토끼 모형에 있는 최적 배아 단계에서 최소 침 습 배아 이식 및 배아 확산

요약

보조 생식 기술 (ARTs)은 결과를 개선 하 고 관련 위험을 줄이기 위해 지속적인 평가를 하 고 있습니다. 이 원고는 인간 재생의 이상적인 동물 모델로 서 토끼의 사용을 허용 하는 효율적인 냉동 보존 프로토콜을 가진 최소 침 습 배아 전달 절차를 설명 합니다.

초록

시험관 내 배아 배양 또는 배아 동결 보존과 같은 보조 생식 기술 (ARTs)은 출산 및 출생 후의 결과와 함께 자연 개발 패턴에 영향을 미칩니다. 예술 응용 프로그램의 무해 함을 보장 하기 위해 동물 모델에 대 한 연구가 필요 합니다. 또한, 마지막 단계로, 태아 발달 연구는 완전 한 건강 한 자손을 개발 하는 그들의 능력의 평가를 요구 합니다. 여기에서 자 궁으로의 배아 전달은 예술 관련 실험을 수행 하는 데 필수적입니다.

토끼는 한 세기 이상 동안 포유류 재생을 연구 하는 모델 유기 체로 사용 되었습니다. 인간 종과 그것의 작은 크기 및 낮은 유지 관리 비용에 대 한 계통 적 근접성 외에도 유도 배 란, 인간과 유사한 초기 배아 개발의 연대기 및 짧은 임신과 같은 중요 한 생식 특성을가지고 있습니다. 그것은 우리가 쉽게 예술 응용 프로그램의 결과를 연구 할 수 있도록. 더욱이, 예술 (예를 들어, 내과 세포 정자 주사, 배아 배양 또는 동결 보존)은이 종에서 적절 한 효율로 적용 된다.

본 기사에 제시 된 복 강경 배아 전달 기술 및 동결 보존 프로토콜을 사용 하 여, 우리는 1) 쉽게, 최소 침 습 적 기술 및 2) 토끼의 장기 저장을 위한 효과적인 프로토콜을 통해 배아를 전달 하는 방법을 설명 배아는 시간-유연한 물류 용량 및 샘플을 수송 할 수 있는 능력을 제공 한다. 다른 발달 단계에서 토끼 배아를 양도 한 후 얻어진 결과는 모 룰라가 토끼 배아 회복 및 전달에 이상적인 단계 임을 나타냅니다. 따라서, 외 과적 배아 전달은 수술 절차를 정당화 해야 합니다. 또한, 토끼 모 루 애는 성공적으로 유리 화 되 고 복 강경 전이 되어 기술 된 기술의 효과를 입증 합니다.

서론

인간 불모를 우회 하거나 높은 유전 가치를 가진 가축의 보급을 개량 하 고 동물성 유전 자원을 보전 하는의 목표를 가진, 일련의 기술의 세트는, 초 배 란과 같은 원조 재생산 기술 이라고 불렀습니다 시험관 내 시비, 배아 배양 또는 냉동 보존은^1,2로 개발 되었다. 현재, 호르몬 치료는 난소를 자극 하 고 다 수의 배 승 난소 모 낭을 생성 하기 위하여 주어 집니다¹. 이들 여 포 로부터 채취 된 난 모 세포는 냉동 보존 되거나 대리 모 (³)로 이송 될 때까지 시험관 내에서 성숙, 수정 및 개발 될 수 있다. 그러나, 이러한 치료법 중에,가 및 zygotes는 이러한 조건^4,5에서 생존 하기 위해 배아 적응이 필요할 수 있는 일련의 비 생리 적 과정에 노출 된다. 이 적응은 유전자 발현 및 발달 프로그래밍⁶에서 배아 변화를 허용 하는 초기 배아가 소성으로 인해 가능 합니다. 그러나, 이러한 수정은 성인이 될 때까지 배아 발....

프로토콜

이 연구에서 사용 된 모든 실험 절차는 동물 실험을 위한 지침 2010/63/EU EEC에 따라 수행 되었으며, 시고요 Politècnica 드 València의 동물 들과 실험을 위한 윤리적 위원회에 의해 검토 및 승인 되었습니다. 스페인 (연구 코드: 2015/VSC/완두콩/00170) XGD, FMJ, MPVC 및 JSV는 동물 실험을 위해 발렌시아 정부 행정부가 발급 한 인증 인증서를 보유 하 고 있습니다. XGD는 실험 중에 동물의 복지와 보살 핌을 현장에서 감독 하도록 승인 된다.

1. 배아 이식

1. 수용자 여성 준비
   1. 성적으로 성숙한 여성만 사용 (> 4.5 개월).
   2. 1 주일 전, 여 포 성장 및 향상 된 여성 감수 성을 시작 하는 16 시간 빛/8 h 어둠 정권에 여성을 적응.
   3. 여성을 선택 하 고 외 음부의 색을 관찰 합니다. 외 음부는 turgid와 붉은 경우, 여성은 수용.
   4. 의 단일 근육 주사에 의해 의사 임신을 유도 (배 란) 1 µ g의 buserelin 아세테이트 (생식 샘 자극 호르몬의 합성 아날로그) 체중에 관계 없이.
      참고: 일반적으로 0.8 µ g는 중간 크기의 토끼 (4-5 kg)에서 배....

결과

최소 침 습 복 강경은 생식 연구를 위한 가장 좋은 모델 동물 중 토끼를 배치 하는 신선 또는 유리 화 된 배아의 전송. 표 1 은 전이 된 배아의 상이한 발달 단계 (도 4)에서의 신선한 ET의 결과를 보여준다. 출생 시 생존 율 (새끼를 초래 하는 배아의 퍼센트)은이 논문에 기술 된 복 강경 기법의 효능을 입증 했습니다. 더 높은 값은 초기에 또는 조밀한 morulae의 모 룰라 단계에 있는 배아를 가진 ET가 수행 될 때 달성 되었습니다. 이러한 결과 들에 기초 하 여, 우리는 이러한 배아 들의 유리 화 후 생존 율을 입증 하기 위해 두 번째 실험을 수행 하였다. 따라서, 표 2 에서 우리는 동시에 회복 된 토끼 모 울 래를 전사 한 후 얻어진 결과를 보여주고, 양호한 정도의 다짐 정도에 도달한 배아 들을 분화 여부를 구별 한다. 출생 시 생존 율은 다.......

토론

최초에 기록 된 살아있는 출생 사건부터 배아⁹까지,이 기술과 토끼 종은 생식 연구에서 매우 중요 한 역할을 하 게 되었습니다. 게다가, 조작, 생산, 냉동 보존 등 을 포함 하는 배아 연구 연구는 건강 한 전체 기간 자식을 생성 하는 배아 용량의 평가를 마지막 단계로 요구 합니다. 따라서 배아 전달 기법은^13,28에 필수적 이다. 수 년에 걸쳐, 태아를 모계 자 궁으로 이전 하기 위하여 처음에 채택 된 외과 방법은¹³종의 대다수에 있는 더 적은 침략 적인 방법으로 점차적으로 대체 되 고,¹⁴,^{15, 21 ,}

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
소 혈청 알부민 (BSA)	VWR	332
부프레노르핀 염산염	Alvet Escartí	626	면허가 있는 수의사의 지시를 받아야 합니다.
Buserelin 아세테이트	시그마 Aldrich	B3303
클로르헥시딘 디글루코네이트 비누	Alvet Escartí	0265DCCJ500B
클로르헥시딘 디글루코네이트 용액	Alvet Escartí	0265DCCA500B
CO2	Air Liquide	99921	CO2 N48.
CO2 인큐베이터	Fisher scientific	15385194
Dimethyl Sulfoxide	Sigma Aldrich	W387509
Dulbecco' s 인산염 완충 식염수(DPBS)	Sigma Aldrich	D5773	염화칼슘 없음.
전기 면도기	Oster Golden A5	078005-140-002
내시경 카메라	Optomic Spain S.A	OP-714
내시경 투관구 실리콘 리플릿 밸브	Karl Storz 내시경 Ibé 리카 SA	30114GK	경량 투관침 모델.
엔로플록사신	알벳 에스카르트&아큐트;	9993046	면허가 있는 수의사의 지시를 받아야 합니다.
Epicraneal 바늘 23G	Alvet Escartí	514056353	작은 바늘도 사용할 수 있습니다.
경막외 카테터	Vygon corporate	187.10
경막외 바늘	Vygon corporate	187.10
에틸렌 글리콜	시그마 Aldrich	102466-M
눈 연고	Alvet Escartí	5273
케타민 염산염	Alvet Escartí	184	면허가 있는 수의사의 지시를 받아야 합니다.
복강경 장비	Karl Storz 내시경 Ibé 리카 SA	26003 AA	홉킨스® 복강경, 0º-mm 직선 관찰 복강경, 길이 30cm, 5mm 작업 채널.
광원	Optomic Spain S.A	Fibrolux 250
액체 질소	공기 액체	P1505XXX
기계적 CO2 insufflator	Karl Storz Endoscopia Ibé 리카 SA	엔도플래터®
Meloxicam	Alvet Escartí	9993501	면허가 있는 수의사의 지시를 받아야 합니다.
페트리 접시, 35-mm	Sigma Aldrich	CLS430165-500EA
플라스틱 드레싱 (Nobecutan)	IBOR medica	7140028
플라스틱 빨대 0.25 mL	IMV - 기술	6431
Povidone 요오드 솔루션	Alvet Escartí	02656DPYS500S
가위	ROBOZ	RS-5880	일반 수술 등급의 강철 작은 직선 가위가 작동합니다.
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멸균 장갑	Alvet Escartí	087GL010075
멸균 가운	Alvet Escartí
멸균 마스크	Alvet Escartí	058B15924B
빨대 플러그	IMV - 기술	6431
설탕	시그마 Aldrich	S7903
주사기, 1-mL	Fisher scientific	11750425
주사기, 5-mL	Fisher scientific	11773313
요로 카테터	IMV - 기술	17722
Waterbath	RAYPA	BAE-4
Xylazine	Alvet Escartí	525225	면허가 있는 수의사의 지시를 받아야 합니다.
토끼	Universitat Politè cnica de Valè ncia	Line A	Line V 또는 Line HP와 같은 다른 모계 라인을 사용할 수 있습니다.

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