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방법 논문

22C 3를 사용 하 여 반대로 PD L1 항 체 생 검 및 비 작은 세포 폐 암 환자에서 세포학 샘플에 집중

10.3K 조회수

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DOI:

10.3791/58082

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2018년 9월 25일

이 논문에서

요약

안정적이 고 재현 가능한 방식으로 pembrolizumab, 치료에 대 한 폐암 환자의 자격을 평가 하는 전세계 실험실의 기능을 확장 하려면 우리 22C 3 항 체 집중에는 널리 사용 하는 분석 결과 개발 생 검과 세포학 표본에 대 한 immunohistochemical autostainer

초록

Pembrolizumab monotherapy PD-L1-표현 고급 비 작은 세포 폐암 (NSCLC) 환자의 첫 번째 및 두 번째 라인 치료에 대 한 승인 되었습니다. PD L1 식 PD L1 immunohistochemistry (IHC) 22C 3 동행자 진단 분석 결과 함께 테스트 점수 (TPS), 종양 조직에 검증 된 종양 비율을 제공 하. 우리는 최적화 된 실험실 개발 테스트 (LDT) 생 검과 세포학 표본에 대 한 널리 IHC autostainer에 22C 3 항 체 (Ab) 집중을 사용 하는 개발. PD L1 TPS 120 쌍된 전체 종양 조직 단면도 및 생 검 견본 평가 되었다 고 70 쌍 생 검 및 세포학 샘플 (기관지 세척, n = 40; 흉 울트라 바이올렛 effusions, n = 30). 집중 기반 LDT 보여주 세포학 생 (~ 100%)와 높은 색인 속도 (~ 95%) 표본 두 TPS에서 PD L1 IHC 22C 3 동반자 분석 결과 사용 하 여 결정 하는 PD L1 IHC 식에 비해 22C 3 Ab 컷 포인트 (≥1%, 50%). 22C 3 Ab 집중을 사용 하 여 두 종양 조직 및 세포학 표본, PD L1 식을 결정 하려면 여기, 최적화 된 LDT NSCLC 환자의 치료에 대 한 자격을 평가 하기 위해 실험실 전세계의 능력을 확장 됩니다. pembrolizumab monotherapy 안정적이 고 재현 가능한 방식입니다.

서론

최근 임상 시험 pembrolizumab는 인간 답게 단일 클로 널 IgG4 카파 isotype 항 체 (PD-1) 프로그램 된 세포 죽음 1 사이의 상호 작용을 차단 하 고 그것의 ligands, PD L1 및 l 2 PD 환자의 치료에서의 효능 입증 고급 NSCLC1,2,,34.

현재, pembrolizumab 두 치료 순진한 환자 50 %와 표 피 성장 인자 수용 체 (EGFR) 없거나 anaplastic 림프 종 키나 제 (ALK) 게놈 종양 착오3의 PD L1 식이 TPS에에서 PD L1 표현 NSCLC의 치료에 대 한 승인 이전에 대 한 ≥11의 PD L1 TPS와 환자 치료.

PD L1 단백질 표정 IHC에서 검색 널리 예측 바이오 마커 분석 결과로 안티-PD-1/PD-L1 요법를 사용 했다. Pembrolizumab 임상 시험에서 포 르 말린 고정 파라핀 포함 (FFP....

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프로토콜

모든 절차 지역 윤리 위원회에 의해 승인 되었습니다 (인간 연구 윤리 위원회, 센터 Hospitalier 대학 드 니스/Tumorothèque BB-0033-00025).

참고:이 프로토콜은 특별히 조정 (autostainer 여기,로 테이블의 자료를 참조 함) 상용 자동된 IHC 염색기에 22C 3 항 체 집중의 사용에 대 한 종양 생 검 및 세포학 샘플.

1입니다. 종양 조직 샘플의 준비

  1. 종양 조직 10% 중립 버퍼링 된 포 르 말린 (NBF)는 카세트에 수정 했다.
    참고: 인접 폐 종양에서 종양 조직은 상계, 온건한 진정에서 pulmonologist, 또는 폐 전문가 의해 수행에 의해 일반적으로 얻어진 다. 주변 병 변 및 확산 폐 질환에 대 한 transbronchial 또는 바늘 생 검 표시 됩니다. 이 절차는 일반적으로 수술 실 또는 집중 치료 단위에서 수행 됩니다.
  2. 파라핀에 카세트를 포함 합니다.
    참고: 고정 관류 또는 바로 다음 해 부, 침수에 의해 달성 될 수 있다 하며 일반적으로 8-10 h. 통 볼륨 15-20 x 견본 볼륨 보다 높은 해야 합니다. 그것은 overfixation 항에의 하면 때문에....

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결과

여기, 그리고 세부 사항에 설명 된 대로이 그룹의 최근 간행물10,11에서 제시 하는 절차를 사용 하 여 최적화 된 LDT 외과 수술 환자에서 120 보관 FFPE NSCLC 생 샘플 임상 검증 되었다 파스퇴르 대학 병원에서 생 검 또는 절제 니스, 2007 년 3 월 및 3 월 2016 사이. 또한, 세포학 샘플의 PD L1 식의 평가 위한 TPS 70 쌍된 조직 생 검 견본 및 기관지 세척에서 준비 된 셀 블록에 평가 되었다 (n = 40) 또는 흉 막 울트라 바이올렛 effusions (n = 30) (수집는 파스퇴르에서 대학 병원, 7 월 2014와 11 월 2016 사이 좋은). 모든 슬라이드 갓 잘라 고 24 시간 이내 스테인드.

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토론

우리 22C 3 PD L1 항 체 집중을 사용 하 여 해당 임상 검증 된 상용 테스트10,11에 그것을 비교 하 여 최적화 된 LDT를 확인 했습니다. 22C 3 집중 항 체 기반 LDT 생 (~ 100%)과 세포학 (~ 95%) 표본 ≥1 %TPS 50% 포인트 인하 하는 TPS에서 PD L1 IHC 22C 3 분석 결과 사용 하 여 결정 하는 PD L1 IHC 식에 비해 사이 높은 일치 율을 보였다. 최근 폐암의 연구에 대 한 국제 협회에 의해 권장로 PD L1 긍정적인 영역 같아야 약 10 PD L1 부정적인 샘플, 10 PD L1 긍정적인 예제, 및 20 샘플의 선형 동적 범위는 임상 검증 PD L1 IHC8을 테스트 합니다. 우리는 120 biopsies을 70 세포학 샘플에 유효성 검사 연구 수행. 전반적으로, 일치는 양성, 표본, 또는 종양 조직학 유형의 컷오프 TPS .......

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공개 사항

저자는 공개 없다.

감사의 글

이 연구는 머 크 & 주식, Inc., 케 닐 워스, 뉴저지, 미국에 의해 후 원했다. Funders 연구 설계, 데이터 수집 및 분석, 결정 게시 또는 원고의 준비에 아무런 역할을 했다.

....

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재료

이 논문에 사용된 재료 목록
이름회사카탈로그 번호댓글
NovaPrep HQ1NovacytNA세포학 검체용 방부제 솔루션
Novaprep® HQ+ BNovacytNA점액 분해 솔루션
Tissue-Tek VIP 6Sakura6042 VIP 6
Tissue-Tek TEC 5 조직 임베딩 콘솔 시스템Sakura5229 TEC 5
현미경 유리 슬라이드 SuperFrost PlusThermo Fisher Scientific4951PLUS4
DL-디티오트레이톨 분말Sigma-AldrichD3801
Heidolph Multi Reax Vortex ShakerThermo Fisher Scientific13-889-410
Shandon CytoblockThermo Fisher Scientific7401150
22C3 anti-PD-L1 농축 항체Agilent Dako#M365329
PD-L1 IHC 22C3 pharmDxAgilent DakoSK006
Autostainer Link 48Agilent DakoAS480
BenchMark ULTRA 자동 염색기, Ventana#750-600
OptiView HQ, 범용 링커Ventana#760-700
OptiView, HRP 멀티머Ventana#760-700
OptiView 증폭 H2O2Ventana#760-099
OptiView 증폭기Ventana#760-099
OptiView 증폭 멀티머Ventana#760-100
OptiView DABVentana#760-700
OptiView 구리Ventana#760-700
Hematoxylin IIVentana#790-2208
블루잉 시약Ventana#760-2037
Cell Conditioning 1 (CC1)Ventana#950-124
티슈텍 필름 커버슬리퍼사쿠라4742
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참고문헌

  1. Garon, E. B., et al. Pembrolizumab for the treatment of non-small-cell lung cancer. The New England Journal of Medicine. 372 (21), 2018-2028 (2015).
  2. Herbst, R. S., et al.

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재인쇄 및 허가

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