 Runft 외 에 처음 설명 했다 12
1입니다. 장 식민지 수준 결정
참고: 창 자 식민지는 zebrafish 모델에서 가장 유용한 통계 다양 한 V. cholerae 긴장의 상대적인 적합성 또는 돌연변이 또는 유전자 녹아웃의 효과 비교 하는 데 사용할 수 있습니다.
- 침수로 zebrafish의 접종
참고:이 즉, 노출의 감염의 자연 과정을 유사합니다.- V. cholerae의 준비
- 격리 V. cholerae와 lysogeny 국물 (파운드)의 5 mL을 접종 한 파운드에서 식민지 접시 및 6-8 h (야간 문화)에 대 한 37 ° C (180 rpm)를 흔들어에서 품 어.
- 위의 숙박 문화 50 µ L로 250 mL 원뿔 플라스 크에 신선한 압력가 파운드 매체의 25 mL 접종 16-18 h 37 ° C (150 rpm)를 떨고에 대 한 그것을 품 어.....
- V. cholerae의 준비
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결과
V. cholerae zebrafish 장 책자의 식민
우리가 관찰 하는 전형적인 식민 레벨의 예를 제공 하려면 우리 5 x 106 CFU 유행 성 엘 토르 V. cholerae 긴장의 N16961 여러 zebrafish를 포함 하는 비 커에 물 200 mL에 접종. 감염의 6 h 후 생선 신선한 물에 씻 겨 되었고 프로토콜에 설명 된 대로 압력가 감염 물 200 mL의 비 커에 전송. 18 h 전송 (또는 1 차 감염 후 24 시간) 후 물고기 안락사 했다, 그리고 그들의 창 자를 식민지 레벨을 결정 하기 위해 찍은. 약 10 생선 내장 당 셀 V. cholerae 106 5 5 x 106 inoculum 크기와 장로 24 h 후 감염 (hp.......
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토론
Zebrafish는 V. cholerae 공부에 대 한 상대적으로 새로운 모델 이지만 cholerae 대 생물학과 병 인11,,1213 의 이전에 알려지지 않은 측면의 미래의 발견에 대 한 많은 약속을 보유 하 고 . 성인 zebrafish 모델은 모두 자연의 장점이 그대로, 성숙한 장 microbiota 및 환경 모델 포함 V. cholerae 호스트. 모델의 두 가지 주요 인간 독성 요인, 콜레라 독 소 및 독 소 coregulated pilus, zebrafish 식민지 또는 병 인12필요 하지 않습니다 있습니다. 그러나,이 수 또는 볼 수 소설 V. cholerae 식민의 식별 수 있도록 또 다른 장점으로 요소와 다른 V. cholerae
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공개 사항
저자는 공개 없다.
감사의 글
감사 합니다 멜로디 Neely, 존 앨런, 바젤 Abuaita, 그리고 zebrafish 모델을 개발 하는 데 그들의 노력에 대 한도 나 Runft. 여기에서 보고 된 연구는 알레르기 국립 연구소와 전염병의 수상 번호 R21AI095520 및 R01AI127390 (제프리 H. Withey) 하에서 건강의 국가 학회에 의해 지원 되었다. 내용은 전적으로 저자의 책임 이며 반드시 국립 보건원의 공식 의견을 대표 하지 않는다.
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재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| Instrument | |||
| Shaker incubator | New Brunswick Scientific, Edison, NJ | Excella E25 | |
| Incubator | NUAIRE, Plymouth, MN | Auto Flow | |
| Spectrophotometer | Thermo, Waltham, MA | Geaesys 6 | |
| Vortex homogenizer | Minibeadbeater24 | 112011 | |
| 계량 기계 | Ohaus, Columbia, MD | Adventurer Pro | |
| Heat Stirer | Corning, Corning, NY | PC-420D | |
| 버너 | |||
| 자동 콜로니 카운터 | REVSCI | 120417B | |
| Materials | |||
| 400 ml 유리 비커 | Pyrex | ||
| 천공 뚜껑 | 의 구멍이 있는 마이크로팁 홀더 | ||
| Office Depot, Boca Raton, FL | D15-25-7008 | ||
| 어항 시스템 | Aquaneering, San Diego, CA | ||
| RO 정수기 | Aqua FX | TK001 | |
| 어망 | 마리나 | ||
| 생선 식품 | 테트라 지느러미 | ||
| 소금물 새우 | 레드 정글 브랜드 | O.S.I. 프로 80 | |
| 스티로폼 보드 | |||
| 핀 | |||
| 메스 | 파인 사이언티픽 도구, 포스터 시티, CA | 10000-10 | |
| 집게 | 파인 사이언티픽 도구, 포스터 시티, CA | 11223-20 | |
| Vannas 가위 | 파인 사이언티픽 도구, 포스터 시티, CA | 15000-11 | |
| 2ml 나사 캡 튜브 | Fisher Scientific, Hampton, NH | 02-681-375 | |
| 1mm 유리 구슬 | Bio Spec | 11079110 | |
| 퍼짐용 유리 구슬 | Sigma, St. Louis, MO | 18406-500G | |
| 페트리 플레이트 | Fisher Brand, Hampton, NH | FB0875713 | |
| 1.5ml 원심분리기 튜브 | Midsci, Valley Park, MO | AVSS1700 | |
| 50 ml 원심분리기 튜브 | Corning Falcon, Corning, NY | 352098 | |
| 시험관 | Pyrex | 9820 | |
| 유리 피펫 | Fisher Brand, Hampton, NH | 13675K | |
| 마이크로 피펫 | Sartorius Biohit, Gö ttingen, 독일 | m1000/m200/m20 | |
| 팁 | Genesee Scientific, San Diego, CA | 24-150RS/24-412 | |
| Chemicals | |||
| Instant Ocean salts | |||
| phosphate buffered Saline | VWR Life Science, Radnor, PA | K813-500ml | |
| 트리카인(에틸 3-아미노벤조에이트 메탄설포네이트 salt | Sigma, St. Louis, MO | A5040 | |
| 5-Bromo-4-chloro-3-indolyl-β-D-galactopyranoside | Sigma, St. Louis, MO | 10651745001 | |
| Schiff' s 시약 | Sigma, St. Louis, MO | 84655-250 mL | |
| 주기적 산 | Fisher Scientific, Hampton, NH | 10450-60-9 | |
| 돼지 위의 뮤신 | Sigma, St. Louis, MO | M2378-100G | |
| 소 혈청 알부민 | Fisher Scientific, Hampton, NH | 9046-46-8 | |
| Pierce 660nm 단백질 분석 시약 | Thermo, Waltham, MA | 22660 | |
| LB medium | |||
| Trypton | BD Biosciences, San Jose, CA | 211705 | |
| Teast Extract | BD Biosciences, San Jose, CA | 212750 | |
| NACL | Fisher Scientific, Hampton, NH | BP358-212 | |
| Agar | BD Biosciences, San Jose, CA | 214010 | |
| TCBS 한천 | BD Biosciences, San Jose, CA | 265020 | |
| DCLS 한천 | 시그마, 세인트루이스, MO | 70135-500gm | |
| Software | |||
| Microsoft office | |||
| Prism 5 |
참고문헌
- Harris, J. B., LaRocque, R. C., Qadri, F., Ryan, E. T., Calderwood, S. B. Cholera. The Lancet. 379 (9835), 2466-2476 (2012).
- Dutta, D., et al. Vibrio cholerae non-O1, non-O139 serogroups and cholera-like diarrhea, Kolkata, India. Emerging Infectious Diseases. 19 (3), 464-467 (201....
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