다 발성 골 수 Xenografts 노 그 쥐에서의 복합 발광 및 양자 방출 단층 촬영/컴퓨터 단층 촬영 영상

요약

여기 우리가 사용 발광, x 선, 그리고 양전자 방출 단층 촬영/컴퓨터 단층 촬영 이미징 공부 어떻게 억제 mTOR 활동 영향이 종이 식 모델에서 골 engrafted 발성 종양. 이로써 순수 관련, 비-침략 적, 및 복합 요법 골 engrafted 발성 종양에서 vivo에서대상의 안티 발성 효과의 분석.

초록

다중 골 수 종 (MM) 종양이 골 수 (BM)에 engraft 그리고 그들의 생존 및 진행이이 microenvironment 내 존재 하는 복잡 한 분자 및 세포 상호 작용에 따라 결정 됩니다. 그러나 BM microenvironment 쉽게 복제 생체 외에서잠재적으로 많은 생체 외에서 그리고 vivo 전 실험 모델의 생리 적인 관련성을 제한 될 수 없습니다. 이러한 문제는 luciferase (루크)의 종이 식 모델을 이용 하 여 극복 될 수 있다-transfected 8226 m M 세포 특히 마우스 뼈대에 engraft 것입니다. 이러한 마우스 적절 한 기판 주어진, D-소, 종양 성장 및 생존에 치료의 효과 종양 비보를 제작한 (BLI) 발광 이미지에 변화를 측정 하 여 분석할 수 있습니다. 이 씨 데이터 결합 2 대사 마커를 사용 하 여 양자 방출 단층 촬영/컴퓨터 단층 촬영 (PET/CT) 분석-의하여-2-(¹⁸F) 불 화-D-포도 당 (¹⁸F FDG)은 시간이 지남에 종양 물질 대사에 변화를 모니터링 하는 데 사용 됩니다. 이러한 이미징 플랫폼 종양/BM microenvironment 내의 여러 비 침 투 적인 측정을 허용 한다.

서론

MM 악성 플라스마 B 세포는 BM을 침투 하 고 뼈 파괴, 빈 혈, 신장 손상, 그리고 감염을 일으킬의 구성 하는 불 치의 질환입니다. MM 모든 혈액 악성 종양¹ 의 10%-15%를 만들고 뼈대²를 포함 하는 가장 빈번한 암 이다. MM의 개발은 결국 BM³귀환 하기 전에 림프 조직의 어린 싹 센터에 설정 되는 긴 플라즈마 세포의 종양 전이에서 유래한 다. 매우 이질적인 틈새;는 BM 특징 이다 다양 하 고 중요 한 세포 구성 요소, 낮은 포₂ (hypoxia), 광범위 한 vascularization, 복잡 한 세포 외 매트릭스, 그리고 모두의 m M tumorgenesis⁴기여할 cytokine과 성장 인자 네트워크의 영역을 포함 하 여. 따라서, 엄격 하 게는 BM에 engrafted 종양 특징 전파 MM이 종이 식 모델의 개발 m M 병리학 vivo에서^5,6공부를 매우 강력 하 고 임상 관련 도구 것입니다. 그러나, 수많은 기술적 장애물 적용 하기 어렵고 비용이 많이 드는 ....

프로토콜

아래 설명 하는 모든 동물 절차 기관 동물 관리 및 사용 위원회 (IACUC)의 큰 로스 앤젤레스 VA 의료 시스템에 의해 승인 하 고 살 균과 병원 체 없는 조건 하에서 수행 되었다.

1. 8226 셀 Luciferase 표현 (8226-루크)의 준비

1. 8226, 10% 태아 둔감 한 혈 청 (FBS)와 95% 공기와 5% 이산화탄소 (CO₂)를 포함 하는 습도 분위기에서 37 ° C에서 1% 페니실린 스 보충 RPMI 1640 매체에 인간의 MM 셀 라인을 유지 합니다.
2. 안정적인 뤽 표현 기자 8226 세포 생성 transfecting 1 x 10⁶ 8226 셀 hygromycin (100-350 mg/mL)와 선택 이전 다음 luciferase 기자 벡터와 설명⁶.
3. 표준 조건 하에서 무 균 자란 2-3 주 동안 매일, 안정적 transfected 8226 셀 라인의 설립을 생성 될 때까지 매체를 변경 셀을 유지 합니다.
4. 버퍼링 하는 인산 염 (PBS)의 1 x 10⁶ 페 셀/100 µ L에서 생체 외에서 luciferase 활동 luciferase 기판, D-소를 추가 하 여....

결과

초기 파일럿 연구에서 끄 덕/SCID 쥐로 IV 주사 8226 뤽 셀의 개발 하지 않았다 BM engrafted MM 종양, 편평 MM 종양은 쉽게 형성 (100% 성공률) 비록. 반면, 노 그 쥐로 8226 셀 4 과제 생성 (15-25 일) 이내 종양에 해골 (간 또는 비장 등 비 골격 조직에만 거의 형성된 종양). 골격에 종양 실제로 동물을 검사 하 여 시각적으로 확인 수 없습니다, 이후 다른 방법 성공적인 종양 engraftment BM (그림 1) 내에서 종양의 위치를 확인 하 고 간주 했다. Miyakawa 그 외 여러분 에 의해 보고서와 마찬가지로 ⁹, 인간의 IgG, 8226 세포에 의해 생산 ELISA (데이터 표시 되지 않음)를 사용 하 여 도전된 노 그 쥐의 혈 청에서 검출 될 수 있지만 이러한 데이터만 engraftment 하지 위치 또는.......

토론

M M^6,9,11,,1213의 전 임상이 종이 식 모델의 다양 한에 불구 하 고 BM microenvironment 내 종양/BM 상호 작용을 공부 하는 능력 유지 곤란 ¹⁴. 여기서 설명 8226 루크 노 그 쥐의 골격에 종양 세포의 신속 하 고 재현성 engraftment 허용.

이 프로토콜의 중요 한 단계 참여 luciferase 표현 MM 셀 라인의 설립 및 체 외에서luciferase¹⁵의 안정적인 식의 확인. 일단 셀 라인 설립 되어, 노 그 쥐 IV 주입에 의해 도전 되 고 뼈대.......

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
8226 인간 골수종 세포주	ATCC	CCL-155
NOD. Cg-Prkdcscid Il2rgtm1Wjl/SzJ Mice (NOG)	Jackson Labs	5557
VivoGlo Luciferin substrate	Promega	P1041
Hypoxyprobe-1Kit	HPL	HP1-100
PE-CD45 (clone H130)	BD Biosciences	555483	에서 human CD45+ tumor cells 를 확인하기 위한 유세포 분석에 사용됩니다
	기술	70527	절제 뼈의 면역 조직 화학에 사용되는 1 차 항체
염소 안티 토끼 IgG (HRP 접합)	ABCAM	ab205718	절제 뼈의 면역 조직 화학에 사용되는 Seconday 항체
이중 루시 페라 아제 리포터 분석 시스템	Promega	E1910
pGL4.5 루시 페라 아제 리포터 벡터	Promega	E1310
IVIS 루미나 XRMS In Vivo 이미징 시스템	Perkin Elmer
Sofie G8 PET/CT 이미징 시스템	Perkin Elmer

BM exudate rabbit anti-human CD45 (clone D3F8Q)Cell Signaling.