Acellular과 세포 폐 종양 전이 연구 모델

요약

여기, 선물이 비보 전 폐 암 모델을 모방한 종양 진행의 단계 및 기본 종양을 격리 하는 데 도움이 프로토콜 순환 종양 세포, 및 전이성 병 변.

초록

종양 진행의 다른 지점에서 종양 세포를 분리 하는 것이 어렵습니다. 우리는 비보 전 폐 모델 자연 매트릭스와 종양 세포의 상호 작용 및 영양분의 지속적인 흐름이 보여줄 수 있는 뿐만 아니라 정상적인 세포 구성 성분으로 종양 세포의 상호 작용 및 자연 매트릭스 모델을 만들었습니다. Acellular 비보 전 폐 모델 쥐 심장-폐 블록 분리 및 decellularization 프로세스를 사용 하 여 모든 셀을 제거 하 여 만들어집니다. 오른쪽 주 기관지에서 연결 하 고 종양 세포를 주사기에 의해 기관에 배치 됩니다. 셀을 이동 하 고 왼쪽된 폐. 폐 폐 동맥 폐쇄 회로에 미디어의 지속적인 흐름을 받는 생물에 배치 됩니다. 왼쪽된 폐에 성장 하는 종양은 1 차 종양. 순환 미디어에 격리 되어 종양 세포는 종양 세포를 순환 하 고 오른쪽 폐에 종양 세포는 전이성 병 변. 세포질 비보 전 폐 모델 decellularization 과정을 건너뛰는 의해 만들어집니다. 각 모델은 다른 연구 질문에 대답을 사용할 수 있습니다.

서론

암 전이 대부분 암 관련 된 죽음 뒤에 범인 하 고 암을 싸우는 노력에 궁극적인 도전 포즈. 이 방법의 전반적인 목표는 3 차원 (3 차원) 세포 성장 뿐만 아니라 흐름의 차원 4 차원 (4d) 세포 문화 프로토콜을 디자인 하는 것입니다. 그것은 전이 과정 [즉, 주 종양, 순환 종양 세포 (CTCs), 및 전이성 병 변]의 세 가지 단계를 나타냅니다.

지난 3 년간 전세계의 과학자 들은 다른 암 치료 또는 진행 없는 생존의 가능성을 향상에 전이성 진행을 기본 메커니즘을 이해 하는 정보 비교할 수 없는 풍부한 나왔고. 일부 암, 유방암, 등의 임상 관리 개선 크게¹; 그러나, 폐 암 등 일부 암에는 여전히 가난한 생존²있다. 생체 외에서 그리고 vivo에서 동물 모델에 새로운 통찰력을 질병의 발전을 지탱 하는 메커니즘을 생성 되었습니다. 지난 몇 년 동안, 셀 라인 파생 xenografts (CDX) 및 환자 파생 xenografts (PDX)의 더 많은 관심으로 그들이 조직학 특징, 행동 기본 인간 종양³, 성장 속도 등 많은 관련 기능을 유지 되었습니다. 특성, 그....

프로토콜

동물 실험에 대 한 프로토콜 기관 동물 관리 및 사용 위원회 휴스턴 감리교 연구소에 의해 승인 하 고 모든 규정, 법령, 지침 및 정책에 따라 수행 했다.

1. 쥐 폐 수확

1. 케 타 민 (100mg/kg) 및 xylazine (10 mg/kg)의 측면에서의 복 (IP) 주입에 의해 4에 6-1 주일-오래 된 남성 Sprague-Dawley 쥐를 anesthetize. 뒷 다리 발가락 집게로 슬쩍 때 움직임의 부재를 확인 하 여 마 취를 확인 합니다.
2. 10 분 후 가슴 및 복 부를 면도 하 고 액체 면봉으로 피부를 닦아냅니다.
3. 집게와을 따기로 일회용 메스와 incising에 의해 피부를 제거 합니다. 메스와 incising에 의해 흉 강을 연 후가 위로 왼쪽 흉 곽의 앞쪽 측 및 횡 경 막의 오른쪽을 절단 하 여 양자 thoracotomy를 수행 합니다.
   참고: 이것은 비 생존 수술입니다.
4. 흉 곽을 잡고 고 27 G 바늘을 사용 하 여 뛰는 심장의 우 심 실에 헤 파 린 (1000 단위/mL)의 2 개 mL를 주입.
   참고:이 폐에 혈전의 어떤 형성이 되지 것입니다.
5. 완전히가 위 흉 곽을 제거 하 고 혈액이 밖으로 나오는 때까지 환기, 좌 심 실에서....

결과

폐 쥐에서 수확 그대로 맥 관 구조 및 포¹¹ (그림 3A 와 3B)를 유지 합니다. Decellularization, 시 등의 콜라겐, fibronectin, 엘라 스 틴, acellular 폐의 세포 외 기질 구성 요소¹¹ (그림 3C, 3D, 3E및 3F) 유지 됩니다. decellularization 연결 되며 고 오신 (H & E)에 의해 관찰 될 수 있는 폐에 네이티브 쥐 세포의 완전 한 제거 및 DNA 분석¹¹ DNA 양을 ( 에 있는 감소를 보여주는 셀의 부재를.......

토론

Ex vivo 4 차원 폐 종양 성장 및 전이 실험실 설정에서 공부 하는 기회를 제공 한다. 네이티브 폐 매트릭스는 복잡 한 시스템 정상 조직에 지원을 제공 하 고 유지 하는 세포 세포 상호 작용, 세포-매트릭스 상호 작용, 세포 분화, 그리고 조직 조직입니다. 그것은 종양의 성장에 미치는 영향 및 다른 세포와의 상호 작용 연구를 어떤 종양 microenvironment 구성 요소를 추가 하는 기회를 제공 한다.

폐 수확 비보 전 4 차원 폐 모델에 대 한 중요 한 단계입니다. decellularization 동안는 시 약의 자유로운 흐름에 영향을 미칠 수 있습니다 폐에 혈액 응고 흉부 개통 후 헤 파 린 주입 관리에 지연 될 수 있습니다. 적절 한 홍 조 heparinized PBS를 가진 무색 액체 환기에서 올 때까지 하는 것이 세포 모델과 특히 중요 합니다. 뛰어난 베 나 정 맥의 주의 절단은는 실바에 게 어떤 해 든 지 방지 하는 것이 중요.......

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
Sprague Dowley rat	Harlan	206M	남성
클로르헥시딘 면봉	Prevantics, NY, USA	NDC 10819-1080-1
Heparin	Sagent Pharmaceuticals, Schaumburg, IL, USA	NDC 25021-400-10
18게이지 바늘	McMaster Carr, USA	75165A249
2-0 실크 넥타이	Ethicon, 샌 앤젤로, TX, 미국	A305H
Masterflex L/S 펌프	Cole-Parmer, Vernon Hills, IL, USA	EW-07554-80
Masterflex L/S 펌프 헤드	Cole-Parmer, Vernon Hills, IL, USA	EW-07519-05
Masterflex L/S 펌프 카트리지	Cole-Parmer, Vernon Hills, IL,	EW-07519-70
Tygon Tube	Cole-Parmer, Vernon Hills, IL, USA	14171211
MasterFlex 펌프 튜브	Cole-Parmer, Vernon Hills, IL, USA	06598-16
암 루어 잠금 커넥터	Cole-Parmer, Vernon Hills, IL, USA	45508-34	75165A249
수 루어 잠금 커넥터	Cole-Parmer, Vernon Hills, IL, USA	45513-04
블랙 나일론 링	Cole-Parmer, Vernon Hills, IL, USA	EW-45509-04
정맥 주사 세트	CareFusion	41134E
황산나트륨(SDS)	Fisher Scientific	CAS151-21-3
트리톤 X-100	시그마-알드리치	X100-1L
항생제	Gibco	15240-062
실리콘 산소공급기	Cole-Parmer, Vernon Hills, IL, USA	ABW00011	Saint-GoBain-Wire
mesh	1164610105	Lowes	New York 와이어
여성 루어 러그 스타일 TEE	Cole-Parmer, Vernon Hills, IL, USA	45508-56
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