Vivo에서 간세포 암 종 개발에 중간 엽 줄기 세포의 잠재력을 탐험

Summary

여기, 우리는 vivo에서 암 모델 셀 시트 기술을 사용 하 여 개발 하는 프로토콜을 제시. 이러한 모델은 항 암 치료제의 평가 위한 매우 유용할 수 있었다.

Abstract

vivo 동물 모델을 모방한 인간의 암 중요 한 임상 정보를 제공 하는 다양 한 응용 프로그램을 가질 수 있습니다. Vivo에서 암 모델의 개발에 대 한 현재 사용 된 기술에는 상당한 제한이. 따라서, 본이 연구에서는 우리 셀 시트 기술을 vivo에서 암 모델 개발을 구현 하고자 합니다. 간세포 암 (HCC) 누드 쥐 HCC 셀 선 세포에서 만들어진 셀 시트를 사용 하 여 성공적으로 개발 됩니다. 암 셀 시트는 세포내 접착 및 세포 외 매트릭스 제어 층 상된 구조 형성을 통해 생성 됩니다. HCC 시트 이식 간 고 한 달 내 종양-베어링 동물 모델의 생성에 대 한 수 있습니다. 또한,이 암 모델 개발에서 중간 엽 줄기 세포 (MSC)의 역할은 조사. HCC 셀 라인 시트 외에 다른 두 셀 시트 만들어집니다: HCC 세포와 골 MSCs (BMMSCs)와 HCC 전지와 탯 MSCs (UCMSCs)의 시트의 시트. HCC 세포와 MSCs의 시트는 종양 방위 동물을 생산 할 수 있습니다. 그러나, MSCs의 추가 구성 된 종양의 크기 줄이고 종양 개발에 불리 한 영향이 사용된 MSCs의 소스에 따라 달라 집니다. 이 특정 MSC의 만든 셀 시트 종양 관리 및 제어에 활용 될 수 나타냅니다.

Introduction

HCC는 간 크게 빈약한 예 지와 관련 된 기본 암입니다. 매년, 거의 절반 백만 새로운 환자 진단 HCC, 간 암 환자 세계¹의 85%를 대표 하는. Hepatocarcinogenesis는 단일 형태의 질병; 오히려, 그것은 이외에 다른 histopathological 기능 및 유전자와 게놈 다양성, 질병의 모음 다양 한 전조 결과¹. 따라서, HCC에 대 한 효과적인 치료 전략의 개발의 주요 과제는 HCC 생물학의 제한 된 지식과이 복잡 한 질병을 이해 하는 것을 도울 수 있는 적합 한 실험 동물 모델의 부족. Vivo에서 동물성 모형 인간 암 모방 하는 후보 유전자를 선택 하 고 연루 조사 암 응답에 영향을 미칠 수 있는 다른 요인 뿐만 아니라 암 유도, 전조/예측 마커 식별에 필요한 치료 요원입니다.

시험관에 암 연구는 여전히 주요 한계에 연관 된다. 이 사실은 암 세포 기능의 그들의 비보에 문화에서 유지 될 때 많은 손실입니다. 세포 생체 외에서 결과 비보 전 설정에서 전체 조직 생리학의 부재에서 발생 하는 변경 합니다. 암 세포 세포 상호 작용 (실질, 면역, 맥 관 ....

Protocol

프로토콜의 킹 사우드 대학 윤리 위원회 동물 보호 지침을 따릅니다. 수술 절차, 마 취약, 그리고 동물에 이용 된 다른 약물 킹 사우드 대학 윤리 위원회에 의해 승인 됩니다. 모든 실험 작업은 적절 하 게 훈련 된 직원에 의해 수행 됩니다.

1. 셀 시트 건설

1. Undiluted 태아 둔감 한 혈 청 (FBS)와 문화 요리 (3.5 cm 온도 응답 문화 요리) 코트와 접시의 모든 표면을 커버를.
   참고:이 단계는 단층에는 세포의 성장을 지원 하 고 셀 집계를 방지 이후 셀 시트의 분리에 대 한 중요 하다.
2. 포함 하는 5% CO₂ 와 95% 공기 습도 분위기에서 37 ° C에서 24 시간을 위한 요리를 품 어.
3. 코팅된 요리에서 초과 FBS를 제거 하 고 요리 1 시간 이상 실 온 (RT)에서 건조를 허용 합니다.
4. 3 셀 정지 준비: 1 x 10⁶ HepG2 세포, BMMSCs, 1 x 10⁶ HepG2 세포 및 (BMMSCs와 UCMSCs에 4: 1의 비율)에서 UCMSCs 가진 1 x 10⁶ HepG2 세포.
5. 씨 각 레이블이 접시에 적절 한 세포 현 탁 액.

Results

쥐에 이식된 셀 시트 tumorigenicity:

이식 후 1 개월 쥐의 간은에서 모든 이식된 셀 시트 종양 (그림 3)를 개발 했습니다. HepG2, HepG2/BMMSC, HepG2/UCMSC 셀 시트에서 개발 된 종양의 평균 크기 4.5 cm, 4 cm, 및 2.5 cm, 각각¹⁰했다.

간 조직의 조직학 분석:

되며 고 오신 (H & E) 비 이식 쥐 hepatocytes와 간은 서.......

Discussion

연구의 광범위 한 금액은 적절 한 비보에 전 임상 동물 모델 인간의 암과 유사한 개발에 전념 하 고 있습니다. 현재, 암 동물 모델을 만드는 데 사용 하는 주요 접근 유전 공학 및 세포 이식¹¹를 포함 한다. 유전자 변형된 동물 모델 식별 및 기본 약물 유발 독성 분자 메커니즘을 이해 뿐만 아니라 대상 유전자의 유효성 검사에 대 한 좋은 도구입니다. 그러나,이 모델은 관련 된 몇 가지 제한 사항이; 예를 들어, 주어진된 유전자의 수정 예상된 형¹²항상 발생 하지 않습니다. 세포 이식 접근은 더 일반적으로 동물, 암 유발 하는 데 사용 됩니다 그리고 그것은 암 세포 현 탁 액의 주입을 포함 한다. 그러나,이 간단 하 고 편리한 접근에는 그것의 자신의 단점이 있습니다. 세포 현 탁 액을 생성 하는 효소 소화 단계는 암 세포를 수확 하 사용 됩니다. 이 줄어 듭니다 engraftment 효율 이식된 세포의 접착 단백질의 일부의 손실에.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
<강력한>시약
FBS	Gibco/Invitrogen	10270106
DMEM 고혈당	시그마	D5671-500ML
페니실린/스트렙토마이신	생명 기술	15070063
멸균 생리적 식염수	Sigma	S0817-1GA
인간 HepG2 세포주	ATCC, USA	HB-8065
인간 골수 MSC 세포주	PromoCell, USA	C-12974
인간 탯줄 조직 MSC	PromoCell, USA	C-12971
케타민 50%	Rompun, 바이엘
자일라진 2%	Rompun	23076-35-9
알파딘®   용액.	리야드 제약	LBL0816
일회용품:
15mL 폴리프로필렌 고선명도 PP 원심분리기 튜브	팔콘
352097 여과지(멤브레인)가 있는 3.5cm 멸균 UpCell 배양 접시Sigma		174904-1CS
100-1000 µ 엘   피펫 팁	시그마	CLS4868-1000EA
기본 절차 드레이프	써모피셔	PMD5293.0
Equipment
Plus 피펫, 가변 용량	Eppendorf®   연구®	Z683779-1EA
조직 배양 인큐베이터 37 ° C, 5% CO2	모든 브랜드
생물학적 안전 캐비닛	모든 브랜드
조직 배양 인큐베이터 20°°C; C, 5% CO2	모든 브랜드
멸균 수술 도구 및 누드 쥐:
펜치
가위
메스
나일론 봉합사  5-0	Accutome	AB-3854S	모노필라멘트, 란셋
1 ml 투베르큘린 주사기	Fisher Scientific	14-826-88
누드 쥐	찰스 강