Vivo에서 부분 간 엔지니어링을에서 위한 쥐를 기초로 새로운 수술 기법

요약

우리 더 vivo에서 부분 간 미래에 엔지니어링을 공부에 대 한 전제 조건으로 쥐에서 vivo에서 단일 간 엽 관류 모델에 대 한 새로운 수술 기법을 설정 합니다.

초록

기관 공학 이식에 사용 될 수 있다 간 장기 대체를 생성 하는 새로운 전략 이다. 최근, vivo에서 간 엔지니어링, vivo에서 기관 decellularization repopulation 다음, 포함 떠오르고 있다 유망 접근 방식으로 비보 전 간 공학에. 그러나, 수술 후 생존 하지 달성 했다. 이 연구의 목적은 vivo에서 간 엔지니어링에 대 한 전제 조건으로 선택적 간 엽 관류 쥐에서 vivo에서 의 새로운 수술 기법을 개발 하는 것입니다. 우리는 왼쪽된 측면 엽 통해서만 회로 바이패스를 생성합니다. 다음, 왼쪽된 측면 엽은 heparinized 염 분을 끼얹는다. 실험 4 그룹으로 수행 됩니다 (n = 그룹 당 3 쥐) 20 분, 2 시간, 3 h, 그리고 4 헤 생존의 다른 관류 시간으로 색상의 거시적 보이는 변화와 혈액 세포의 조직학 결정된 부재에 따라는 포털 3 인조와 사인, 성공적인 모델 설립에 대 한 지표로 서 가져온 것입니다. 왼쪽된 측면 엽의 선택적 관류, 후 우리는 왼쪽된 측면 엽, 실제로, 아닙니다 빨강에서 희미 한 노란색을 관찰 합니다. 조직학 평가에서 아니 혈액 세포는 문맥, 중앙 정 맥, 그리고는 사인의 지점에 표시 됩니다. 왼쪽된 측면 엽 막힌된 혈관을 재개 후 빨간색으로 바뀝니다. 12/12 쥐 1 주일 이상에 대 한 절차를 살아 남았습니다. 우리는 1 주일 이상 긴 생존 기간 단일 간 엽 관류 비보에 대 한 수술 모델을 보고 처음. 이전 게시 된 보고서와 달리 여기에 제시 된 기법의 가장 중요 한 장점은 관류의 70%의 모든 절차를 통해 유지 됩니다. 이 기술은 설립 vivo에서 부분 간 엔지니어링을에서 위한 쥐, decellularization 및 recellularization를 포함 하 여 기초를 제공 합니다.

서론

장기 이식에 대 한 표시는 지속적으로 확장 하 고 있다. 반면, 장기 기부 속도 장기의 전반적인 품질은 감소, 이식에 대 한 수요 증가에 지도. 간 이식 대기자 명단에 추가 하는 후보자의 수 증가를 계속 (예를 들어, 미국에서 11,340 환자는 2016 년, 추가 된 10,636에에서 비해 2015)¹. 상당한 노력에도 불구 하 고 사용 가능한 기관의 수는 임상 요구를 충족 하지 않습니다. 때문에 간 질환의 발병 률 증가, 많은 환자는 기증자 기관 전에 이식 대기자 명단에 말기 간 질환 다 사용할 수 있습니다. 간 기증자 이식에 대 한 거 대 한 수요를 충족 하기 위해 간 조직 엔지니어링 원칙을 적극적으로 되는 사용 하 여 대체 방법을 추구². 요즘, 간 엔지니어링의 새로 개발된 된 생물 기술 잠재적으로이 부족을 극복할 수 있습니다.

간 엔지니어링 두 단계로 구성 됩니다: acellular 비 계, 발판의 repopulation 다음의 세대. 생물 학적 acellular 간 비 계를 얻으려면 explanted 간 끼얹는다 시스템을 통해 혈관에서 간 세포 물질을 제거할 수 있습니다 또는 비 이온 세제입니다. 대부분의 이전 연구....

프로토콜

주택 및 실시 하는 모든 절차는 독일 동물 복지 입법에 따라 했다. 모든 거 즈, 덮 음 옷, 그리고 수술 악기 압력가 마로 소독 하 고 수술을 하기 전에 준비 있습니다. 모든 절차는 무 균 조건 하에서 수행 됩니다.

1. 수술에 대 한 쥐의 준비

1. 유도 챔버에 쥐를 놓고 쥐 완전히 마 취 때까지 약 3 분, 0.5 L/분 100% 산소와 4% 증발 isoflurane 쥐를 anesthetize.
2. 유도 실에서 쥐를가지고 고 그것의 몸 무게를 측정.
3. 복 부에 수술의 모피를 면도.
4. 마 취를 추가 2 분 동안 isoflurane 챔버에 동물 다시를 넣으십시오.
5. 부정사 위치에 작업 테이블에 쥐를 놓습니다.
6. 쥐의 입 지역에 마 취 마스크를 수정 하 고 2% 증발 isoflurane와 0.5 L/min의 유량에서 100% 산소의 지속적인 가스 교류와 취 동물 유지.
7. 테이프의 조각을 가진 사지를 수정 합니다.
8. 건조를 방지 하기 위해 두 눈에 수 의사 연 고를 적용 합니다.
9. 관리 buprenorphine 0.05 mg/kg 피하, 작업 기간 동안 통증을 완화 하.
10. 70% 알코올의 2....

결과

12 남자 (세 12-13 주) 루이스 쥐 선택적 간 엽 관류의 효과 평가 하는 데 사용 했다. 실험 4 개의 그룹에서 수행 되었다 (n = 3 쥐 그룹 당). 20 분의 다른 관류 기간을 사용 하 여, 2 시간, 3 시간, 4 시간, 위에서 설명한 단계를 따라 우리가 성공적으로 달성 단일 엽 관류 vivo에서 .

Vivo에서 왼쪽된 측면 엽의 관류:

정확한 해 부 식별 왼쪽된 문맥 왼쪽된 측면 간 정 맥 및 성공적인 왼쪽된 문맥 및 왼쪽 측면 간 정 맥 cannulation heparinized 염 분으로 재 관류 후 확인할 수 있습니다. 성공적인.......

토론

차단 하 고 cannulating 유체 유입으로 카 테 터와 함께 왼쪽된 문맥 및 유체 출구로 다른 카 테 테 르와 왼쪽된 측면 간 정 맥, 우리 성공적으로 생성 한 vivo에서 유체 바이패스 왼쪽된 측면 엽 내 나타내는 기술은 cannulation에 대 한 혈관의 작은 크기와 출혈 발생의 위험이 높은 매우 도전 이다, 비록 그것이 가능 합니다. 4 시간 긴 관류 기간을 겪고도 쥐 쥐가 수술을 견딜 수 보여주는 적어도 1 주 살아 났다.

다음 섹션에서 우리는 3 기술적으로 가장 어렵고 중요 한 단계 및 성공적으로 그들을 마스터 하는 방법을 설명 합니다. 첫째, 분리 하 고 대상된 포털 정 맥 주변 간 실질과의 긴밀 한 공간 관계 때문 왼쪽된 포털 정 맥 결 찰 하는 과정에서 혈관의 절연 출혈 발생의 높은 위험이 있다. 마이크로 포 셉이 위 보다는 사용 하 여 신중 하 게 찢 어 떨어져 연결된 avascular 조직을 둘러싼 왼쪽된 문맥에 의해 왼쪽된 문맥을 분리 .......

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
관류 펌프
Perfusor VI	B. Braun, Melsungen
카테터
Versatus-W  카테터	Terumo	SR+DU2419PX	24G, 0.74× 19mm
베르사투스-W  카테터	Terumo	SR+DU2225PX	22G, 0.9× 25mm
마이크로 수술 기구
마이크로 가위	F· S&미드닷; L	번호 14058-09
마이크로 serrefine	F· S&미드닷; L	No.18055-05
마이크로 클램프 어플리케이터	F· S&미드닷; L	번호 18057-14
스트레이트 마이크로 펜치	F&미드도트; S&미드닷; L	번호 00632-11
곡선형 마이크로 펜치	F· S&미드닷; L	번호 00649-11
마이크로 바늘 홀더	F· S&미드닷; L	번호 12061-01
일반 수술 기구
표준 시저	F· S&미드닷; L
모기 클램프	F· S&미드닷; L
톱니 모양의 집게	F· S&미드닷; L
이빨이 있는 집게	F· S&미드닷; L
바늘 홀더	F&미드닷; S&미드닷; L
봉합사
4-0 프롤렌	에티콘
4-0 에티콘*II	에티콘
6-0 실크	에티콘
11-0 폴리아미드	에티콘